日本七鳃鳗钙调蛋白分子克隆、组织定位及功能分析北大核心CSCD

钙调蛋白(calmodulin,CaM)是高度保守的钙离子结合蛋白质,可形成Ca2+-CaM复合体,从而调节细胞代谢以及靶酶的功能。日本七鳃鳗(Lampetra japonica)作为原始的无颌类脊椎动物,对研究脊椎动物分子起源进化及器官发育分化具有重要的研究价值。通过提取日本七鳃鳗髓组织总RNA,利用RT-PCR方法获得日本七鳃鳗CaM(简称Lj-CaM)基因并进行生物信息学分析。将LjCaM基因分别构建到原核表达载体p ColdⅠ和真核表达载体p EGFP-N1中,利用亲和层析技术纯化得到Lj-CaM蛋白。圆二色谱分析结果表明,Lj-CaM属于典型的α-螺旋结构型蛋白质。免疫印迹和免疫组化结果表明,CaM主要存在于日本七鳃鳗的肠、鳃、髓、肾组织中,在心和肝组织中几乎不表达。细胞免疫荧光结果显示,CaM定位于细胞核中。q PCR和免疫印迹方法检测发现,当293T细胞中Lj-CaM过表达时,对下游靶基因CaMKⅡ作用不明显,但促进PLA2G2A表达。本研究报道了日本七鳃鳗CaM结构、细胞组织定位分布以及基因调控研究,对其结构、分子起源与进化、分子调控及功能方面的研究奠定了基础。     

TnT-Hs和NSE在手足口病患儿中的表达水平及临床意义

目的:探讨TnT-Hs和NSE水平在手足口病患儿中的表达及临床意义。方法:选择我院2012年6月~2013年6月确诊为手足口病的住院患儿68例作为观察组,选择同期入院健康体检的68例正常儿童作为对照组,对比两组心肌钙蛋白T(TnT-Hs)与血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平;并对观察组EV71阳性患儿与阴性患儿TnT-Hs与NSE水平进行比较。结果:1相比健康对照组,观察组TnT-Hs与NSE水平均较高,差异有统计学意义(P0.01)。2EV71阳性患儿46例,阴性患儿22例,阳性患儿相比阴性患儿TnT-Hs与NSE水平较高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:Tn-T-Hs和NSE水平可反映手足口病患儿病情进展变化,其可作为早期预测手足口病患儿心肌损害及脑损伤的依据及重症病例的预警指标。     

神经钙蛋白δ的功能及其分子作用机制

神经钙蛋白δ(neurocalcinδ)作为神经钙敏感蛋白(neuronal calcium sensors,NCSs)家族的重要成员之一,具有分布广泛、结构较保守的特性.早期研究发现,神经钙蛋白δ具有两对EF手结构(EF1,EF2,EF3和EF4).EF1不能结合Ca2+,而EF2、EF3和EF4与Ca2+结合能促使其N端豆蔻酰暴露,进而实现其由细胞质到细胞质膜的转移定位以及与靶蛋白的结合,从而发挥重要效应.本综述根据神经钙蛋白δ的"Ca2+-豆蔻酰基开关"特性,一方面介绍其能与膜鸟苷酸环化酶反应,参与cGMP信号转导,进而影响视觉和嗅觉,甚至血压等生物学活动;另一方面,介绍神经钙蛋白δ通过与S100β、网格蛋白、肌动蛋白、微管等蛋白质之间的相互作用,并参与细胞内囊泡运输,从而影响细胞内大分子包装、运输等过程.本文还阐明了神经钙蛋白δ参与精子发生、细胞癌变、肾病发生等过程.由于神经钙蛋白δ对了解某些疾病的发生原理、信号转导过程、细胞内信息调控网络等具有重要意义,本综述将为研究相关疾病提供新的研究方向与理论基础.     

一种检测早期凋亡细胞的方法

本文介绍了一种定量检测早期凋亡细胞的流式细胞术——Annexin V-PI双染色法,并作了一些改进。     

钙调神经磷酸酶的研究进展

钙调神经磷酸酶(CaN)是一种受Ca²⁺/钙调素调节的丝/苏氨酸蛋白磷酸酶,广泛存在于哺乳动物的组织细胞中,作为Ca²⁺信号下游的一种效应分子,参与多种细胞功能的调节.在T细胞活化的信号传导中起到调节枢纽的作用;在神经递质的释放、突触可塑性方面亦有重要的调节作用.新近的研究表明,CaN在心肌肥厚的发生发展中起到中心作用.对CaN的分子结构、酶学特性、组织分布、信号传导及生物学功能方面的研究进展进行了介绍.     

热应激对乳鼠心肌细胞损伤作用的研究

目的：探讨热应激对心肌细胞的损伤作用及其机制。方法：用胰酶消化法分离Ｗｉｓｔａｒ大鼠乳鼠心肌细胞,使其暴露于３９℃、４１℃和４３℃水浴进行热应激。用生物化学法测定培养液中乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性的变化,用流式细胞仪（ＦＣＭ）测定心肌细胞调经的变化,用台盼蓝（ｔｒｙｐａｎ ｂｌｕｅ）染色法测定细胞坏死率的变化,用荧光分光光度法测定细胞内和培养液中活性氧（ＲＯＳ）含量的变化。结果：３９℃、４１℃、和４     

细胞核CaMK和Calcineurin 对大鼠心肌肥厚发生的作用

目的:研究大鼠心肌肥厚时,钙依赖的蛋白激酶和蛋白磷酸酶在心肌细胞膜、细胞浆和细胞核的分布规律,以探讨核钙信号与核反应在心肌肥厚发生过程中的病理生理意义.方法:制备腹主动脉缩窄大鼠心肌肥厚模型,同位素32P掺入法分别测定心肌细胞核、细胞浆和细胞膜的蛋白激酶活性及用无机磷生成显色法测定其蛋白磷酸酶活性.结果:腹主动脉缩窄术后4周大鼠心肌显著肥厚,伴有明显的血液动力学异常.与正常对照组相比较,腹主动脉缩窄心肌肥厚组心肌细胞核钙调素蛋白激酶(CaMK)活性增加101.1%(P＜0.01),其膜的酶活性升高40.2%(P＜0.01),而胞浆的酶活性不变(P＞0.05);心肌细胞核钙调神经磷酸酶(Calcineurin)活性增加43.6%(P＜0.05),膜和胞浆中其活性增加无显著性(P＞0.05).正常组和腹主动脉缩窄心肌肥厚组心肌细胞CaMK和Calcineurin活性分布为核＞膜＞胞浆(P＜0.01).结论:腹主动脉缩窄心肌肥厚时核内钙依赖的CaMK和Calcineurin活性增加,提示压力超负荷时细胞核内钙调节的蛋白磷酸化和去磷酸化水平增高,可能在介导心肌肥厚的发生中起重要作用.     

癫痫大鼠与正常大鼠脑中钙调神经磷酸酶及其底物的研究

报道了听源性癫痫大鼠发作后其脑内钙调神经磷酸酶（Ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ,ＣａＮ）及其底物蛋白磷酸化水平的改变,以ＰＮＰＰ为底物测ＣａＮ的活力,用间接ＥＬＩＳＡ测ＣａＮ的含量,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和２－Ｄ－ＰＡＧＥ并放射自显影的方法研究脑内蛋白质磷酸化水平,发现与正常大鼠相比,听源性癫痫大鼠发作后,脑内ＣａＮ的含量并没有改变,但比活力下降,其底物的磷酸化状态也有改变,其中一个３０ｋＤ蛋白磷酸化程度明显降     

植物钙调素研究进展

钙调素（Ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ,简称ＣａＭ）做为Ｃａ２＋的受体,在Ｃａ２＋信号系统传导中起着关键的作用,它通过和Ｃａ２＋的结合而激活一系列的靶酶和非酶蛋白质,从而调控生理代谢及基因表达。孙大业、郭艳林（１９９１）和龚明等人（１９９０）在各自的论著中对植物钙调素已作了介绍,本文除了涉及他们所没有提到的某些问题之外,重点介绍了植物ＣａＭ研究的新进展