端粒酶逆转录酶基因的结构特点及转录调控

调节端粒酶活性的最主要成份是端粒酶逆转录酶（hTERT) ,它往往在肿瘤发生的早期巳表达,故对其研究具有重大的临床意义,近年hTERT基因启动子区巳克隆鉴定,研究发现在其核心启动子区含有多个转录因子结合位点,体内外的转录因子结合在这些位点和“CPG岛”甲基化、组蛋白去乙酰化以及hTERT转录变异体的自身调节等构成了对hTERT基因转录调控的复杂系统。研究hTERT基因的转录调控将对肿瘤的发生发展、诊断和治疗提供重要的帮助。     

PinX1的原核表达、纯化及其与hTERT的相互作用简

目的：原核表达人Pin2/TRF1结合蛋白X1（PinX1）,确定该蛋白与人端粒酶逆转录酶（hTERT）催化亚基的相互作用。方法：用PCR方法从乳腺文库中扩增PinX1基因的编码序列,克隆至pET-32a载体构建重组质粒pHis-PinX1,经双酶切鉴定后转化大肠杆菌BL21并进行诱导表达,SDS-PAGE和Western印迹检测His-PinX1的表达;用His磁珠纯化His-PinX1,在人肾胚细胞293T内检测His-PinX1与hTERT的相互作用。结果：扩增得到980bp的PinX1基因;Western印迹检测表明,相对分子质量约57x10。的His-PinX1获得表达,且纯化的His-PinX1与hTERT具有相互作用。结论：表达并纯化得到了与hTERT相互作用的His-PinX1,为深入研究PinX1的功能奠定了基础。     

逆转录病毒及对生物制品污染的安全问题

自80年代发现引起人类淋巴细胞白血病和艾滋病等疾病的病源体都属于逆转录病毒以来,大量文献对逆转录病毒及其逆转录酶的研究进行了报道.随着人们越来越重视生物制品的外来因子污染问题[1],而对于生物制品如疫苗等的生产用动物源细胞基质逆转录病毒的安全检测一直是WHO以及药品监管部门关注的重点.本文就这方面的研究进展作一综述.     

高中生物学中与DNA有关的6类酶

高中生物学中涉及到与DNA有关的6类酶：DNA酶、解旋酶、DNA聚合酶、逆转录酶、限制性核酸内切酶和DNA连接酶。通过查阅文献,对这6类酶的有关知识作一综述,并提出了相应教学建议,以期对同行的教学提供帮助。     

HIV-1 CN54 Pol P51抗原高效表达、纯化、复性及在抗体检测中的应用

为获得可溶性高纯度HIV-1中国株CN54PolP51抗原,将携带CN54polp51基因的重组质粒pTHioHisA51转化大肠杆菌BL21codonplus-RIL,用IPTG进行诱导表达。用Chelating SepharoseFF-Ni亲和层析柱及DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析柱纯化目的蛋白,采用透析复性法得到可溶性抗原,Western blotting检测目的蛋白。用纯化的P51抗原蛋白标记辣根过氧化物酶及包被酶标板进行双抗原夹心法ELISA检测。结果显示P51以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的50%,经两步层析和透析复性,目的蛋白纯度大于95%。Western blotting和双抗原夹心法ELISA检测均显示了良好的灵敏度和特异性。本研究可以为HIV-1疫苗研究和开发检测试剂提供支持。     

鸡的端粒生物学研究

端粒是线性染色体末端的核蛋白"帽子"结构,其长度由端粒酶来维持。端粒对于维持基因组的稳定、防止细胞衰老和肿瘤发生具有重要的作用。鸡是遗传和发育研究的经典模式动物,随着鸡基因组学研究的不断深入,鸡的端粒和端粒酶研究取得了很大进展。文章综述了近年来鸡的端粒生物学研究进展,并提出了未来的研究方向。     

重组腺病毒Ad-GFP-C197的构建及其抗肿瘤活性研究

端粒酶是维持端粒长度的重要组成部分,是肿瘤发生的标志物之一。构建了能表达人端粒酶逆转录酶(h TERT)C端936-1132氨基酸片段(C197)的重组腺病毒Ad-GFP-C197,并观察其对Hela细胞增殖的影响。结果显示,Ad-GFP-C197感染Hela细胞后,采用免疫印迹法检测到C197在细胞内得到高效表达。此外,AdGFP-C197明显抑制Hela细胞的增殖,诱导细胞凋亡,并且降低Hela细胞中端粒酶活性。上述研究为进一步研究h TERT C末端功能打下基础,并为肿瘤的生物治疗提供新的思路。     

磁珠分离DNA技术检测HIV-1逆转录酶基因耐药性突变

HIV-1逆转录酶基因突变导致的耐药性严重影响了药物对病人的治疗效果,耐药性突变的检测对于指导合理用药具有重要意义。本工作发展了一种检测HIV-1逆转录酶基因耐药性突变的新方法。在两步MS-PCR方法的基础上,引入磁珠分离DNA技术并结合酶联免疫吸附检测方法(ELISA)检测逆转录酶基因耐药性突变T215F和Y181C。结果显示： MS-PCR结合磁珠分离技术和ELISA具有较高的灵敏度和特异性,阳性/阴性比值（P/N值）达到要求,突变型模板检测限为5%左右,耗时短且能进行高通量检测。无论在HIV-1耐药性突变还是其它的点突变检测中,该方法都具有较好的临床应用前景。