费氏中华根瘤菌内源质粒的不相容性及其在质粒消除中的应用

用Tn5 Mob sacB转座子标记费氏中华根瘤菌 (Sinorhizobiumfredii)HN0 1和WWG1 8的内源质粒 ;在含有 1 0 %蔗糖的TY培养基上进行了质粒消除试验以鉴定其功能。将HN0 1的标记共生质粒pSymHN0 1b转入费氏中华根瘤菌WWG1 8SR和C361SR中 ,质粒快速检测、质粒消除和植物盆栽结瘤试验结果证明 :HN0 1的共生质粒与WWG1 8SR的共生质粒具有不相容性 ,但能与其非共生质粒相容。相反 ,HN0 1的共生质粒可与C361SR的共生质粒相容 ,但与其中一个非共生质粒具有不相容性。利用费氏中华根瘤菌不同菌株质粒间的不相容性 ,本研究成功地消除了WWG1 8SR的共生质粒和C361SR的一个非共生质粒。     

Ri质粒在植物科学中应用的新进展

本文综述了发根农杆菌Ri质粒在植物学理论研究、有用植物次生代谢物生产、植物品种改良及植物栽培四个方面应用的最新进展。     

猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)E蛋白基因真核表达质粒的构建

新近发现的ＰＲＲＳＶ是单股ＲＮＡ病毒,属于不久前成立的动脉炎病毒科。其基因组包括８个开放阅读框架（ＯＲＦ）,其中ＯＲＦ５编码糖基化的囊膜（Ｅ）蛋白,是病毒的主要免疫保护性抗原之一。为了研制ＰＲＲＳ基因疫苗,扩增并克隆了ＰＲＲＳＶ－１ａ株ＯＲＦ５,并将其亚克隆至真核表达载体ｐＣＲ３－Ｕｎｉ的ＣＭＶ启动子下游,构建成真核表达质粒,为ＰＲＲＳ基因免疫奠定基础     

益生芽隐杆菌对抗生素的敏感性及其质粒的检测

采用滤纸片抑菌圈法测定３０株益生芽直菌对１５种抗生素的敏感性。结果９０％菌抗磺胺嘧啶,对其余抗生素大部分菌株敏感。用改良碱裂解法提取３０株菌质粒,只有６１２９菌株含有一个大约４．３ｋｂ的质粒,质粒消除南粒与磺胺嘧啶抗性无关。     

Vero细胞毒性试验法检测大肠杆菌O157：H7毒素

建立Vero细胞毒性试验法检测大肠杆菌0157：H7毒素（Verotoxin.VT）的实验方法。采用Vero细胞培养法。利用VT对Vero细胞具有强力毒性作用特点,从细胞形态学及OD值变化确认有无毒素产生。普通大肠埃希菌（ATCC25922）对Vero细胞无毒性,大肠埃希菌0157：H7（ATCC43889）使Vero细胞发生明显病变。以此方法检测了9株待检菌,其中仅1　株来源于人的对Vero细胞具有强力毒性作用。用Vero细胞毒性试验法检测VT是一种经典、特异、灵敏的检测法,它直观地确认毒素的生物活性作用,有效地检出产毒株,并根据毒素产量高低进行分类,有助于疾病的诊断与治疗。     

人胰岛素原在甲醇酵母(Pichia pastoris)中的高效表达

甲醇营养型酵母Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ在近十几年已被人们广泛用作外源基因表达的系统。表达的是可溶性蛋白,且胞外分泌。本研究系将外源基因（胰岛素原基因）连接到穿梭质粒ＰＨＩＬ－Ｓ１上,再通过同源重组到酵母染色体,筛选表达株。用１ 升发酵罐在甲醇诱导下可获得０．３ｇ／Ｌ胰岛素原的产率。     

γ辐射诱导质粒DNA单链断裂的反向氧效应

以凝胶电泳法研究了γ辐射引起质粒ＤＮＡ单链断裂（ＳＳＢ）的氧效应,发现含自由基清除剂－甘露醇的ＤＮＡ溶液在Ｎ２饱和条件下的ＳＳＢ产额大于空气饱和时的产额,使得Ｓ析氧增比（ＯＥＲ）小于１,即ＤＮＡ之ＳＳＢ存在反向氧效应,同时,Ｇ（ＳＳＢ）及其氧增比均随甘露醇浓度的增大而减小。     

缺失了控制肿瘤的功能之后,从烟草冠瘿瘤再生了能表达(鱼章)鱼碱合成酶基因的正常可育植株

对于植物遗传工程,用T-DNA作为载体的一个重要问题是需要再生正常的植株,这些植株要能够稳定地保持、表达和有性地传递被转移的DNA。     

用Ti质粒作基因转移进入新阶段

据三个研究小组在迈阿密冬季讨论会上提出的报告,Ti质粒现已可用于将新特性引入植物的遗传工程。这三个研究小组,一是华盛顿大学Masy-Dell Chilton实验室的,一是蒙桑托(Monsanto)公司的St.Louis实验室的,还有一个是欧洲的,包括来自科隆M.普朗克植物育种研究所和比利时根特州立大学的研究工作者。     

伤寒沙门菌耐药质粒体内接合转移的研究

目的研究伤寒沙门菌耐药质粒pRST98在小鼠体内向大肠埃希菌的接合转移,比较质粒在体内、外接合转移的异同。方法由于伤寒沙门菌是一种只对人类致病的病原菌,因此将伤寒沙门菌的耐药质粒pRST98导入遗传背景明确的鼠伤寒沙门菌低毒株RIA中,用接合子pRST98/RIA口饲BALB/c小鼠进行体内接合转移。结果在体外伤寒沙门菌很容易将pRST98转移给大肠埃希菌E.coliK12W1485(F-)RifrLac+,该接合子又可将pRST98转移给鼠伤寒沙门菌RIA,但在不同宿主菌中耐药标志的表达有差异。未经人工感染小鼠肠道分离的大肠埃希菌耐药情况严重,口饲pRST98/RIA后出现了部分耐药标志与pRST98耐药谱相同的大肠埃希菌,但有些抗生素的耐药标记未能表达。质粒检测显示体内形成的接合子均含耐药质粒pRST98。结论伤寒沙门菌耐药质粒pRST98在动物体内、外均可转移给大肠埃希菌,但同一质粒在体内、外大肠埃希菌株中耐药标志表达有差异,即使在同一小鼠体内分离的不同接合子,pRST98/E.coli菌株耐药性亦有不同,显示耐药质粒表达的多样性和复杂性。