营养条件和流加发酵对放射型根瘤菌（Rhizobium radiobacter）产辅酶Q10的影响

利用放射型根瘤菌WSH2601（Rhizobium radiobacter WSH2601）重点考察了葡萄糖、蔗糖、玉米浆和蛋白胨、添加物以及流加发酵对细胞生长和产辅酶Q₁₀的影响,结果表明, 葡萄糖和蔗糖适合于生产辅酶Q₁₀的最佳浓度分别为30 g/L和40 g/L;辅酶Q₁₀发酵时玉米浆和蛋白胨的最适浓度分别为11g/L和16g/L;添加蕃茄汁、玉米浆能提高发酵液的生物量,玉米浆、异戊醇、L-甲硫氨基酸等能促进辅酶Q₁₀的积累;与分批发酵相比,在7L罐上流加蔗糖其细胞生物量（DCW）和辅酶Q₁₀积累量增加,若在流加蔗糖的同时流加适当浓度的玉米浆能显著提高辅酶Q₁₀的产量,最大产量达到52.4 mg/L;最大生物量（DCW）和胞内辅酶Q₁₀含量（C/B值）分别达到26.4 g/L和2.38 mg/g-DCW,比不流加的分批发酵分别提高53%和33%,比只流加蔗糖分别提高24%和26%。     

酪丁酸梭菌代谢工程菌的构建及其发酵特性

酪丁酸梭菌Clostridium tyrobutyricum可以利用葡萄糖、木糖、纤维二糖、阿拉伯糖等多种底物进行产酸发酵,主要发酵产物为丁酸和乙酸,是一种适合于木质纤维素同步糖化发酵生产丁酸的菌种。将酪丁酸梭菌乙酸发酵关键基因取代为丁酸发酵关键基因来构建突变株,可使突变株丁酸发酵量增多,乙酸发酵量减少。分别获得来源于丙酮丁醇梭菌的丁酸代谢关键酶基因——乙酰乙酰辅酶A转移酶基因(thl)、来源于酪丁酸梭菌本身的乙酸代谢关键酶基因片段——磷酸转乙酰基酶基因片段(pta)和来源于质粒pIMP1的红霉素抗性基因(em)。将它们与质粒pUC19相连构建为非复制性质粒pUC19-EPT。通过电转化将其导入酪丁酸梭菌中。利用红霉素抗性平板筛选获得转化子,通过PCR验证发现,获得的突变株染色体上pta被thl替换。在以葡萄糖为底物的发酵中,突变株丁酸得率为0.47,较野生型增大了34%,乙酸得率为0.05,较野生型下降了29%。     

短时高温暴露对Q型烟粉虱存活和生殖适应性的影响

在室内将Q型烟粉虱Bemisia tabaci Q-biotype成虫在44℃下暴露1 h后观察成虫的存活率、产卵量、雌雄寿命和后代存活能力,以研究短时高温暴露对Q型烟粉虱生物学特性的影响。结果表明,Q型烟粉虱成虫在44℃下暴露1 h后的存活率为43.5%,暴露热激后的单头雌虫的产卵量为77.2粒,低于常温下(26℃)的产卵量(100.1粒);短时高温可显著缩短Q型烟粉虱成虫的寿命,在44℃下暴露1 h后Q型烟粉虱雌雄虫寿命分别为14.5 d和10.2 d,显著低于常温下(26℃)雌虫20.4 d和雄虫18.2 d;短时高温对Q型烟粉虱后代存活率和雌雄性比无显著影响,但其产卵高峰期延迟,产卵持续期缩短。以上结果表明,短时高温热激可影响Q型烟粉虱的生殖情况,造成Q型烟粉虱产卵量降低和寿命缩短,Q型烟粉虱雌虫耐热性强于雄虫。     

油菜叶绿体乙酰辅酶A羧化酶单交换表达载体的构建

根据已知序列设计引物,通过PCR扩增获得质体定位的乙酰辅酶A羧化酶的4个亚基的基因序列。先将该酶4个亚基的基因进行拼接,然后将这4个拼接好的片段,克隆到pMD18-T载体上,得到质粒pH BM714。再以质粒pHBM714 DNA为模板,用分别带有CpoI和Asc I酶切位点的引物进行PCR扩增,PCR产物在dTTP的保护下经T4 DNA聚合酶处理,与将质粒pHBM720DNA纯化后经CpoI和AscI双酶切后得到的大片段连接,连接产物转化大肠杆菌Xl_(10)-gold,得到正确的重组子命名为pHBM726。此质粒pH BM726,即为带有壮观霉素抗性基因(aadA)筛选标记的质体定位的乙酰辅酶A羧化酶基因油菜叶绿体单交换表达载体;在此载体中壮观霉素抗性基因(aadA)、乙酰辅酶A羧化酶的4个亚基的基因(ACC)和绿色荧光蛋白基因(gfp)共6个基因串联在一起,共用一个启动子序列,一起来进行表达;通过酶切检测、PCR验证和测序验证,均表明该表达载体构建成功。最后此载体在大肠杆菌中表达时,发现重组菌能够在含壮观霉素的培养基上生长,且在可见光下,能看到绿色荧光,表明壮观霉素抗性基因和绿色荧光蛋白基因均在大肠杆菌中成功表达;表达产物通过Western印迹验证表明组成乙酰辅酶A羧化酶的4个亚基的基因在大肠杆菌中成功表达。以上结果表明,该表达载体中串联排列的这6个基因均在大肠杆菌中成功表达。该研究结果可为质体定位的乙酰辅酶A羧化酶转叶绿体的研究奠定基础,为油菜油脂代谢研究提供参考。     

连云港沿岸浅海底质中有孔虫分布及对沉积环境的指示

据２９个底质样中４４个主要有孔虫属种,运用Ｑ型聚类分析,连云港沿岸浅海海底表层沉积中有孔虫可划分为二个组合：Ａ．Ａｍｍｏｎｉａｂｅｃａｒｉｖａｒｓ．－Ｅｌｐｈｉｄｉｕｍｍａｇｅｌａｎｉｃｕｍ组合;Ｂ．Ａｍｍｏｎｉａｂｅｃｃａｒｉｖａｒｓ．－Ｔｅｘｔｕｌａｒｉａｆｏｌｉａｃｅａ组合。其分布主要受研究区水团控制,可分别代表苏北沿岸流起始段和黄海水团边缘水体的有孔虫组合。以有孔虫为指示,文中对研究海区某些沉积环境特征作了讨论,如废黄河口悬沙对本区的影响,灌河口潮流作用和搬运,以及海底环境等。研究区灌河口及附近海域底质中有浮游有孔虫壳体分布,属首次报道。     

西藏发现Q型烟粉虱

【目的】调查西藏自治区烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)的发生情况。【方法】从西藏拉萨采集到烟粉虱各个虫态,采用3D数码显微镜观察所采集烟粉虱的形态特征,利用mt COⅠ分子标记检测烟粉虱的生物型。【结果】明确并详细描述了烟粉虱各形态特征,mt COⅠ分子标记检测显示西藏采集到的烟粉虱为Q生物型。【结论】在形态学鉴定的基础上,分子生物学鉴定该粉虱为Q型烟粉虱,这是Q型烟粉虱在西藏自治区发生的首次报道。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MRSA252辅酶A二硫化物还原酶缺失延缓苯唑西林的次级损伤效应

【目的】耐甲氧西林金黄色葡萄球菌在苯唑西林作用下,其辅酶A二硫化物还原酶表达上调2.3倍。本文研究苯唑西林对该酶缺失的金黄色葡萄球菌的杀菌效应。【方法】利用同源重组双交换技术对金黄色葡萄球菌进行基因敲除,并用质粒p OS1构建回补株;采用分光光度法检测菌株体外增殖能力;以时间-杀菌法考察苯唑西林对菌株杀菌效应;以2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐为探针检测胞内活性氧水平。【结果】辅酶A二硫化物还原酶基因敲除株较亲株生长缓慢(P0.05);20倍MIC浓度苯唑西林下敲除株的时间-杀菌曲线及胞内活性氧水平与亲株无显著性差异,5倍MIC浓度下敲除株的致死速率及胞内活性氧水平均较亲株下降。【结论】在较低浓度苯唑西林作用下,辅酶A二硫化物还原酶基因缺失降低胞内活性氧水平,减小杀菌速率,延缓次级损伤效应。     

东方蜜蜂微孢子虫LCFAL 2基因的分子特性及系统进化分析

本研究旨在解析东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae的长链脂肪酸辅酶A连接酶(long chain fatty acid COA ligase)基因LCFAL 2的分子特性,鉴定东方蜜蜂微孢子虫和其他物种的LCFAL 2蛋白的保守基序和结构域并进行系统进化分析,以期丰富东方蜜蜂微孢子虫LCFAL 2的信息,为深入开展相关功能研究提供基础。通过Expasy网站上的相关软件预测和分析LCFAL 2的理化性质、跨膜螺旋域、信号肽、磷酸化位点、二级结构和三级结构。使用MEME软件预测东方蜜蜂微孢子虫和其他物种LCFAL 2蛋白的保守基序。采用TBtools软件预测东方蜜蜂微孢子虫和其他物种LCFAL 2的结构域。通过Mega 11.0软件构建东方蜜蜂微孢子虫和其他物种的LCFAL 2的系统进化树。结果表明,东方蜜蜂微孢子虫LCFAL 2含有1 836个核苷酸,可编码611个氨基酸,分子式为C₃₁₄₅H₄₉₈₅N₈₁₃O₉₀₄S₂₃,分子量约为69.39 kDa,脂溶系数为96.8...     

葡萄糖和维生素C对普安银鲫卵黄囊仔鱼ACC、FAS及CPTⅠ活性的影响

本试验旨在探究普安银鲫(Carassius auratus )卵黄囊仔鱼发育过程中ACC、FAS及CPT I活性变化及葡萄糖和维生素C溶液分别浸泡对它们的影响。采用酶学方法研究了普安银鲫卵黄囊仔鱼过程中ACC、FAS及CPT I活性变化的变化特点。结果显示：在卵黄囊仔鱼发育过程中,对照组与维生素C组中ACC和FAS活性呈上升趋势,CPT I活性呈“下降-上升”变化趋势,而葡萄糖组ACC、FAS及CPT I活性均呈上升趋势,且3种酶的活性均显著高于对照组(P<0.05)。维生素C组ACC活性在内源营养期显著高于对照组,FAS活性在混合营养期和外源营养期显著高于对照组,CPT I活性在内源营养期和外源营养期显著高于对照组(P<0.05)。研究表明：ACC、FAS及CPT I在维持普安银鲫卵黄囊仔鱼发育中脂质代谢的动态平衡起着重要作用,15g/L的葡萄糖溶液可通过调节仔鱼体内脂质代谢酶的活性而形成新的脂质代谢水平,以满足仔鱼生长发育需要;而30mg/L的维生素C对维持仔鱼发育中体内正常的脂质代谢具有重要作用。