乌鸡酶解技术研究

采用猪胰脏作为胰酶的主要来源,对乌鸡的酶解工艺进行了研究。实验结果表明：酶反应的最适温度为４５℃,胰酶混合物的合适用量为乌鸡鲜肉重量的５％,反应１８小时达反应平衡,反应浓度以１ｋｇ鲜乌鸡２０００ｍｌ水为宜,反应过程中维持ｐＨ７．３即可,酶解产物经测定：氨基酸及可溶性短肽总含量高达１６．６１％,其中必须氨基酸含量占氨基酸总含量的５３％。     

PCR技术的种类及其应用

ＰＣＲ技术是分子生物学技术的一场革命。本文综述多种ＰＣＲ技术及其在分子生物学领域的应用。     

白介素-2诱发低血压动物的实验研究

白介素－２（ＩＬ－２）广泛用于治疗恶性肿瘤,由于大剂量可引起严重的低血压且机制不明,限制了其大剂量的使用。本研究用国产重组人白介素－２（ｒｈＩＬ－２）复制大鼠低血压模型并探讨其机制。２４只ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分成３组（每组ｎ＝８）：正常对照组,ＩＬ－２实验组（ｒｈＩＬ－２）和氨基胍（ＡＧ）治疗组。结果显示：（１）ＩＬ－２可使大鼠提睾肌微动脉扩张及ＭＡＰ下降,肺、肾、肝组织Ｅｖａｎ′ｓＢｌｕｅ含量明显增加。（２）ＡＧ可使ｒｈＩＬ－２引起的低血压回升及微动脉缩小,肺组织Ｅｖａｎ′ｓＢｌｕｅ含量明显下降。提示：ｒｈＩＬ－２引起低血压,可能与ＩＬ－２诱导ＮＯ产生,使血管扩张及通透性增加有关。     

激动剂引起的α1-肾上腺素受体下调及其部分机制

用仓鼠全长α_1B - 肾上腺素受体 (α_1B -AR)cDNA转染人胚胎肾细胞(HEK2 93)得到高效稳定表达α_1B - AR的细胞系 ,在此细胞上观察去甲肾上腺素 (NE)持续刺激该细胞对α_1B -AR表达的影响 .用放射配基结合分析测定受体数量 ,用RNA酶保护分析测定mRNA水平 .结果显示细胞与 1 0 μmol/LNE温育 2～ 2 4h时 ,α_1B -ARmRNA水平与对照组相比显著下降 . 4h时下降到最低点 ,约下降了70 % .温育 2 4h时 ,α_1B - AR数与对照组相比约下降了 6 6 % .用 0 .1 μmol/LCalphostinC预处理细胞 30min后再加NE 4h并未引起α_1B - ARmRNA水平下降 ,而 1 μmol/L佛波酯刺激细胞时也能产生与NE所引起的相似结果 .核失控转录分析显示 1 0 μmol/LNE处理细胞 4h后α_1B -AR的转录速度与对照组相比并无显著差异 .在用放射菌素D阻断新的RNA合成的条件下 ,NE并不能加速α_1B - AR的mRNA降解 .上述结果表明NE引起α_1B -AR下调的同时伴有其mRNA水平下降 ,这种作用是通过激活蛋白激酶C途径实现的 .NE并不改变α_1B -AR基因的转录速度 ,也不直接加速其mRNA降解 ,但可能通过诱导某些RNA及其相应蛋白质的合成而间接降低α_1B - ARmRNA的稳定性 .     

MLC_2-糜酶融合基因克隆及转基因小鼠的产生

为研究糜酶基因在体内的结构与功能以及与心肌肥厚的关系,并提高糜酶基因在小鼠心脏中的表达,构建肌球蛋白轻链－２启动子（ｍｙｏｓｉｎｌｉｇｈｔｃｈａｉｎ－２ｐｒｏｍｏｔｅｒ,ＭＬＣ２）－糜酶融合基因并产生转基因小鼠．通过删除糜酶基因启动子序列,构建结构基因克隆,然后与大鼠心脏肌球蛋白轻链－２启动子序列相拼接,构建ＭＬＣ２－糜酶融合基因克隆,回收并纯化融合基因片段,显微注射入小鼠受精卵产生转基因小鼠,经ＰＣＲ扩增、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交和ＰＣＲ扩增产物的测序,筛选和确定转基因鼠．在新出生的４６只小鼠中有２只为转基因阳性鼠,且外源基因能稳定遗传给后代,从而获得了可用于研究糜酶基因在体内的结构与功能以及与心肌肥厚的关系的转基因小鼠模型．     

基因扩增产物的固相杂交-酶联显色方法的建立

建立基于基因扩增技术的简便、快速的病毒核酸定量检测方法．将标记有生物素的寡核苷酸引物所扩增的病毒基因产物,与通过共价键结合在微孔反应板上的特异性探针进行快速杂交,然后通过辣根过氧化物酶标记的抗生物素进行酶联显色,读取光密度值．应用本方法对血清中乙型、丙型肝炎病毒核酸定量检测,灵敏度分别可达１－５拷贝／反应．此方法简便、快速、特异性好、敏感性高、半定量指标客观,可广泛应用于肝炎病毒感染的临床诊断和疗效评价．     

酶、多肽电荷数的理论计算及误差研究

对酶的电荷数随ｐＨ变化的定量关系进行了理论推导,将推导出的酶的电荷数与ｐＨ的关系式应用于多肽等电点的计算,理论计算结果与文献实验结果完全一致,并推导出酸性氨基酸、碱性氨基酸及中性氨基酸等电点的计算式,与现有计算式完全一致．应用荧光光谱和荧光偏振对肌酸激酶带电性随ｐＨ值的变化关系的研究表明,理论计算符合实验结果,表明：此文理论关系式是可靠的．     

光质对水稻幼苗超弱发光和谷氨酸胺合成酶活性的影响

生长在不同光质下的水稻幼苗叶片的超弱发光随着其生长进程不断增强,光质对ＵＢＥ有显著影响,生长在白光下的水稻幼苗的ＵＢＥ明显高于生长在红光或蓝光下的水稻幼苗的ＵＢＥ,而红光和蓝光处理之间无显著差异。     

可食性蛋白质酶水解过程中形成苦味原因的探讨

本文探讨了天然蛋白质水解过程中形成苦味的原因。     

rIL-2工程菌诱导阶段细胞再循环培养的研究

为了减少rIL-2工程菌高密度培养时乙酸的积累,在诱导阶段对该工程菌进行细胞再循环培养的研究,比较了细胞再循环补料液、pH、细胞循环培养时间段对工程菌的生长及rIL-2表达的影响。结果表明在菌密度D_(600)为50时,细胞再循环补料液中酵母抽提物与胰蛋白胨浓度为发酵培养基的5倍就能满足rIL-2表达的需求,同时选择诱导后4～6h之间的细胞再循环培养能有效地防止乙酸的过高积累并减少营养物质的损失,有利于rIL-2的表达。根据以上研究结果得到了rIL-2工程菌诱导阶段细胞再循环培养方法,使得在诱导前菌密度D_(600)为50左右时rIL-2的表达水平约为40％。