肿瘤坏死因子-α诱导心肌肥大中CaN信号通路的作用

目的:研究钙调神经磷酸酶(CaN)信号通路在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导心肌细胞肥大中的作用。方法:Lowry法测心肌细胞蛋白含量;计算机图象分析系统测心肌细胞体积;[3H]-亮氨酸掺入法测心肌细胞蛋白合成;Till阳离子测定系统观察胞内[Ca2+]i瞬变;Western blot法测定CaN的表达。结果:①CaN特异性抑制剂CsA(0.2μmol/L)明显抑制TNF-α(100μg/L)诱导的心肌细胞蛋白含量、蛋白合成和细胞体积增大,但对正常心肌细胞生长无影响。②CaN特异性抑制剂CsA(0.2μmol/L)明显降低TNF-α诱导的心肌细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)瞬变幅度增高。③TNF-α明显增强心肌细胞内CaN的表达。结论:TNF-α可能通过引起心肌细胞[Ca2+]i升高,促进CaN表达诱导心肌细胞肥大。     

钙离子／钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ及其功能

所有引起细胞内钙离子浓度升高的激素或神经递质都可通过不同的钙离子／钙调素依赖性蛋白激酶达到调节细胞生理功能的作用。在神经元活动、细胞分泌、平滑肌缩等 细胞活动中起重要作用。     

APOE4通过Calpain/p35-p25/Cdk5增加tau蛋白磷酸化

摘要 目的：探究载脂蛋白APOE4对小鼠海马组织中tau蛋白磷酸化的作用。方法：采用6月龄人载脂蛋白APOE3,APOE4转基因纯合小鼠,用Western Blot检测小鼠海马组织中tau蛋白的磷酸化程度及Calpain蛋白、p35/25、CDK5等蛋白表达水平。使用脑立体定位术向小鼠侧脑室注射Ca²⁺螯合剂EGTA或二甲基亚砜DMSO两次,给药时间间隔4小时,第二次给药结束后两小时内处死小鼠。检测海马中Calpain蛋白、CDK5、p35/25及tau蛋白的磷酸化的变化情况。结果：①与野生型小鼠和APOE3-TR小鼠相比,APOE4-TR小鼠海马中tau蛋白在Ser396,Thr181及Thr231位点的磷酸化均显著性增高,同时Calpain2、p35/25和CDK5的表达水平也增加。②使用Ca²⁺螯合剂EGTA后,与对照DMSO给药组相比,Ca²⁺螯合剂EGTA给药组小鼠海马组织中tau蛋白在Ser396位的磷酸化显著下降,但未检测到tau蛋白在Thr181及Thr231位点的磷酸发生显著性变化,同时Calpain 2蛋白、p35/25和CDK5的表达水平降低。结论：人载脂蛋白APOE4引起小鼠海马tau蛋白磷酸化异常增高,并且可能是通过Calpain/p35-p25/CDK5信号通路调控tau蛋白Ser396位点磷酸化。     

钙离子及钙调蛋白对不同温度型冬小麦盐分吸收与累积的影响

以4种不同温度类型的冬小麦品种'小偃6号'、'NR9405'、'陕229'和'RB6'为材料,在0～250 mmol/L NaCl胁迫条件下,采用水培试验研究了钙调蛋白抑制剂(CPZ)、钙离子通道阻断剂(LaNO3)和钙离子螯合剂(EGTA)等对冬小麦盐分吸收的影响及其作用机理.结果显示:在中盐(150 mmol/L NaCl)胁迫下3种制剂均显著增加了各品种小麦植株对Na+的吸收,减少了K+吸收,且其作用依次表现为CPZ>EGTA>LaNO3.中盐胁迫下,各种制剂对冷型小麦'陕229'和'RB6'盐分吸收的影响大于暖型小麦'小偃6号'和‘NR9405',而高盐(250 mmol/L)胁迫下这种差异缩小.研究表明,Ca2+对小麦Na+吸收的调节作用主要通过钙调蛋白(CaM)来完成, CaM不但控制小麦Na+净吸收和累积,而且在小麦K+吸收中也起重要作用;在盐胁迫下冷型小麦 '陕229'和'RB6'对Ca2+和CaM活性的要求大于暖型小麦'小偃6号'和'NR9405'.     

黄河调水调沙对黄河口海域双酚A的影响

于2011年6—7月黄河调水调沙前、中期、后对黄河口海域双酚A(BPA)污染情况进行调查,研究了调水调沙对黄河口海域双酚A的影响。结果表明:黄河口13个站位表层海水和沉积物中均有双酚A检出,以调水调沙前测得的海水和沉积物中双酚A含量评估黄河口附近双酚A的污染程度。海水中双酚A浓度范围为13.6—64.0 ng/L,平均浓度为26.2 ng/L;沉积物中双酚A的浓度为0.559—2.73μg/kg干重,平均浓度为1.19μg/kg,是海水中平均含量的48倍。黄河河口区域海水中双酚A浓度受调水调沙影响而呈现较大变化,调水调沙后双酚A浓度明显增加,调水调沙前、后呈显著性差异(P0.01),说明陆源输入是黄河口区域中双酚A的主要污染来源。离入海口近的站位沉积物中双酚A浓度受调水调沙影响较大,呈显著性差异(P0.01),调水调沙后含量显著降低。黄河口海域已经遭受双酚A污染,存在生态安全问题。     

TOLL样受体4在哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖、凋亡中的作用

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)在哮喘状态下气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖、凋亡中的作用.方法:建立哮喘大鼠模型,分离、培养哮喘大鼠气道平滑肌细胞,应用小分子RNA干扰技术、脂质体转染法进行小分子RNA-TLR4的转染、MTT,法检测细胞增殖、TUNNEL法检测细胞凋亡情况、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)...     

非生物胁迫因子对棘孢木霉嗜铁素及钙调磷酸酶基因表达的影响

木霉菌(Trichoderma spp.)嗜铁素具有吸收、贮存和胞内运输铁的功能,对菌体自身的生长发育有重要作用,也是重要的生防促生因子,但嗜铁素的产量会受到环境中多种胁迫因子的影响。真菌的钙调磷酸酶基因能够调控外源离子的胁迫反应,但钙调磷酸酶信号通路与嗜铁素合成之间的关系并不明确。以棘孢木霉菌(Trichoderma asperellum)T6为材料,研究了NaCl、CaCl_2及pH对棘孢木霉菌T6嗜铁素产量以及嗜铁素合成关键基因(SidA)与钙调磷酸酶催化亚基基因(CnA)表达量的影响。结果表明,高浓度NaCl和CaCl_2以及高pH均能抑制嗜铁素的产生。利用半定量PCR分析得知,CnA基因与SidA基因之间存在一定的负调控关系,该结果与钙调磷酸酶专性抑制剂环孢菌素A能够提高嗜铁素产量的结果相一致。     

铝与钙调蛋白相互作用及其作用位点的研究

用500MHzNMR研究了铝与钙调蛋白的相互作用,主要研究了铝对钙调蛋白中芳香氨基酸残基(Tyr,His,Phe)构象变化的影响。实验结果表明,铝在钙饱和的钙调蛋白上存在着特异性的结合位点,结合位点数目至少为两个,第一结合位点可能位于钙调蛋白的N端结构域,第二结合位点靠近Ca~(2+)的Ⅲ结合域。Al~(3+)结合引起脱钙的钙调蛋白的构象变化不同于与Ca~(3+)结合引起的构象变化。Al~(3+)在CaM上的结合位点与Ca~(2+)的并不相同。柠檬酸等有机酸对铝的毒性有保护作用,这种保护作用是由于柠檬酸分子对铝的络合。     

Intracellular levels of calmodulin are increased in transformed cells

By using Hoechst 33342,rabbit anti calmodulin antibody,FITC-labeled goat anti rabbit IgG and SR101(sulfo rhodamine 101)simultaneously to stain individual normal and transformed cells,the microspectrophotometric analysis demonstrated that 3 markers which represented the nucleus,calmodulin and total protein respectively,could be recognized in individualj cells without interference,The phase of the cell cycle was determined by DNA content(Hoechst 33342),We found that in transformed cells(NIH3T3) tsRSV-LA90,cultured at 33℃ and transformed C3H10T1/2 Cells),the ration of calmodulin to total protein (based on the phases of cell cycle)was higher than that in normal cells (NIH3T3 tsRSV-LA90 cells,cultured at 39℃ and C3H10T1/2 cells)in every cell cycle phase,This ration increased obviously only from G1 to S phase in either normal or transformed cells.The results showed that calmodulinreally increased during the transformation,and its increase was specific.In the meantime when cells proceeded from G1 to S.the intraceollular calmodulin content also increased specifically.