组织特异性KNOCKOUT小鼠—基因打靶技术的新突破

组织特异性ＫＮＯＣＫＯＵＴ小鼠──基因打靶技术的新突破姜宇飞（北京医科大学免疫系北京１０００８３）近十年来,分子生物学研究得到了迅猛的发展。转基因技术及基因Ｋｎｏｃｋｏｕｔ技术为人们在动物体内分析某一特定基因的功能提供了有力的手段。转基因技术是导入一...     

转基因动物研究中存在问题

１５年来已建了许多用作研究人类疾病的转基因动物模型。转基因动物已作为研究代谢调节、分化、发育中有关基因功能的工具,它已作为一种分子农场可生产基因产品等。但要看到,转基因还有许多问题要解决。首先是转基因的阳性率低,这是受了许多因素如ＤＮＡ样品质量,分子大小和结构,动物种属,原核的可见性,注射针的调节和微注射技术等影响。通常转基因首建的阳性率在１０－２０％,有时甚至低于１％。在基因操作后,外源基因整合     

兔受精卵显微注射外源基因外体外培养的卵裂发育

从超数排卵的１４只母兔获得４３８枚受精卵,卵龄１６￣２２小时。显微操作在带微分干涉和相差的Ｎｉｋｏｎ倒置显微镜下进行。注射针的尖端外径０．５ｕｍ,离尖端４０和８０ｕｍ处的外径分别为４．２和６．５ｕｍ。注射用外源基因是绵羊生长激素基因与ＭＴ－１启动基因藕连的线状ＤＮＡ溶液（１ｎｇ／ｕｌ）。１４０枚注射的受精卵和未注射的１４５枚受精卵（对照）,在Ｈａｍ／ｓＦ－１０培养液（补充生长因子）中培养（３８℃）     

美洲鲽抗冻蛋白基因的亚克隆及构建转基因鱼的表达载体

用限制性内切酶Ｐｓｔ Ｉ部分消解含有美洲鲽抗冻蛋白基因的ｐＣＴ５质粒,分离得到３２４ｂｐ的片段,将此片段亚克隆到ｐＵＣ１９质粒中,筛选到ｐＵＣ－ＡＦ重组子。从ｐＵＣ－ＡＦ重组子中,用ＢａｍＨＩ和ＨｉｒｄⅢ切下３２４ｂｐ的抗冻蛋白基因,再重组到含有ＳＶ４０病毒启动子的ｐＫＳＶ－１０的载体中,构建成转基因鱼的表达载体,此表达载何可用于鱼的基因转移的研究。     

肾素－Ⅱ转基因的初步研究

将注射２４ｋｂ小鼠肾素－２（Ｒｅｎ－２）基因的４２５枚受精卵再植于２２只假孕大鼠输卵管内（每只约２０枚）。怀孕的１６只母鼠共生得子代鼠９７只,用ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交技术对存活的６０只子代鼠进行鉴定,发现有两只大鼠携带Ｒｅｎ－２基因。此两只转基因大鼠整合外源基因的拷贝数约为１～２个,血压均未见升高。     

转基因的整合与表达检测技术

本文着重介绍并比较转基因研究中外源基因整合（染色体及基因水平）与表达（转录及翻译水平）的各种检测方法,并就它们的适用范围、优缺眯等作了比较。     

大豆黄酮对大鼠肌肉生长和几种内源激素水平的影响

给雄性、雌性和雄性去势大鼠皮下注射大豆黄酮［３ｍｇ／（１００ｇ体重·天）］１６天。结果：雄性大鼠日增重提高１４．７％（Ｐ＜０．０５）,耗料与增重比降低１２．０％,后腿肌重和后腿肌总ＲＮＡ含量显著增加,而总ＤＮＡ含量无显著变化;血清脲氮水平显著下降,血清睾酮、雌二醇、生长激素和β－内啡肽含量显著提高。雄性去势大鼠日增重、后腿肌重无显著变化,血清睾酮、生长激素和β－内啡肽水平虽显著高于对照组,但睾酮水平仅为同等条件下完整大鼠的８％左右。雌性大鼠日增重降低１９．０％（Ｐ＜０．０１）,耗料与增重比提高１７．８％,血清睾酮、雌二醇和生长激素水平显著降低。试验结果表明：大豆黄酮对大鼠肌肉生长和几种内源激素水平的影响呈现性别差异,对雄性大鼠肌肉生长的促进作用依赖于睾丸的内分泌机能。     

大豆重复序列的克隆,特性分析及在染色体上的定位

从大豆栽培品种Ｕｎｉｏｎ（Ｇ．ｍａｘ）基因组ｐＵＣ１８质粒文库中,以基因组ＤＮＡ为探针,筛选出一个重复序列家族。序列分析表明,此重复序列的重复单位为９１ｂｐ,拷贝数约为１０￣５,其序列约占基因组ＤＮＡ的０．９％。基因组ＤＮＡ不同限制酶片段Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析和染色体原位杂交分析表明此重复序列主要以串联方式集中分布在Ｍ２和Ｍ１１号染色体的臂上,而另外一些则散布于整个Ｍ１２和Ｓｍ７号染色体上。以该序列为探针片大豆属不同亚属１３个种的１８个品系的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果表明,此重复序列为Ｓｏｊａ亚属所特有。这一Ｓｏｉａ亚属特异重复序列的发现,从另一个角度支持应把Ｓｏｊａ亚属的３个种Ｇ．ｓｏｊａ、Ｇ．ｇｒａｃｉｌｌｉｓ、Ｇ．ｍａｘ划分为一个种的观点。     

植物基因工程三部曲（二）—植物基因工程的技术和方法

利用DNA重组技术原理,用人工方法将所需优良性状的基因,从供体生物(动物、植物和微生物等)移到受体植物,使其表达成产物。这一技术达到了改造和创造生物新品种的目的,而用常规方法是不容易做到的。