谷胱甘肽的合成与其活性初步评价北大核心CSCD

先采用Fmoc固相多肽合成法,以2-Chlorotrityl chloride(2-CTC)树脂做载体,DIC/HOBt做缩合剂,逐步缩合得到全保护谷胱甘肽树脂,以TFA/EDT/m-Cresol为裂解液脱除保护基团,粗肽经半制备反相高效液相色谱法纯化得α-GSH、γ-GSH纯品,后将所得γ-GSH纯品分别采用空气,双氧水,碘氧化得GSSG,经纯化得GSSG纯品,合成的α-GSH、γ-GSH纯品纯度达99%,GSSG纯度达98%,利用标准品,经外标法计算总收率分别为60%、64%、57%。并观察三者对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤的治疗效果结果显示都能显著降低ALT与AST的活性,且与注射用γ-GSH没有显著性差异,可以为工业化生产提供借鉴。     

多杀菌素对天敌昆虫白蛾周氏啮小蜂的毒力评估

[目的] 生物防治与化学防治相结合是害虫综合防治的重要策略,蛹寄生蜂白蛾周氏啮小蜂是一种重要的天敌昆虫,在美国白蛾的生物防控中起关键作用。本研究旨在评估农林生产中常用的广谱、低毒杀虫剂多杀菌素对白蛾周氏啮小蜂的安全性。[方法] 采用药膜法检测多杀菌素对小蜂的毒力,并检测亚致死浓度多杀菌素处理后,小蜂体内解毒酶活性的变化。[结果] 多杀菌素对小蜂无短期（1 h）触杀作用,但随施药时间延长,其对小蜂的毒杀作用增强,25 mg·L^-1多杀菌素施药2 h后,可诱导约18.67%小蜂个体死亡。施药4 h后,不同浓度多杀菌素对小蜂的毒杀作用差异最明显,低浓度（5 mg·L^-1）多杀菌素可诱导11.33%小蜂死亡,而中、高浓度多杀菌素（≥ 15 mg·L^-1）可诱导77.33%~88.00%个体死亡。施药6 h后,LC₅₀值达7.44 mg·L^-1,安全系数为0.31,属高风险性农药。此外,亚致死浓度多杀菌素可明显诱导小蜂羧酸酯酶活性提高,对乙酰胆碱酯酶与谷胱甘肽-S-转移酶活性具有剂量效应。[结论] 多杀菌素对白蛾周氏啮小蜂的毒力作用较强,在美国白蛾生防区需慎用。     

辅色剂对紫淮山花色苷稳定性的影响及其热降解动力学研究

为探究谷胱甘肽和没食子酸对紫淮山花色苷的辅色作用,本文研究了谷胱甘肽和没食子酸对紫淮山花色苷降解率、热稳定性及色差的影响。试验表明,谷胱甘肽和没食子酸能有效抑制花色苷的降解,且最佳添加量分别为0.03%和0.2%。在此添加量条件下,紫淮山花色苷在50、70、90℃水浴中的热降解均符合一级降解反应动力学规律。添加谷胱甘肽和没食子酸的紫淮山花色苷降解速率常数(k)小于对照组,半衰期(t 1/2)和活化能(Ea)高于对照组,说明谷胱甘肽和没食子酸能够增强花色苷的热稳定性。色差测定结果表明,经谷胱甘肽和没食子酸辅色后的紫淮山花色苷,其明度指数(L*)和色品指数(a*、b*)较对照组变化缓慢,颜色的稳定性增强。     

小地老虎谷胱甘肽-S-转移酶AiGSTs1的分子特性及其对杀虫剂胁迫的响应

[目的]鉴定小地老虎Agrotis ipsilon sigma家族谷胱甘肽-S-转移酶(GST)基因,明确其编码蛋白质的催化活性,阐明该基因在小地老虎不同发育期、不同组织及在毒死蜱和高效氯氟氰菊酯胁迫下的表达模式,为深入探究小地老虎GST在杀虫剂解毒代谢中的功能提供理论基础.[方法]利用同源检索方法从小地老虎转录组中鉴定GST基因,利用原核表达系统表达重组蛋白并使用试剂盒检测其活性,使用实时荧光定量PCR技术分析基因的表达模式.[结果]从小地老虎转录组中鉴定了一个编码sigma家族GST的cDNA序列,命名为AiGSTs1.其编码的AiGSTs1蛋白含有谷胱甘肽结合位点和底物结合位点,具有GSTs的典型特征.在大肠杆菌中成功表达了重组AiGSTs1蛋白,测得此蛋白不仅具有谷胱甘肽转移酶活性,还具有过氧化物酶活性.毒死蜱和高效氯氟氰菊酯均可抑制重组AiGSTs1蛋白的活性.AiGSTs1在供试的小地老虎不同发育期和组织中均有表达,但在蛹期和幼虫脂肪体中表达量最高.使用LD5o剂量毒死蜱和高效氯氟氰菊酯处理小地老虎幼虫后,AiGSTs1的表达水平显著上升.[结论]本研究明确了小地老虎AiGSTs1的序列、所编码蛋白的活性和表达模式.毒死蜱和高效氯氟氰菊酯能够诱导AiGSTs1表达水平上调,表明该基因可能在这2种杀虫剂的解毒代谢中起重要作用.     

化学突变具有底物结合部位的单克隆抗体制备含硒抗体酶

开发了一种制备抗体酶的新方法。用二硝基氯苯（ＤＮＣＢ）专一地与谷胱甘肽（ＧＳＨ）的巯基反应,合成出半抗原ＧＳＨ－Ｓ－ＤＮＰ。用戊二醛将半抗原偶联到牛血清白蛋白（ＢＳＡ）上,制成全抗原。再用标准的单抗制备法获得具有ＧＳＨ结合部位的单抗（４Ａ４ＩｇＧ）。用苯甲基磺酞氟（ＰＭＳＦ）和Ｈ２Ｓｅ相继处理该单抗,则将单拉结合部位上的丝氨酸（Ｓｅｒ）突变成硒代半胱氨酸（ＳｅＣｙｓ,因而在单抗结合部位上引入了谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基团。突变后的单抗具有ＧＰＸ活性,其活力已达到天然ＧＰＸ的数量级水平。动力学行为也与天然ＧＰＸ类似。这种新的含硒抗体酶有优于ＧＰＸ的一些特点。     

外源NO对NaCl胁迫下黄瓜（Cucumis sativus L.）幼苗生长和谷胱甘肽抗氧化酶系统的影响

采用营养液水培,研究了外源一氧化氮(NO)对黄瓜(Cucumis sativus L.)幼苗生长和叶片谷胱甘肽抗氧化酶系统的影响.结果表明,正常生长条件下添加NO能促进黄瓜幼苗生长,而添加NO信号传递途径关键酶鸟苷酸环化酶(cGC)抑制剂亚甲基蓝(MB-1)显著抑制了黄瓜幼苗的生长;添加NO显著缓解了盐胁迫对黄瓜幼苗生长的抑制,提高了叶片谷胱甘肽还原酶(GR)活性、脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)活性、抗坏血酸过氧化物酶(APX)及还原型谷胱甘肽(GSH)、抗坏血酸(ASA)含量,降低了氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量,提高了GSH/GSSG,对单脱氢抗坏血酸还原酶(MDAR)活性无显著影响;NaCl胁迫下添加NO的同时添加MB-1抑制了GR活性的提高,GSH和ASA含量、GSH/GSSG均降低,GSSG含量提高,但对MDAR、APX和DHAR活性无显著影响,表明NaCl胁迫下NO对GR活性、GSH和ASA含量、GSH/GSSG的调节可能是通过cGC介导的,对MDAR无明显的调节作用,对DHAR、APX的调节还存在其它途径.     

氧化应激条件下G6PD对Raji细胞内GSH水平的影响

目的：观察体外培养的Burkit淋巴瘤（Raji）细胞在氧化应激条件下细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）对还原型谷胱甘肽（GSH）水平的影响。方法：体外培养Raji细胞,分别在G6PD活性被抑制及不抑制的情况下,检测细胞在酚嗪甲酸硫酯（PMS）作用后60min及360min时G6PD、谷胱甘肽还原酶（GR）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性及GSH水平。结果：在PMS作用下,Raji细胞内GSH水平在60min时显著下降（P〈0．01）而360min时可上升至对照组水平,G6PD及GPx活性持续显著升高（P〈0．01）而GR活性在360min时有显著升高（P〈0．01）;使用脱氢表雄酮（DHEA）抑制G6PD活性后,Raji细胞再在PMS作用下,细胞内各指标与PMS处理组比较,GSH水平显著降低（P〈0．01）,GPx活性在60min时显著增高（P〈0．05）而GR活性在360min时显著降低（P〈0．01）。结论：细胞在氧化应激条件下G6PD可能是Raji细胞内影响GSH水平的一个关键因子,对维持胞内GSH水平起重要的调节作用。     

谷胱甘肽通过抑制重型儿童哮喘巨噬细胞凋亡发挥保护作用

目的探究GSH对重型儿童哮喘气道巨噬细胞凋亡的影响。方法通过GSH检测试剂盒检测重型及轻型哮喘患儿巨噬细胞AM内的GSSG水平,并采用MTT法检测巨噬细胞AM的细胞活力,Western blot法检测凋亡相关蛋白Cleaved caspase 3的表达情况。结果 (1)重型哮喘患儿的吞噬细胞内GSSG水平显著高于轻型患儿;(2)哮喘患儿巨噬细胞AW的细胞活力与轻型哮喘患儿相比显著降低,且体外补充的GSH可以逆转细胞活力降低;(3)体外补充GSH可以逆转重型哮喘患儿巨噬细胞凋亡蛋白Cleaved caspase 3的表达增多。结论体外补充GSH可以抑制重型哮喘患儿气道巨噬细胞凋亡,发挥保护作用。     

抗旱性不同的两个大豆品种对外源H_2O_2的响应

两个品种的大豆叶圆片经１０－４ｍｏｌ／Ｌ和１０－３ｍｏｌ／Ｌ的Ｈ２Ｏ２处理１２ｈ后,超氧物歧化酶（ＳＯＤ）、过氧化氢酶（ＣＡＴ）与谷胱甘肽还原酶（ＧＲ）活性明显增加,但１０－２ｍｏｌ／Ｌ的Ｈ２Ｏ２处理却使这些酶活性降低。抗旱性较强的大豆品种小粒豆１号较抗旱性较弱的鲁豆４号能维持较高的叶绿素含量和较高的ＳＯＤ、ＣＡＴ及ＧＲ活性,对Ｈ２Ｏ２的抗性较强。５０μｍｏｌ／Ｌ的亚胺环已酮（ＣＨＭ）能消除Ｈ２Ｏ２对ＳＯＤ、ＣＡＴ与ＧＲ活性的刺激作用,而同样浓度的放线菌素Ｄ（ＡＭＤ）则不能。     

红霉素对支气管上皮细胞谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）的影响

目的：探讨红霉素对支气管上皮细胞16-HBE谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）和谷胱甘肽（GSH）的影响。方法：应用红霉素5μg／ml分别孵育细胞16-HBE细胞2h,8h,16h,24h。分别应用显色法,Westemblot和荧光定量PCR方法检测细胞内GSH,γ-GCS重链蛋白和mRNA的表达。结果：经红霉素孵育后,16、24h后,细胞内GSH、γ-GCS重链蛋白和mRNA的表达较对照组增加。结论：红霉素对支气管上皮细胞谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）和GSH的合成有上调作用。