过氧化氢酶催化梭曼水解机理的FTIR研究

利用傅里叶交换红外光谱法（ＦＴＩＲ）分析了过氧化氢酶在溶液中的二级结构和过氧化氢酶与过氧化氢、叠氮化钠以及梭曼作用后酶结构的不同改变,并比较了梭曼与细胞色素Ｃ和糜蛋白酶作用的结果。说明过氧化氢酶作为一种氧伦还原酶使过氧化氢分解或与叠氮化钠结合时,不导致酶空间结构的明显改变;但作为一种水解酶与梭曼反应后则出现酶分子的正常β－折叠结构降低和分子间聚合,而其构象变化与梭曼抑制糜蛋白酶的反应相似,揭示了过氧化酶催化梭曼水解机理的重要信息。     

叠氮钠、过氧化氢对SH-SY5Y细胞内硫氧还蛋白还原酶的影响

过度氧化应激是诱发许多神经退变病的重要因素。叠氮钠(NaN3)是线粒体有氧呼吸链细胞色素c氧化酶(COX)的特异性抑制剂,过氧化氢(H2O2)释放氧自由基造成氧化损伤,两者都可以用于氧化应激情况下神经元损伤模型的建立。硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)特异性的还原氧化型的硫氧还蛋白(thioredoxin,TRx),调节细胞中氧化还原的平衡。现以不同浓度NaN3或H2O2,处理人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞),建立损伤模型。通过MTT法、形态学方法检测SH-SY5Y细胞损伤程度。同时,通过Western blot定量法、免疫细胞化学法,检测损伤的SH-SY5Y细胞中TR含量的改变,观察TR在胞内的分布。实验表明,NaN3、H2O2,均以浓度依赖方式损伤SH-SY5Y细胞;TR分布于SH-SY5Y细胞的胞浆,表明TR是一种分泌蛋白,损伤后分布无明显变化。但一定浓度的NaN3作用后3h,胞内TR水平显著降低,即神经系统内呼吸链受损可抑制TR的表达,为神经退变病的防治提供了新的思路。     

脂联素抑制t-BHP诱导的内皮细胞凋亡作用及其可能机制探讨

目的：探讨重组脂联素对第三丁基过氧化氢（t-BHP）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）凋亡的影响及其相关的分子机制。方法：以HUVECs作为研究对象,给予t-BHP处理,模拟体外HUVECs氧化损伤细胞凋亡模型。在此基础上,用携带重组脂联素基因的腺病毒转染HUVECs,观察重组脂联素对t-BHP诱导的HUVECs凋亡的影响。用MTT法检测细胞增殖活力。Hochest/PI荧光染色检测细胞凋亡率。Western blot检测细胞凋亡相关蛋白p-JNK、JNK和Caspase 3表达水平的变化。结果：100 μmol/L的t-BHP作用8 h可诱导HUVECs发生凋亡。与对照组相比,t-BHP组p-JNK、active caspase 3表达增多（P<0.01）。HUVECs高表达重组脂联素基因后,可明显抑制t-BHP诱导的HUVECs凋亡（P<0.01）,下调t-BHP诱导的p-JNK、active caspase 3表达。结论：持续t-BHP氧化损伤可诱导HUVECs发生凋亡。重组脂联素可有效抑制t-BHP诱导的HUVECs凋亡,其机制与p-JNK、active caspase 3的表达下调有关。     

猪肝过氧化氢酶提取条件的研究

过氧化氢酶又称触酶,专一分解过氧化氢,溶于水,几乎不溶于乙醇、氯仿、乙醚。传统方法是从牛、马或人的红细胞、肝、肾中通过选择性沉淀法、缓冲液提取法、层析法等提取过氧化氢酶。本研究以猪肝为原料对过氧化氢酶的提取条件进行了试验。根据猪肝过氧化氢酶在pH5．3—8．0有活性、最适pH为7．0、溶于水的特性,采用水浸提法提取猪肝过氧化氢酶。先选择影响提取的主要因素(浸提时间、温度、料水比)分别作为单因素进行梯度实验,确定其合适范围;再通过进一步的正交实验得到猪肝过氧化氢酶提取条件的优化组合,并综合后处理中固液分离的要求,确定最佳提取条件,即料水比15、浸提温度25℃、浸提时间8h。     

外源精胺对小麦幼苗抗氧化酶活性的促进作用

外源精胺（Spm）降低了离体小麦叶片衰老时MDA的含量,且降低程度与精胺的浓度成正比。0.2mmol/L的精胺提高了小麦幼苗体内的超氧化物歧化酶（SOD）,过氧化氢酶（CAT）,过氧化物酶（POD）及抗坏血酸过氧化物酶（ASP）的活性。体内及体外试验表明精胺既可诱导SOD与POD的合成,又可直接作用于酶分子上以提高酶的活性;精胺对CAT合成仅能诱导,对已有酶活性无调节作用;精胺对ASP的合成无影响,却能促进已有酶的活性。     

不同种植行距的大穗型小麦品种'兰考矮早八'中几种与旗叶衰老有关的生理指标变化

在大田高产栽培条件下,检测不同种植行距的大穗型小麦品种‘兰考矮早八’开花后与旗叶衰老相关生理指标以及产量性状的结果表明,相对于传统行距为20cm而言,‘兰考矮早八’种植行距缩至15cm的花后旗叶中叶绿素降解减慢,丙二醛（MDA）含量下降,抗氧化系统酶活性增强,功能叶衰老减缓,穗粒重提高;行距缩至10cm时,尽管灌浆中后期过氧化物歧化酶（SOD）活性增强,但过氧化氢酶（CAT）和过氧化物酶（POD）活性下降,花后旗叶中叶绿素降解加快,MDA含量升高,植株衰老加快,穗粒重下降。     

转反义Trx s基因小麦灌浆期间籽粒和成熟后种子萌发期间的过氧化物酶和过氧化氢酶活性变化

检测转反义Trx s基因小麦灌浆期间籽粒和萌发期种子中过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性及其同工酶变化的结果表明,在籽粒成熟过程中,转基因小麦籽粒中POD和CAT活性均低于非转基因小麦:在小麦种子萌发过程中,转基因小麦种子中的POD和CAT活性也均低于非转基因小麦.     

KCl和NaCl对毕氏海蓬子生长和几种抗氧化酶活性的影响

50-200 mmol·L-1NaCl显著促进海蓬子生长和抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)]活性,与NaCl浓度相同的KCl明显抑制海蓬子生长和此3种酶的活性,但KCl下的超氧阴离子(O2-)和丙二醛(MDA)含量增加程度则明显高于同浓度的NaCI处理.据此认为,KCl伤害海蓬子的原因之一是抗氧化酶活性下降,不能及时清除活性氧,以致活性氧和MDA积累,引起质膜伤害,海蓬子生长受抑和生长量下降.     

大蕉果皮脱镁螯合酶的纯化和某些特性初探

用盐析法从大蕉果皮中初步纯化了脱镁螯合酶（Mg—dechelatase,MDCase）,纯化程度约为3．01倍。以叶绿酸（chlorophy1lin）为底物,MDCase Km值为13．47nmol&#183;L^-1;活性最适反应温度为50℃;在30～70℃内,活性较稳定,但在100℃下40min仍保持50％活性;在pH6．5～9,5范围内,随着pH的升高,酶活性逐渐增大。MDCase活性受还原剂β-巯基乙醇、二硫苏糖醇、抗坏血酸、Na2SO3（SO2）和还原型谷胱甘肽的抑制,而受过氧化氢激活;金属离子Cu^2＋、Zn^2＋、Fe^2＋、Ca^2＋和K^＋都在不同程度上抑制MDCase活性;不同的螯合剂效应不同,EDTA对酶活性有抑制作用,而柠檬酸却影响不大。     

Cu~(2+)胁迫条件对涡虫体内过氧化氢酶活性的影响

实验以0 .2 5、0 .5、1.0、2 .0mg·kg- 1 4种质量浓度的CuSO4 溶液培养东亚三角头涡虫(Dugesiajaponia) 4 8h后,提取其体内蛋白质并测定其过氧化氢酶(CAT)的活性。测定结果:涡虫体内蛋白的CAT酶活性依次为12 .5 9、2 3.74、18.37、18.72ū·mg- 1 。以自来水(实验室常规培养方法)为对照,其相应的酶活性为18.78ū·ｍｇ- 1 。实验结果表明:低浓度下Cu2 + 刺激CAT酶活性增加,而在高浓度下,由于涡虫耐受力的存在而使涡虫的CAT酶活性维持在正常水平(与对照组差异不大)。当Cu2 + 浓度达到4mg·kg- 1 时所培养的涡虫不到2 4h全部死亡。