蛋白质N端豆蔻酰化修饰的基因工程表达偶联加工系统

对酵母ＮＭＴ基因在大肠杆菌中表达进行较详细的研究,进而构建了复制子为ｐ１５Ａ并含卡那霉素抗性基因的相容性表达质粒ｐＫＺＭＴ,将其与表达质粒ｐＣＺｍＣα１共转化进大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）Ｆ′,进行双质粒表达偶联加工修饰研究,其中ｐＣＺｍＣα１表达底物蛋白小鼠ｃＡＭＰ依赖的蛋白激酶催化亚基α（ＰＫＡ-ｍＣα）。ＳＤＳＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表明,双质粒表达系统中,ＰＫＡ-ｍＣα都得到了稳定的高表达,尤其在２３℃低温诱导表达时,表达产物的可溶性部分明显增多;而酵母ＮＭＴ被控制在有利于活性功能的可溶性低水平表达。［^３Ｈ］ｍｙｒｉｓｔｉｃａｃｉｄ标记测定及放射自显影的结果显示,在大肠杆菌中表达的重组ＰＫＡ-ｍＣα被豆蔻酰化修饰。     

DNA水平上的植物系统学研究方法

本文简要总结了近年来在ＤＮＡ水平上的植物系统学研究方法,着重介绍了限制性长度多态性分析,ＰＣＲ技术在植物系统学上的应用等这一领域最新的进展,并对分子数据的分析方法及系统树的构建进行了详细讨论。     

Epstein—Barr病毒BCRF1的基因重组质粒的构建及其在真核细胞中的表达

应用基因重组技术,把编码ＥＢ病毒早期蛋白ＢＣＲＦ１基因重组于真核表达载体ｐＳＧ５中,并使该基因在乳地鼠肾（ＢＨＫ）传代细胞中获得良好表达,表达率为０．５％,血清学实验证实,鼻咽癌,类风湿性关节病人和正常人血清中均不同程度地含有ＩｇＧ／ＢＣＲＦ１抗体,抗体阳性率分别主９２％,８６％和７７％,几何平均滴度（ＧＭＴ）分别是：１：１６．３５,１：１４．７２和１：１０．１５。两组病人和正常人血清中ＩｇＡ／Ｂ     

应用套式PCR检测猪细小病毒

从猪细小病毒基因组的ＶＰ２基因上,选择两对引物进行套式聚合酶链反应体外扩增,产物经２％ａｇａｒｏｓｅ凝胶电泳和生物素标记的探针鉴定。证实具有特异性,敏感性实验证明,大套式ＰＣＲ能检测到１ ＴＣｉＤ５０的病毒量,在临床上应用方法能从不同的组织样品和粪便中检测出猪细小病毒,具有很高的敏感性。     

细菌巨大质粒的快速检测

本文报道了一种快速检测微生物巨大质粒的方法．该方法是通过对Ｅｃｋｈａｒｄｔ所报道的方法加以改进,使之能对根瘤菌、大肠杆菌、甚至链霉菌的大质粒进行快速检测．     

应用单链构象多态性—聚合酶链反应研究我国大麦黄花叶病毒株系的分化

根据致病性差异,我国大麦黄花叶病毒（ＢａＹＭＶ）存在若干不同株系,血清学和核酸杂交技术不能区分这些株系。但还由于致病性不同,各株系的核酸序列同必定存在差异。最近建立的单链构象多态性－聚合酶链反应（ＳＳＣＰ－ＰＣＲ）技术能灵敏而有效地诊断和区分核酸序列间的差异,从而进一步证实我国ＢａＹＭＶ不同株系的分化。     

EB病毒胸苷激酶基因的扩增

ＥＢ病毒胸苷激酶基因的扩增陈尚武,陈瑞君,黄迪,朱振宇,马涧泉（中山医科大学生化教研室,广州５１００８９）（中山医科大学肿瘤研究所,广州５１００６０）关键词Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒,胸苷激酶,基因,聚合酶链反应鼻咽癌（ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ...     

有机盐对基因启动子的σ因子选择性的影响

用σ￣（７０）或σ￣（３８）和核心酶（Ｅ）组成的大肠杆菌ＲＮＡ聚合酶全酶（Ｅσ）对四种启动子进行了体外转录。结果表明：ｌａｃＵＶ５,ｒｐｌＪ主要被Ｅσ￣（７０）识别,ｋａｔＥ主要被Ｅσ￣（３８）识别,ｆｉｃ在低盐浓度时被Ｅσ￣（７０）识别,在高浓度盐时被Ｅσ￣（３８）识别;Ｅσ￣（３８）转录特异性启动子所需酶量大于Ｅσ￣（７０）转录特异性启动子的酶量;在含有分别对σ￣（７０）或σ￣（３８）亲和性大的混和启动子的体外转录中,启动子之间不存在干扰和竞争,转录水平与启动子浓度成正相关。     

非放射性反相杂交法在HLA－DQA1位点基因分型中的应用

将遴选的经适当接尾的１２个ＨＬＡ－ＤＱＡ１序列特异性寡核苷酸固定在一张滤膜上,用生物素标记的ＤＱＡ１特异性扩增产物与滤膜上的序列特异性寡核苷酸在四甲基氯化铵杂交体系中杂交,然后经洗膜封膜,杂交信号用非放射性的碱性磷酸酶显色法检测,根据杂交斑点的显示结果分析标本的基因型。采用这种方法初步确定了ＨＬＡ－ＤＱＡ１位点８种单倍型等位基因：ＤＱＡ１０１０１、０１０２、０１０３、０２０１、０３０１１、０４０１、０５０１和０６０１．非放射性反相杂交法可对各种来源的杂合性标本进行ＨＬＡ－Ⅱ类基因快速分型,并适合在临床器官移植的组织分型配型、疾病易感性研究和法医鉴定等领城中应用。     

HLA－DRB1基因位点多态性的PCR－RFLP分析

设计并建立一套适合国内应用的改良ＰＣＲ－ＲＦＬＲ方法,分５组特异性扩增ＤＮＡ样品,随后进行酶切定型分析,准确检测了编码ＤＲ抗原特异性的ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因位点的多态性,该法采用分组扩增,不发生与其它ＤＲＢ位点等位基因的交叉扩增,不仅适合纯合子的区分而且可以清楚准确地检测杂合子样品,已报道过的ＤＲＢ１位点编码的特异性组合都可以通过这个方法得到准确分析。所使用的Ⅱ类限制性内切酶均价格便宜、易购。