基于转录组测序对油茶角鲨烯合酶基因的克隆及分析

油茶是中国重要的木本油料树种,而角鲨烯在茶籽油中含量多少是茶油品质的重要指标,为提高油茶角鲨烯含量,以油茶种子转录组测序为基础,根据Unigene设计SQS基因RACE引物,克隆出基因全长共1 490 bp,开放阅读框1 266 bp,编码422个氨基酸,将氨基酸序列与其他植物SQS进行比对,构建进化树,分析物种间进化关系,进行蛋白质的生物信息学分析,包括蛋白质结构特点、理化性质、氨基酸组成及稳定性分析; 跨膜区域分析; 信号肽识别位点; 磷酸化位点; 二级结构及功能; 结构域分析。通过转录组测序和荧光实时定量分析了SQS基因在油茶种子发育各时期表达量变化规律,并提取各时期油脂,测定角鲨烯含量,发现两种基因表达量分析方法的结果有一致的变化趋势,且与各月份间角鲨烯含量有相同的变化规律。证明了转录组测序的有效性,并推测油茶角鲨烯合酶基因的表达量变化与角鲨烯含量的多少有直接关系,为后续从分子手段提高茶籽油中角鲨烯含量提供了理论基础。     

刺葡萄籽油功效成分及其动物学药理作用研究

目的:研究刺葡萄籽油中的功效成分及其动物学药理作用.方法:使用GC/MS对甲酯化和未经甲酯化处理的刺葡萄籽油进行分析,研究籽油中的功效成分,并以小白鼠为研究对象进行刺葡萄籽油的喂食.结果:超临界CO2萃取的刺葡萄籽油的GC/MS分析结果表明,刺葡萄籽油成分以脂肪酸为主,其中不饱和脂肪酸含量占87%,不饱和脂肪酸主要为亚油酸,其含量达82.32%,高于已有报道的葡萄籽油中亚油酸含量;未经甲酯化处理的籽油经GC/MS分析发现,刺葡萄籽油中含有一种具有较强生物活性的成分-角鲨烯,而赤霞珠葡萄的GC/MS分析中没有发现,也未见葡萄属植物中舍有角鲨烯成分的研究报道.通过动物学药理作用实验发现,刺葡萄籽油不仅能显著降低血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)含量,还能够在降低低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的同时,提高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量.结论:刺葡萄籽油中含有多种对人体有益的功效成分,值得人们进一步地研究.     

环氧角鲨烯环化酶在三萜化合物生物合成中的进展

三萜类化合物是植物代谢产物中最具多样性的化合物之一,具有广泛的生理活性和重要的经济价值.环氧角鲨烯环化酶(oxidosqualene cyclases,OSCs)催化2,3-氧化鲨烯环化生成不同类型的甾醇和植物三萜化合物,对天然产物的结构多样性具有重要意义.然而,目前对于OSCs酶催化2,3-氧化鲨烯发生环化多样性的机...     

甾醇生物合成中的关键酶-环氧角鲨烯环化酶的分子生物学研究

植物体中环氧角鲨烯环化酶催化2,3-环氧角鲨烯形成一系列三萜烯,为甾醇和三萜化合物的生物合成提供前体。这一催化反应被认为是甾醇和三萜化合物生物合成分支形成的关键位点．综述了甾醇和三萜化合物生物合成中的关键酶——环氧角鲨烯环化酶（OSCs）家族的生物学功能,基因克隆与属性,酶的细胞定位与酶活的表达调控等分子生物学研究进展．     

人指甲中特征脂类成分GC／MSD分析

目的：阐明正常健康成年人指甲特征性脂类化学成分,方法：溶剂法提取脂类成分,经酯化后,采用气相色谱－质谱－计算机联用技术分离鉴定,归一化法计算相对百分含量。结果：从正常健康老年人指甲中鉴定出17种成分,占总脂的89．431％,其中脂肪酸类12种（占40．838％）,酚类1种,蒽酮类1种,甾醇类1种,芳香酯1种,多烯类1种,结论：正常健康成年人指甲中的特征性脂类成分之一为角鲨烯,含量达37．172％。     

产角鲨烯细胞工厂的构建及关键基因的筛选、克隆与表达

角鲨烯因具有很强的抗氧化、抗菌和抗肿瘤活性,被普遍应用于医药、保健品和化妆品等领域。文中在实验室构建的高效合成萜类化合物底盘菌株工作的基础上,以角鲨烯为目标产物,通过过表达法尼基焦磷酸合酶基因ispA得到高效合成三萜化合物的底盘菌株;然后对原核生物来源的角鲨烯合酶进行系统发育分析、筛选、克隆和表达,得到两株高效合成角鲨烯的大肠杆菌Escherichia coli工程菌株。其中,导入来源于嗜热蓝细菌Thermosynechococcus elongatus和深蓝聚球蓝细菌Synechococcus lividus的角鲨烯合酶的工程菌株,角鲨烯产量分别达到 (16.5±1.4) mg/g (细胞干重含量,后同) 和 (12.0±1.9) mg/g,发酵液浓度达到 (167.1±14.3) mg/L和(121.8±19.5) mg/L。相比于当前普遍使用的人源角鲨烯合酶及初代菌株,来源于T. elongatus和S. lividus的角鲨烯合酶分别使角鲨烯产量大幅提升了3.3倍和2.4倍,为原核细胞异源合成角鲨烯打下坚实的基础。     

省沽油种子超临界CO2 萃取物中角鲨烯和维生素E的GC-MS分析

用气相色谱-质谱联用(GC-MS)方法对超临界CO2萃取出的省沽油种子油中角鲨烯和维生素E进行分析。省沽油种子油的萃取采用超临界CO2萃取技术,压力25MPa,温度50℃,时间2h;种子油用GC-MS方法分析,以正三十二烷为内标,用内标标准曲线法同时测定省沽油种子油中角鲨烯和维生素E的含量。结果表明:超临界CO2萃取种子油的收率为28.83%;所建立的定量分析方法平均回收率在96.0%~99.0%之间,相对标准偏差小于2.8%,线性相关系数大于0.999,方法检测限在2.0~2.5mg/L之间;省沽油种子油中含角鲨烯4.65%,维生素E1.58%。     

生物活性产品角鲨烯的特性及其开发应用

角鲨烯是几类常见甾醇的前体物质,具有重要的生物活性和广泛的食药价值。由于对海洋野生动物及渔业资源的保护,角鲨烯的商业化生产受到了极大限制。寻找新的可持续来源的角鲨烯资源十分重要。本文主要阐述了角鲨烯的生物活性、来源及其应用,分析了不同生物来源角鲨烯的生物合成途径与常见的提取工艺,提出了利用微生物,尤其是微藻进行高价值角鲨烯绿色生产的经济可行性。文章以期为角鲨烯的工业化生产与应用提供理论基础。     

三叶木通转录组分析及三萜皂苷生物合成途径关键酶基因的发掘

为了解三叶木通(Akebia trifoliata(Thunb.)Koidz.)的三萜皂苷合成途径及其关键酶,本研究对其花、叶、根、茎进行转录组测序,组装获得了57.25 Gb数据,含140 859个unigenes,序列平均长度为1350 bp。KEGG代谢通路富集结果显示,517个unigenes参与三萜皂苷合成相关的3条代谢途径,其中415个unigenes编码三萜皂苷生物合成途径的19个关键酶。对三萜皂苷生物合成过程中的关键酶角鲨烯环氧酶(SE)进行序列分析和同源建模,发现其具有保守的底物结合结构域。将三叶木通茎与花、叶、根的基因表达水平进行比较,发现茎与根相比较其上调基因数目最多,其中295个差异表达基因(DEGs)与三萜皂苷生物合成途径相关。     

锁掷酵母油中营养成分的分离和鉴定

【目的】研究一种新来源的微生物油脂的主要组成。【方法】对锁掷酵母(Sporidiobolus pararoseus)油中的主要功能性成分用两次硅胶柱层析进行分离纯化,得到9种物质。对这9种物质用薄板层析法、液相色谱洗脱和质谱法进行定量和定性分析。【结果】这9种物质为角鲨烯、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、麦角固醇酯、红酵母烯、三甘酯、游离脂肪酸、麦角固醇和红酵母红素。其中麦角固醇的总浓度为3.2 g/kg油,16.7%的麦角固醇以麦角固醇酯的形式存在,角鲨烯的含量为1.25 g/kg油,类胡萝卜素含量为0.4 g/kg油。分析了麦角固醇酯和三甘酯中的脂肪酸组成,锁掷酵母油含有约73%的油酸,它可以作为良好的单不饱和脂肪酸来源。【结论】锁掷酵母油可能成为功能性油脂的来源。