安徽庐江鸭乙型肝炎病毒LJ—76转染细胞系的建立

为建立鸭乙型肝炎病毒ＬＪ－７６的转染细胞系,将ＬＪ－７６病毒ＤＮＡ插入到ｐＵＣ１９的ＥｃｏＲ１位点上,分离得到含双拷贝ＬＪ－７６ＤＮＡ的重组质粒。通过磷酸钙沉淀方法,将经ＣｓＣｌ等密度离心纯化的ＬＪ－７６ＤＮＡ双体导入到人肝癌细胞ＢＥＬ７４０２中。收集转染细胞的培养液进行蔗糖密度离心,所得沉淀经检测发现含有ＬＪ－７６ＤＮＡ并具有特异性ＤＨＢＶ内源性ＤＮＡ多聚酶活性．     

乙型肝炎导向干扰素抗乙型肝炎病毒作用的体外实验研究

为提高ＩＦＮ抗ＨＢＶ疗效,实现感染细胞水平上的抗病毒性肝炎导向治疗,我们将抗ＨＢｓＡｇ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的Ｆ（ａｂ＇）２片段与ＩＦＮ文联,所得交联体称为乙型肝炎导向干扰素（Ｔ－ＩＦＮ）。应用ＨＢＶＤＮＡ转染细胞系（２,２,１５细胞）作模型,对Ｔ－ＩＦＮ进行了体外抗ＨＢＶ实验：通过检测细胞上清液ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ水平的变化,结合细胞存活率来评价其抗ＨＢＶ活性,并与游离ＩＦＮ和ＭｃＡｂ以及二者的混合法（Ｍｉｘ）进行比较。结果显示,经１２天作用,Ｔ－ＩＦＮ在细胞存活率、对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ抑制率及时ＨＢＶＤＮＡ抑制作用等方面均优于游离崳桑疲巍ⅲ停悖粒夂停停椋裕椋疲魏鲜逝ǘ任保担埃啊常埃埃埃桑眨恚欤谡庖慌ǘ认拢赴婊盥省荩罚梗叮ィ龋拢螅粒缫种坡剩担罚场叮罚叮ィ龋拢澹粒缫种坡剩矗埃薄担保玻ィ危模猎冢保妫缢揭韵拢欢嘤εǘ鹊模桑疲巍ⅲ停悖粒夂停停椋模危猎冢欤穑缢揭陨希龋拢螅粒绾停龋拢澹粒缫种坡示陀冢裕桑疲巍Ｌ崾荆砸唬桑疲慰赡茉诓《荆危模粮粗啤⒉《镜鞍缀铣杀泶锏榷嘞罨方谏戏⒒右种谱饔谩＃裕桑疲慰梗龋幔中Ч庞冢桑疲巍     

固相放射免疫分析一步法检测HBsAg试剂的研究

采用位点配对法筛选单克隆抗体,研制固相放射免疫分析一步法检测HBsAg药盒,对此药盒的各项性能指标及临床应用进行了全面的考核。实验证明,其为临床检验,尤其血源筛选,保证输血血液及血液制品的质量,切断乙型肝炎输血传染提供了技术上的保障。     

甾醇类脱氢酶的亲和标记

用亲和标记的方法研究重要生物蛋白专一结合位点的局部结构和功能是过去30年中出现的重要生物化学技术之一,而把这项技术用于甾醇类脱氢酶活性中心的研究还是70年代以后的事。自从Ganguly和Warren首次报道了用21-碘乙酸基可的松亲和标记20β一羟甾醇脱氢酶活性中心以来,又有一系列卤乙酸基甾醇类衍生物被合成出来用作亲和标记试剂。     

核酸的非同位素化学发光分析系统

核酸的非同位素化学发光分析系统王瑛（中国科学院动物研究所;北京１０００８０）近些年由于在核酸杂交检测中引人化学发光物质代替了传统所用的显色反应,大大改善了系统的灵敏度,从而将核酸的非同位素标记与检测技术提高到一个崭新的水平,被愈来愈多的实验室采用。化...     

我国生产工具酶的情况

1983年3月22日至3月28日中国科学院生物学部召开了生化试剂会议,着重检查了“1980年-1985年中国科学院遗传工程及分子遗传学工具酶研制、生产规划”。     

溶剂特性对三臂星型类弹性蛋白多肽相变温度的影响

本文利用SpyTag/SpyCatcher特性构建了三臂星型结构的类弹性蛋白多肽(elastin like polypeptides, ELPs),考察其在不同溶剂,如分子拥挤试剂、osmolytes及深共熔溶剂(deep eutectic solvents,DESs)中的相变温度及行为,并与含有相同ELPs重复数的线性ELPs120作对比。结果表明：在不同浓度拥挤试剂PEG2000作用下,两种结构的ELPs相变温度均降低,当其各自浓度均为25 μmol/L时,三臂星型ELPs相变温度降低3℃～13℃,而ELPs120相变温度仅降低1.5℃～10.8℃。此外,在添加PEG2000后,三臂星型ELPs相变缓慢;在不同类型和浓度的osmolytes溶液中,25 μmol/L三臂星型ELPs相变温度明显要比线性ELPs高8℃左右;在DESs体系中,三臂星型ELPs有类似与水溶液中的相变行为,且其相变温度受到抑制,另外三臂星型ELPs和ELPs120在DESs/PBS体系中,与在(氯化胆碱+尿素)/PBS体系中的相变行为一致,其中当DESs体积含量为50%,ELPs120相变温度是最低的。由于ELPs在非单一缓冲液体系中的相变行为不同,这丰富了ELPs作为纯化标签的应用,且在非单一缓冲液体系中因降低了相变温度,节约了纯化融合蛋白的经济成本,同时也为研究ELPs拓扑结构与其相变行为之间的关系奠定理论基础。     

人P2X7真核表达载体的构建及稳定转染细胞株的建立

目的：构建人P2X7基因的真核表达载体,并通过转染获得稳定表达P2X7分子的HEK293细胞株。方法：以人脑组织P2X7cDNA为模板扩增出P2X7基因,插入到真核表达载体pEGFP-N1中,构建重组质粒pEGFP-N1/P2X7。用X-fect试剂盒将重组质粒转染HEK293细胞,通过G418辅助荧光筛选建立稳定表达P2X7-EGFP细胞株。经流式细胞仪、Western blot和激光共聚焦显微镜检测,了解人P2X7在HEK293细胞中的表达水平及细胞内定位。结果：重组质粒pEGFP-N1/P2X7构建正确,建立了稳定表达人P2X7的HEK293细胞系。Western blot和流式细胞仪检测证实,P2X7在HEK293细胞系中成功表达,激光共聚焦显微镜检测显示P2X7-EGFP定位在细胞膜上。结论：重组载体pEGFP-N1/P2X7构建成功并建立了稳定表达人P2X7的HEK293细胞系,为进一步研究P2X7离子通道结构和功能奠定基础。     

小鼠精原干细胞不同转染方法效率的比较

本研究采用腺病毒感染、慢病毒感染、脂质体转染和电穿孔转化方法将含有绿色荧光蛋白（GFP）的质粒转入经过差异贴壁法初步分离纯化的小鼠精原干细胞(SSCs)中,转染48 h后通过流式细胞仪检测GFP阳性细胞比例比较4种方法在体外转染精原干细胞的效率.结果显示,脂质体转染效率最高仅为8.64%,不能满足对精原干细胞进一步实验的要求;电穿孔法效率最高达到25.27%,但转化后细胞大量死亡;腺病毒转染细胞的效率达到了32.4%;慢病毒转染效率最高,达到74.25%. 因此,慢病毒转染法是体外转染小鼠精原干细胞的有效方法.     

影响小鼠体细胞脂质体法转染效率的因素

We studied the effects of the amount of liposome and plasmid, exposure time of cells to the liposome-plasmid complexes, number of cell passages and cell types on GFP gene transfection of mouse somatic cells. The maximal GFP transgene expression (30.7%) was achieved when mouse fetal fibroblast cells (MFFC) at 70%-90% confluence of passage 3 were exposed for 6 h to the complexes of 4 microg liposome (LipofectAMINE) and 0.3 microg plasmid (pEGFP-N1). Under these conditions, we compared the effect of the number (from primary to 15) of passages on the transfection efficiency of MFFC. The transfection efficiency of MFFC was 10.0%, 28.9% and 7.2% at the primary, 3rd and 15th passage, respectively, which indicated that the transfection efficiency decreased with passaging. When MFFC, mouse oviductal epithelial cells (MOEC) and mouse granulosa cells (MGC) were transfected at passage 3, the transfection efficiency was 27.8%, 13.7% and 14.2%, respectively, under the described transfection conditions. When the cell cycle stages of different cell types at transfection were examined, it was found that 17.2% of MFFC, 8.7% of MOEC and 9.9% of MGC were at M phases of the cell cycle. Examination of the cell cycle stages of MFFC at different passages showed that MFFC at the third passage had the highest percentage of M cells and the percentage decreased afterwards. This suggested that the transfection efficiency was correlated with the percentages of cells at M phase, and provided essential data for improvement of the transfection efficiency.