人类新细胞因子CKLFSF2羧基端蛋白在大肠杆菌中的表达纯化、抗体制备与鉴定

哺乳动物细胞表达的人类新细胞因子——趋化素样因子超家族成员-2(CKLFSF2)存在分泌形式,位于CKLFSF2分子的羧基端,具有细胞趋化作用.为进一步研究CKLFSF2羧基端蛋白的结构和生物学功能及抗体制备,构建了GST-CKLFSF2C51原核表达质粒,经原核表达、亲和层析、凝胶过滤,获得GST-CKLFSF2C51融合蛋白和CKLFSF2羧基端蛋白(CKLFSF2C51),纯度可达到95%以上.GST-CKLFSF2C51融合蛋白用于制备多克隆抗体,ELISA方法检测抗体效价阳性,蛋白质印迹检测CKLFSF2哺乳动物细胞超表达细胞裂解液,获得特异性条带与预期大小一致.CKLFSF2C51经N端测序,质谱鉴定与预期结果一致,该蛋白质具有对PC-3细胞趋化的活性,并且该活性可被制备的多克隆抗体中和.上述结果表明,原核CKLFSF2羧基端蛋白具有与CKLFSF2真核表达蛋白类似的细胞趋化活性,原核CKLFSF2羧基端蛋白制备的多克隆抗体可用于免疫组织化学、蛋白质印迹检测,并能中和CKLFSF2蛋白的趋化活性作用.     

磷脂酶A2介导肿瘤坏死因子诱发的中性粒细胞趋化和粘附增强

肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）对外周中性粒细胞（ＰＭＮ）具有重要调节作用。本文采用生化及放射免疫技术,观察体外重组ＴＮＦ对ＰＭＮ趋化、粘附及血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）和前列环素（６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ）释放的改变。ＴＮＦ（１００ｍｇ／ｍｌ）处理６０ｍｉｎ后,ＰＭＭ对白细胞趋化因子（ＦＭＬＰ）趋化和玻璃珠粘附性均显著增加,同时伴有ＴＸＢ２释放增多,６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ不变。这提示ＴＮＦ体外促ＰＭＭ趋化和粘     

以融合蛋白形式在大肠杆菌中表达人MCP—1

将编码人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体ｐＥＸ３１Ａ中,在大肠杆菌中表达出ＭＳ２／ＭＣＰ－１融合蛋白,该表达产物约占菌体总蛋白的１５％左右,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测表明,表达产物可与ＭＣＰ－１抗体特异反应,采用琼脂糖平板法进行活性测定表明,表达产物具有明显的单核细胞趋化活性,说明Ｎ端融合一段细菌蛋白对ＭＣＰ－１有无趋化活性可能没有影响。     

磷脂酶A2激活对中性粒细胞趋化和粘附的作用

外源性磷脂酶A2(Ⅰ型PLA2)和钙离子载体(A23187)可明显促进中性粒细胞对TNF,FMLP的趋化及同玻璃球的粘附.PLA2抑制剂二溴苯乙酮(PBPB)和PLA2抗体对PLA2诱发的趋化和粘附具有浓度相关的抑制作用,而对A23187的相同作用并无影响.提示PBPB和PLA2抗体可能通过直接同PLA2作用而抑制PMN趋化和粘附,A23187诱导的促趋化及粘附作用可能不同于PLA2.     

血清趋化素、网膜素-1与银屑病患者炎症细胞因子和代谢综合征的关系研究

摘要 目的：探讨血清趋化素（CHEM）、网膜素-1（Omentin-1）与银屑病患者炎症细胞因子和代谢综合征（MS）的关系。方法：选取2020年1月～2021年1月我院收治的137例银屑病患者,其中40例轻度、58例中度、39例重度,根据是否合并MS分为MS组（n=59）、非MS组（n=78）。收集患者一般资料和实验室指标,采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清白细胞介素（IL）-17、IL-22、IL-23、CHEM、Omentin-1水平。Pearson/Spearman系数分析银屑病患者血清CHEM、Omentin-1水平与炎症因子水平和病情严重程度的相关性,多因素Logistic回归分析银屑病合并MS影响因素。结果：与轻度组比较,中度组、重度组血清CHEM、IL-17、IL-22、IL-23水平升高,Omentin-1水平降低（P＜0.05）;与轻、中度组比较,重度组血清CHEM、IL-17、IL-22、IL-23水平升高,Omentin-1水平降低（P＜0.05）。银屑病患者血清CHEM水平与IL-17、IL-22、IL-23水平和病情严重程度呈正相关（r/rs=0.370、0.471、0.500、0.624,P均＜0.05）;Omentin-1水平与IL-17、IL-22、IL-23水平和病情严重程度呈负相关（r/rs=-0.392、-0.423、-0.475、-0.533,P均＜0.05）。与非MS组比较,MS组血清IL-17、IL-22、IL-23、CHEM水平升高,Omentin-1水平降低（P＜0.05）。CHEM（OR=1.098,95%CI：1.027～1.174,P=0.006）、Omentin-1（OR=0.775,95%CI：0.674～0.891,P=0.001）为银屑病合并MS的影响因素。结论：血清CHEM、Omentin-1水平变化与银屑病患者病情严重程度和炎症反应相关,为银屑病合并MS影响因素,可能作为银屑病合并MS早期监测指标。     

慢性心力衰竭合并肺部感染患者血清降钙素原、血管紧张素Ⅱ、人单核细胞趋化蛋白-1与心脏功能和预后不良的关系分析

摘要 目的：探讨慢性心力衰竭（CHF）合并肺部感染患者血清降钙素原（PCT）、血管紧张素Ⅱ（Ang II）及人单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）与心脏功能和预后不良的关系。方法：选择2018年3月至2020年3月本院收治的CHF合并肺部感染患者94例作为合并感染组,同期收治的CHF未合并肺部感染患者54例作为对照组。采用化学发光免疫分析法检测血清PCT水平,采用酶联免疫吸附法检测血清Ang II、MCP-1水平,比较两组血清PCT、Ang II、MCP-1水平及心脏功能指标左室射血分数（LVEF）、左室收缩末期内径（LVESD）、左室舒张末期内径（LVEDD）、心率（HR）,分析合并感染组血清PCT、Ang II、MCP-1水平与LVEF、LVESD、LVEDD、HR的相关性。合并感染组患者积极治疗后根据住院期间和随访6个月是否发生不良心脏事件分为预后良好组和预后不良组,采用单因素及多因素logistic回归模型分析CHF合并肺部感染患者预后的影响因素。结果：合并感染组血清PCT、Ang II、MCP-1水平及LVESD、LVEDD、HR高于对照组（P＜0.05）,LVEF低于对照组（P＜0.05）。血清PCT、Ang II、MCP-1水平与LVEF呈负相关（P＜0.05）,与LVESD、LVEDD、HR呈正相关（P＜0.05）。单因素分析结果显示,CHF合并肺部感染患者的预后与心力衰竭病程、美国纽约心脏病协会（NYHA）心功能分级、N末端B型利钠肽原（NT-proBNP）、PCT、Ang II、MCP-1水平有关（P＜0.05）。多因素logistic回归分析显示,心力衰竭病程＞6年、NYHA心功能III级和IV级、NT-proBNP＞570 ng/L、PCT＞3.27 μg/L、Ang II＞68.47 ng/L及MCP-1＞267.65 ng/L是CHF合并肺部感染患者预后不良的危险因素（P＜0.05）。结论：CHF合并肺部感染患者血清PCT、Ang II、MCP-1水平异常升高,与患者心脏功能及预后不良有关,可作为患者心脏功能和预后评估的辅助指标。     

2型糖尿病视网膜病变患者血清Chemerin、TNF-α及Cys C水平变化及其临床意义

目的:研究2型糖尿病视网膜病变(DR)患者血清趋化素(Chemerin)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及胱抑素C(Cys C)的水平变化及临床意义。方法:以114例2型糖尿病(T2DM)患者为研究对象,分为非DR(NDR)组42例、非增生型DR(NPDR)组38例和增生型DR(PDR)组34例。另外选取38例健康体检者作为正常对照(NC)组。记录并比较四组的临床检查及生化指标及血清Chemerin、TNF-α和Cys C水平,并分析患者临床检查、生化指标与Chemerin、TNF-α、Cys C的相关性以及DR的危险因素。结果:NDR组、NPDR组、PDR组的体质量指数(BMI)、收缩压(SBP)、糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FPG)、胰岛素抵抗指数(HONA-IR)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、Chemerin、TNF-α、Cys C水平均高于NC组,且三组SBP、HbA1c、FPG、HONA-IR、血清Chemerin、TNF-α和Cys C水平逐渐递增(P0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清Chemerin、TNF-α、Cys C与SBP、HbA1c、FPG、HONA-IR、TG、TC、LDL-C均呈正相关关系(P0.05),且Chemerin、Cys C、TNF-α三者亦呈正相关关系(P0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,HONA-IR、HbA1c、Chemerin、Cys C和TNF-α均为DR的独立危险因素。结论:高水平Chemerin、TNF-α和Cys C可能与DR的发生、发展有关,三者互相促进,均为DR发生发展的独立危险因素,可用于DR患者的早期诊断及其病情严重程度的判断。     

CCR5的结构和功能：近两年的研究进展

ＣＣＲ５是趋化蛋白ＭＩＰ－１α,ＭＩＰ－１β、ＲＡＮＴＥＳ的特异性受体,主要表达于单核／巨细胞及Ｔ细胞膜上,具有Ｇ蛋白受体所特有的７个胯膜区。ＣＣＲ５与白细胞的趋经性,炎症反应,嗜Ｍφ型ＨＩＶ－１株对ＣＤ４细胞的感染密度相关。ＣＣＲ５的缺陷与个体对ＨＩＶ－１的抗性有关。本文就近两年在ＣＣＲ５结构特点,转录调控,信号传递,生物学功能等方面的研究进展作一综述。     

次级淋巴趋化因子SLC的克隆及其在原核系统中的表达

以中国人的淋巴组织为材料抽提总RNA,用RTPCR的方法扩增了次级淋巴组织趋化因子(Secondary lymphoid\|tissue chemokine,SLC)的成熟肽基因。序列分析表明,我们克隆的SLC基因与文献报道的仅有一个核苷酸的差异,且并不影响氨基酸的编码。将SLC的cDNA插入含T7启动子的表达载体pET28a(+)中构建重组质粒pET-SLC,转化大肠杆菌BL21(DE3)筛选表达菌株。表达菌株经1mmol/L IPTG诱导表达3～5h后,超声破菌,离心后将上清进行SDS-PAGE,可以看到在18kD左右处有明显的表达条带。用Ni2+亲和层析柱纯化表达产物,纯度达到90%以上。     

LARC：双重角色的趋化蛋白

趋化蛋白是 80年代末继细胞因子后引起广泛关注的一大类结构相似、功能相近的小分子蛋白质。近年来 ,随着其家族成员的不断壮大 ,对其结构、功能等的认识也不断深入。目前已克隆到上百个趋化蛋白分子 ,依照各自Ｎ末端半胱氨酸 (Ｃｙｓ)模体的不同 ,可将其分为 4类或者称 4个亚家族 ,分别是α趋化蛋白 (ＣＸＣ趋化蛋白 )、β趋化蛋白 (ＣＣ趋化蛋白 )、γ趋化蛋白 (Ｃ趋化蛋白 )和δ趋化蛋白 (ＣＸ3 Ｃ趋化蛋白 ) [1] 。趋化蛋白被称为细胞内信使 ,在多种生理或病理反应中均扮演着重要的角色 ,已明确的有 :参与先天性及后天性免疫应答 ;造血…