Toll样受体3抑制人类巨噬细胞感染HIV的机制研究

Toll样受体（Toll like receptor,TLR）是固有免疫系统中的病原模式识别受体,在巨噬细胞抗感染免疫中发挥重要作用。TLR3特异性识别双链RNA,诱导细胞内多重信号传导,引发巨噬细胞产生抗病毒活性。本研究以TLR3激活剂多聚次黄苷酸-胞苷酸（polyinosinie：polycytidylic acid,Polyl：C）刺激人类巨噬细胞,发现能显著抑制胞内HIV病毒感染和复制。Poly I：C刺激后,巨噬细胞I型干扰素（interferon,IFN）和抗HIV胞嘧啶脱氨酶（APOBEC3G,A3G）表达水平显著上调;且具有抗HIV作用的MicroRNA（miRNA-28,125b,150,223,and382）的表达也显著上调。本研究初步揭示了TLR3激活后抗HIV感染的机制。     

细菌样颗粒——新型乳酸菌表面展示技术及其应用

细菌样颗粒(Bacterium-like particles,BLPs)是一种新型非遗传修饰型乳酸菌表面展示技术,外源蛋白可通过锚钩蛋白锚定于经热酸处理而得的乳酸菌肽聚糖骨架表面,形成空心表面展示颗粒。因其安全性高、表面展示密度大、黏膜递送效率高,又兼有佐剂效应,BLPs广泛应用于黏膜疫苗和黏膜佐剂的开发、病毒抗原的纯化、生物催化剂的制备等领域。本文就BLPs的构建、独特优势、目前的应用及尚需解决的问题等方面进行详细综述,以期展现BLPs新型表面展示平台的广阔应用前景。     

模式识别受体与肝脏疾病

天然免疫系统发挥防御作用的关键是对病原体的识别,这一识别主要由模式识别受体(patternrecognition receptors,PRR)完成.     

Tet-On3G系统调控人巨细胞病毒蛋白pUL23稳定表达的人胚肺成纤维细胞(HELF)系的建立

人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)为疱疹病毒家族一员,易导致免疫力低下或缺陷的人群严重疾病,目前对HCMV编码的皮层蛋白pUL23功能的相关报道很少。本研究应用Tet-On3G诱导表达系统,在人胚肺成纤维细胞(Human embryonic lung fibroblast,HELF)建立诱导表达HCMV病毒蛋白pUL23细胞模型。将病毒基因UL23和阳性对照基因EGFP分别定向插入应答慢病毒载体pLVX-TRE3G中,获得pLVX-TRE3GUL23-3×Flag、pLVX-TRE3G-EGFP重组慢病毒载体。运用二代慢病毒包装系统与Lenti-X293T包装细胞系,制备收获慢病毒后感染人胚肺成纤维细胞HELF。遗传霉素(Geneticin,G418)和嘌呤霉素(Puromycin,Puro)抗性筛选后多西环素(Doxycycline,Dox)诱导外源基因表达。感染后的细胞在96孔板有限稀释法成单克隆,分别采用RT-PCR与Western blot技术检测病毒UL23基因在mRNA水平与蛋白水平的表达量,筛选出当诱导时高效表达且未诱导时低表达的单克隆细胞;并评估Dox诱导剂量与诱导时间对外源蛋白pUL23表达的影响。限制性内切酶与测序显示重组质粒pLVX-TRE3G-UL23-3×Flag、pLVX-TRE3G-EGFP序列和方向正确。病毒蛋白pUL23在感染细胞中能够被诱导表达;当Dox浓度高于400ng/mL时pUL23蛋白表达量不再随Dox剂量增高而增高。在Dox诱导2h后,RT-PCR结果表明在921bp处有特定条带(UL23-3×Flag基因)与此同时,Western blot实验也检测到pUL23蛋白。这些结果表明,成功构建重组慢病毒载体,包装成慢病毒感染后,病毒基因UL23能够在人胚肺成纤维细胞中诱导表达。Dox的最佳工作浓度为400ng/mL,最佳诱导时间为12h至24h之间。这将为进一步研究病毒蛋白pU23的功能奠定基础。     

子痫前期患者外周血单核细胞Toll样受体4检测及其意义

目的：通过检测子痫前期（PE）患者外周血Toll样受体4（TLR4）表达及其分泌促炎细胞因子的功能,探讨单核细胞TLR4 在 PE 发病过程中的作用。方法：选取22 例子痫前期患者（PE 组）和23 例正常孕妇（HP 组）作为研究对象。经知情同意后抽取4 mL 静脉血,肝素钠抗凝。流式细胞术（FCM）检测单核细胞TLR4表达;脂多糖（LPS）刺激单核细胞18 小时,Luminex 液相芯片检测培 养上清液中肿瘤坏死因子（TNF）-alpha、白细胞介素（IL）-6、IL-12P70 和IL-10 浓度;并分析PE 患者单核细胞TLR4 阳性频率与外周 血清细胞因子浓度的相关性。结果：与HP 组相比,PE 组单核细胞TLR4 阳性细胞频率（TLR4+：23.2 (18.4-44.3) % vs59.7 (19.8-79.7) %）和平均荧光强度（MFI：32.3(27.6-49.2)vs48.6 (32.4- 93.2）明显升高,差异均有统计学意义（P<0.05）;单核细胞经50 ng/mL LPS 刺激培养18 小时,PE 组上清液TNF-alpha(243.5± 15.2 pg/mLvs123± 81.3 pg/mL)、IL-6(3122.7 ± 534.2 pg/mLvs1380.4± 332 pg/mL)浓度明显高于HP 组,IL-10(84.2 ± 24.9 pg/mL vs164.5 ± 47.1 pg/mL)低于HP 组,差异均有统计学意义（P<0.05）;PE 患 者单核细胞阳性频率与外周血清中细胞因子TNF-alpha、IL-6 具有相关性（r=0.634、r=0.528,P<0.05）。结论：PE 患者外周血单核细胞 TLR4表达明显增加,并处于活化状态,分泌较多的促炎细胞因子IL-6 和TNF-alpha,参与子痫前期的疾病过程。因此,抑制单核细胞 TLR4表达可能是治疗子痫前期的新途经。     

肿瘤坏死因子与病毒感染

肿瘤坏死因子是一种具有广泛生物学活性的细胞因子,在病毒感染中具重要作用,许多病毒能诱导机体细胞产生ＴＮＦ,研究表明ＴＮＦ能选择性地破坏病毒感染细胞,具有抗病毒作用。近几年研究发现ＴＮＦ能增加某些病毒复制,加速机体损害,与病毒感染疾病的严重程度有关。     

地中海型餐厅相关性胃肠炎与诺沃克样病毒

本对多变感染原,Norwalk样病毒(NLV)与三次连续的(餐厅相关)的胃肠炎暴发的重要性进行评价。作采用标准细菌学试验方法、大肠杆菌特异试验、vero毒素试验,电镜(EM)观察病毒及反转录PCR(RT—PCR)方法研究NLV。经以上方法无病原菌检出。在第一次暴发时,虽然以PCR检出vero毒素基因,但在大肠杆菌分离株中不能确定,故无意义。NLV是三次暴发中多次检测的重要对象。RT—PCR扩增产物阳性样的DNA序列和系统发育分析表明,仅NLV株与多次暴发相关,但NLV株对三次暴发的作用各不相同。PCR检测NLV敏感性高,但用EM都不能检出一例阳性样,与餐厅相关的暴发属地中海型餐厅,在这类餐厅,通常碟子中的食物直接用手指食用。试验分析表明,NLV是由客人或餐厅员工带人,而非因长期安置的贮水池引起。     

人乳头瘤病毒E7蛋白对细胞周期G1/S检查点的影响

高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈癌的发生关系已经明确,HPV编码的早期蛋白E7是HPV致宫颈癌的主要相关蛋白之一。G_1/S检查点是细胞周期中不可逆的关键点,决定了细胞进入细胞周期与否,与肿瘤的发生发展关系密切。pRb蛋白是调控细胞周期G_1/S检查点中的限速底物,是起调控作用的主要因子之一。E7通过影响pRb蛋白、E2F家族、Cyclin/CDK2复合物、p27蛋白、Dyrk1B等细胞周期相关蛋白来影响G_1/S检查点的正常工作,形成失控的细胞增殖。高危型HPV E7蛋白对细胞周期检查点的影响,既是HPV致癌机制的重要组成部分,也可能成为攻克此类癌症的突破口。本文综述了高危型HPV E7蛋白对细胞周期G_1/S检查点的影响。     

小麦苗期地下茎蛋白质双向电泳技术体系的优化

以东农冬麦1号为材料,对苗期地下茎处的蛋白提取方法、蛋白溶解、上样量、胶条的转移等方面进行了试验.结果表明:在蛋白提取方面,TCA/丙酮法(T法)和尿素/硫脲法(N法)相比T法能减少低丰度蛋白的损失得到蛋白点数更多的图谱.在蛋白溶解方面,经过两次水化液溶解的蛋纯度较高,在等电聚焦时能保持8000伏较高电压.上样量方面,10mg粗蛋白溶于两次水化液能得到清晰、分离效果好、蛋白点数较多的图像.胶条转移方面,先向胶面中加入400μl0.3%普通琼脂糖溶液后,用200μl的电极缓冲液冲洗胶条支撑膜会使胶条顺利转移到第二向胶面上且胶条与胶面间不会产生气泡.     

家蚕核型多角体病毒同源重复区hr5的结构和功能

家蚕核型多角体病毒(BmNPV)和首蓿尺蠖核型多角体病毒(AcMNPV)是宿主不同的同类昆虫杆状病毒.AcMNPV有5个同源重复区,hr5具较强增强子功能,最近被发现可能参与病毒DNA复制.Maeda等曾将BmNPV hrs图谱定位,最近又报道了BmNPV hr s的结构,但功能研究至今未见报道.与Maeda等同时,从野生型BmNPV基因组中克隆了hr 5区,进行了全序列测定,与Maeda等的报道有一定差别.功能分析证实,含BmNPV hr 5的质粒在辅助病毒存在下,不仅在宿主细胞(BmN)中能进行复制,而且在非宿主细胞 Sf 21中亦能进行复制.此外,不仅完整的BmNPV hr 5(含 8个重复单位),而且部分序列(含6个重复单位)亦显示上述功能.以上研究结果,并对hr 5在病毒 DNA复制过程中可能有的功能进行了探讨.