全文获取类型
收费全文 | 1692篇 |
免费 | 55篇 |
国内免费 | 775篇 |
出版年
2024年 | 3篇 |
2023年 | 16篇 |
2022年 | 13篇 |
2021年 | 21篇 |
2020年 | 15篇 |
2019年 | 16篇 |
2018年 | 20篇 |
2017年 | 39篇 |
2016年 | 60篇 |
2015年 | 187篇 |
2014年 | 93篇 |
2013年 | 61篇 |
2012年 | 241篇 |
2011年 | 145篇 |
2010年 | 83篇 |
2009年 | 85篇 |
2008年 | 90篇 |
2007年 | 43篇 |
2006年 | 70篇 |
2005年 | 67篇 |
2004年 | 71篇 |
2003年 | 63篇 |
2002年 | 65篇 |
2001年 | 51篇 |
2000年 | 61篇 |
1999年 | 44篇 |
1998年 | 39篇 |
1997年 | 32篇 |
1996年 | 31篇 |
1995年 | 32篇 |
1994年 | 32篇 |
1993年 | 38篇 |
1992年 | 43篇 |
1991年 | 39篇 |
1990年 | 48篇 |
1989年 | 33篇 |
1988年 | 22篇 |
1987年 | 16篇 |
1986年 | 15篇 |
1985年 | 317篇 |
1984年 | 22篇 |
1983年 | 12篇 |
1982年 | 14篇 |
1981年 | 13篇 |
1963年 | 1篇 |
排序方式: 共有2522条查询结果,搜索用时 875 毫秒
61.
62.
63.
含par位点的重组质粒Psjm3的构建及其稳定性研究 总被引:3,自引:0,他引:3
利用自然质粒pSC101par位点的分离稳定性功能,构建了含par位点的质粒pSJM4和pSJM3,通过在同样宿主E.coli HB101中的稳定性比较研究表明,不含par位点的重组质粒pSJ3很不稳定,E.coli G3(pSJ3)在培养到第10代时已开始出现pSJ3的丢失,到培养至50代时则已全部丢失;而含par位点的重组质粒pSJM3则表现得十分稳定,E.coli G3-1(pSJM3)经70代培养,仍无明显的质粒丢失现象,其稳定率保持97%以上。通过对不含par和含par的非重组质粒pUC18和pSJM4的稳定性比较也获得同样的结果。通过对E.coliG3(pSJ3)和E.coli G3-1(pSJM3)的产酶活性比较研究表明,G3-1菌株明显高于G3菌株,说明我们构建的重组质粒pSJM3上的par位点功能不仅没有因外源基因的表达而受影响,而且有利于外源基因的表达。 相似文献
64.
以粘粒为基础产生重组单纯疱疹病毒HSV1—lacZ的研究 总被引:2,自引:2,他引:0
将总长主为152kb的单纯疱疹病毒1型基因组分成5个相互间有部分重叠的大片段,分别克隆到粘粒SuperCosMW中,依次称为cos48、cos28、cos6、cos14和cos56(DavisonAJetal,1993)。此5个粘粒用PacI切去粘粒骨架后共转染细胞,可发生同源重组而产生野生型HSV-1。 相似文献
65.
对乳杆菌DM8909菌株质粒的检测 总被引:1,自引:1,他引:0
德氏乳杆菌乳酸变种(LactobacilusdebrueckiSupsp.lactis)是阴道正常菌群成员之一,探讨该菌株是否存在质粒对于研究乳杆菌耐药性具有一定意义。现将DM8909质粒检测情况报告如下。1材料与方法11菌株与培养基菌株德氏乳杆... 相似文献
66.
天花粉蛋白Y14F/R22L定点突变及其活性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
利用多聚酶链式反应(PCR)技术,对天然天花粉蛋白(nTCS)基因在Tyr14和Arg22两个保守残基处同时进行定点突变,即Tyr14变成Phe,Arg22变成Leu,然后克隆到pET-8c高效表达载体上,构建成重组质粒pETY14F/R22L.经序列分析,定点突变的结果与预先设计的完全一致,突变后的天花粉蛋白命名为Y14F/R22LTCS.将pETY14F/R22L转化到E.coliBL21(DE3,pLysS)中,进行表达.经CM-SepharoseCL-6B柱纯化,SDS-PAGE鉴定,纯度可达90%.RIP活性测定显示,Y14F/R22LTCS的活性比nTCS降低了7.5倍,活性变化不显著,因此,TCS的Try14和Arg22对维持其活性部位构象并不是必需的.但由于Y14F/R22LTCS在E.coli中的表达量与nTCS相比明显下降,因此,Tyr14和Arg22可能与TCS翻译后的折叠有关. 相似文献
67.
68.
酮酸脱羧酶作为异戊醇生物合成的关键酶,不存在于大肠杆菌中。以乳酸乳球菌的基因组DNA为模板,经过PCR扩增得到酮酸脱羧酶基因kivD(rbs),插入到大肠杆菌高效表达载体pET-28a(+)上形成pET-kivD(rbs),重组质粒热击转化进大肠杆菌BL21(DE3)中,其成功表达了酮酸脱羧酶。对发酵产物进行分析,检测到了微量的目标产物—异戊醇。 相似文献
69.
目的:研究氢火焰气相色谱仪(GC112A)内标法测定反式脂肪酸的实验室最佳条件。方法:采用气相色谱内标-标准曲线法,通过测定反式脂肪酸标准品工作液的标准曲线、重现性和分离度来确定和验证GC112A的最佳色谱条件。结果:实验室最佳色谱条件:毛细管柱,PC-88(100 m×0.25 mm×0.2μm);进样口温度:260℃;载气:高纯N2,压力220 k Pa,流速41.0 m L/min;检测器(FID)温度:290℃,氢气压力100 k Pa,流速21.0 m L/min;空气压力160 k Pa,流速215.0 m L/min;检测器(FID)灵敏度:1010;手动进样,进样量:1.0μL。结论:该方法避免了外标法(国标方法)的国产仪器局限性和操作者人工进样的不确定性,具有受仪器参数变化的影响较小的特点,适合在基层食品检验机构推广。 相似文献
70.
摘要:【目的】针对不产氧光合细菌(APB)类胡萝卜素(Car)标准品缺乏的问题,以替代标准品实现螺菌黄质系多种Car组分同步、快速、准确的定量分析。【方法】以沼泽红假单胞菌CQV97为材料,采用吸收光谱、薄层层析和HPLC等方法制备螺菌黄质系Car标准品;以柠檬黄和番茄红素为替代标准品,采用HPLC法,建立了螺菌黄质系Car多组分的定量方法。【结果】制备的6种Car标准品纯度达95%以上。确定了Car的HPLC分析条件,以Car标准品为对照,得到了螺菌黄质系6种Car组分的定性HPLC指纹图谱。在选择的HPLC 条件下,测定了6种Car标准品和2种替代标准品的标准曲线,确立了2种替代标准品分别与6种Car标准品之间的定量校正函数关系,并用于实际样品YL28和CQV97菌株的Car定量分析。采用Car标准品法测定的6种Car含量的RSD小于1.5%、回收率在96%-104%,替代标准品法与Car标准品法测定结果吻合,其相对误差小于0.1%。【结论】通过替代标准品校正函数关系,建立了2种准确定量分析螺菌黄质系Car多组分的方法。替代标准品柠檬黄和番茄红素均能准确地传递待测Car的量值关系,实现了螺菌黄质系6种Car的同步、快速、准确的定量分析,弥补了现有Car组分相对定量方法的不足。讨论了替代标准品法校正因子适用范围的局限性,提出了校正函数关系的思路和方法。这为全面实现APB球形烯系、奥氏酮系等其它Car的快速、准确定量分析提供了借鉴和参考。 相似文献