Ti质粒基因在单子叶植物石蒜和金针菜中的表达

本文报道了用胭脂碱型致瘤农杆菌感染单子叶植物石蒜和金针菜的实验结果。石蒜和金针菜的花茎幼嫩部位被致瘤农杆菌A_(208)感染后,一个月内形成小瘤。纸电泳结果表明,所有瘤组织都含有胭脂碱,证明石蒜和金针菜的细胞可被转化并表达nos基因;本文讨论了致瘤农杆菌转化单子叶植物的范围和筛选方法。     

G_3基因工程菌发酵中pH值对包涵体形成及目的蛋白表达的影响

在不同pH值条件下摇瓶及罐发酵G3双体分子重组菌．探讨pH值对G3双体分子包涵体形成及目的蛋白表达水平的影响,确定G3双体分子重组菌发酵最佳pH值为生长期pH7．0—7．2,生产期pH6．7－6．8．     

樱桃根癌土壤杆菌及其对土壤杆菌素84敏感性的研究

从山东、河北、辽宁等地樱桃园的樱桃冠瘿瘤和土壤样品中分离到46株根瘤土壤杆菌。经鉴定有4株是Agrobacteriumtumefaciens（原生物型1）,其余42株是A.rhizogenes（原生物型2）。这些菌株所诱导的冠瘿瘤中均合成胭脂碱（nopaline）,属胭脂碱型Ti质粒的根癌土壤杆菌,并对放射土壤杆菌K84菌株所产生的土壤杆菌素84敏感。由于K84菌株对含胭脂碱Ti质粒的根癌土壤杆菌有很好的抑制效果,因此,用K84菌株防治樱桃根癌病是有应用前景的．     

单株根系来源的土著大豆慢生根瘤菌多样性

本文对由１株大豆根瘤分离、鉴定的１２个土著大豆慢生根瘤菌（Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍｊａｐｏｎｉｃｕｍ）菌株进行了种内多样性分析。在ＹＥＭ琼脂培养基上观察菌落大小不同（直径≥１０ｍｍ至≤０５ｍｍ）的菌株,有形成粘稠而半透明的Ｍ型菌落和稀薄而透明的Ｗ型菌落。以ＥＬＩＳＡ鉴定血清类型,分为ＬＬ１９血清族（包括Ｓｚ１１２ｓ）血清组和Ｓｚ１１９ｓ血清型及其他血清组）和非ＬＬ１９血清族（包括Ｓｚ１１３ｓ和Ｓｚ１２１ｓ两血清型及未知血清型）。以Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的ｐＭＪＳ１２为探针检测菌株染色体ＤＮＡ的ＥｃｏＲＩ消化产物的分子杂交谱,出现称为Ⅰ型的９６ｋｂ和Ⅱ型的６４ｋｂ两种类型的单一分子杂交带。ＨＰ５８９０Ａ气相色谱分析细胞脂肪酸,检出８种成分。其中,Ｃ１４∶１、Ｃ１８∶１和Ｃ１４∶０存在于所有供试菌株中,为不同于快生根瘤菌的３种主要成分,以此可将供试菌株分成６组不同菌株     

内切酶SCaI对不同纯度质粒的酶解效率探讨

限制性内切酶ＳＣａＩ适用于多种质粒载体,尤其是融合蛋白表达载体,ｐＧＥＸ系统,因它具有二个ＳＣａＩ酶切位点,因此用ＳＣａＩ酶解图谱鉴定以ｐＧＥＸ系统为载体的重组子甚为便捷。简便碱裂解法提取重组ＤＮＡ省时,省耗。本文探讨了ＳＣａＩ对用常规和简便两种碱裂解法提取的重组ＤＮＡ的酶解效率。结果表明：（１）简便碱裂解法抽提的重组ＤＮＡ,用ＥｃｏＲＩ、ＥｃｏＲＶ、ＰｓｔＩ、ＢａｍＨＩ等限制性内切酶酶解,可以获     

酿酒酵母嗜杀质粒(dsRNA)的提取与分离纯化

对酿酒酵母嗜杀质粒的提取、电泳检测及纯化方法进行了研究。以改进的Fried和Fink方法在不预破细胞壁的情况下,巯基乙醇在碱性条件(pH9. 3)预处理后,直接以SDS-苯酚抽提完整细胞分离到了嗜杀质粒(dsRNA) 。在此基础上, 以电泳透析方法获得了纯化的M2和L双链RNA,琼脂糖凝胶电泳测定分子大小分别为1.5kb和4.0kb。 Abstract:The method of extraction and purification of the double-stranded RNA killer plasmids from Saccharomyces cerevisiae was studied.With the improved method of Fried and Fink we directly extracted the intact cells with SDS-phenol after pre-treating the cells with ß-mercaptoethanol under analkli condition.The result was detected and confirmed by the gel electrophoresis.On this basis we acquired the purified M2 and L-dsRNA by means of electrophoretic dialysis,their molecular lengths being 1.5kb and 4.0kb respectively.     

八种热带、亚热带豆科植物根瘤菌内源质粒的分布情况

从８种热带、亚热带豆科植物中分离出９种快生型根瘤菌,用双梳子胶内裂解法检测其中的质粒分布情况。质粒数从１到６个不等,大小从３２ｋｂ到８７０ｋｂ,其中至少有一个分子量小于１００ｋｂ的质粒。从不同种属的豆科植物中分离出的根瘤菌,其质粒的数量及分子量各不相同。     

一种从重组质粒快速提纯DNA插入片段的方法

本文介绍一种从重组质粒中快速提纯ＤＮＡ插入片段的方法。质粒ＤＮＡ的制备简单、快速、分离的质粒ＤＮＡ可用于限制性酶切和转化大肠杆菌等。从琼脂糖凝胶中提纯ＤＮＡ插入片段的方法操作简单,回收效率高,提纯的ＤＮＡ片段可用于连接和制备杂交探针等。     

质粒介导碳青霉类抗生素耐药性产生的研究进展

碳青霉烯类抗生素是治疗β-内酰胺酶类耐药革兰氏阴性杆菌感染的最有效手段,也是目前对抗耐药细菌最有效的抗菌药物之一。但随着碳青霉烯类耐药菌的出现,无疑给临床抗菌药物选择带来严峻的考验。临床上发现的碳青霉烯类耐药菌常含碳青霉烯酶,可分为A、B、D三类：A类为肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(Klebsiella pneumoniae carbapenemases,KPCs),B类为是新德里金属酶(new Delhi metalloenzyme,NDM)、亚胺培南酶(imipenemase,IMP)和维罗纳整合子金属β-内酰胺酶(verona integronencoded metallo-β-Lactamases,VIM),D类为是苯唑西林酶(Oxacillinase,OXA)。目前发现编码这些酶的基因大都位于质粒上,使得这些耐药基因能够在细菌之间进行水平或垂直传播。该文将介绍近年编码不同碳青霉烯酶的基因通过质粒的介导在革兰氏阴性杆菌中的分布、表达与传播,以期为科学防控碳青霉烯类耐药菌及合理使用抗菌药物提供理论依据。