蛛丝蛋白基因在大肠杆菌中表达研究

利用大腹园蛛基因组文库筛选获得一段693 bp基因片段,经分析该段基因处于鞭毛状丝基因重复区域,且其中包含了一个完整的重复框架。通过基因密码子优化,在其3′和5′端分别融合蛋白质亲和层析标签,克隆于pET30LIC表达载体中,在不同的大肠杆菌中进行表达试验。实验结果显示:经过密码子优化,融合目的蛋白基因在BL21(DE3)中得到了高效表达,产量达到25~30mg/L,纯化产物纯度达90%以上。SDS-PAGE和W estern-b lotting检测目的融合蛋白均与预期蛋白大小一致。     

重组人睫状神经营养因子肽图分析

建立重组人睫状神经营养因子(recombinant human ciliary neurotrophic factor,rhCNTF)的肽图分析方法,用于rh-CNTF的质量控制。胰蛋白酶对rhCNTF进行酶切后,利用RP-HPLC方法对酶切液进行分析,以获得胰蛋白酶切最佳条件及色谱条件,并对连续3批样品进行分析。rhCNTF的胰蛋白酶最佳酶切条件为37℃酶切24h,以A(0.1%TFA-H2O)、B(0.1%TFA-CH3CN)为流动相,采用梯度洗脱的方法对酶切液进行分析,结果连续3批rhCNTF制备产品的肽图完全一致,且其检出峰数目与理论推测值相符。3批产品肽图的一致性为rhCNTF产品的结构同一性提供了有利证据,同时,建立了rhCNTF产品质量控制的一项指标。     

酪酸梭状芽孢杆菌低成本培养基的优化

本文重点在于提高酪酸梭状芽孢杆菌活菌数量,降低发酵培养基成本。通过对发酵培养基中不同碳源、氮源、生长因子等进行单因素研究,得到最佳培养基组成：可溶性淀粉10/L,豆粕（中性蛋白酶水解3h）20g／L,玉米浆3g／L。用此培养基在37℃培养24h,采用高层半固体琼脂试管法对酪酸梭状芽孢杆菌进行活菌计数,活菌数可达8．2×10^8cfu／mL.培养基中添加K2HPO45g／L、MgSO4·7H2O0．2g／L、MnSO3·H2O0．2g/L培养32h时,酪酸梭状芽孢杆菌芽孢转化率可达95％。     

粗毛栓菌和蜡状芽孢杆菌及其共固定菌对pb2+的吸附

将粗毛栓菌菌丝球与蜡状芽孢杆菌共固定为共固定菌.以粗毛栓菌菌丝球、蜡状芽孢杆菌和共固定菌为研究对象,测定不同吸附时间、初始pH、吸附剂浓度和pb2+浓度对3种生物吸附剂吸附pb2+的影响,并将3种生物吸附剂吸附pb2+前后的红外吸收光谱进行分析比较.结果表明:在吸附剂浓度为2g.L-1、pH为5.0、pb2+浓度为50 mg·L-1条件下对pb2+吸附lh效果良好,其吸附率分别为71.7％、91.0％和96.9％.生物吸附剂红外光谱主要由蛋白质、碳水化合物和含硫、磷酸基团的吸收带组成,表明对pb2+吸附起主要作用的官能团是羟基、羧基、磷酸基和含硫基团.     

微型腹腔镜治疗小儿鞘膜积液的临床研究

目的:评价微型腹腔镜下缝扎鞘状突治疗小儿鞘膜积液的临床治疗效果方法:回顾分析2006年6月至2011年6月应用微型腹腔镜缝扎鞘状突治疗的小儿鞘膜积液1012例的临床资料.结果:均在腹腔镜下完成手术,手术时间单侧( 14.3± 3.7)min,双侧(22.1± 4.2)min.术后发生阴囊肿胀16例,皮下气肿3例,脐上缘切口大网膜突出2例,线结反应2例,均经及时处理后痊愈.无复发、肠粘连、腹腔内脏器损伤、切口感染、医源性隐睾及睾丸萎缩等并发症.结论:微型腹腔镜下鞘状突缝扎术治疗小儿鞘膜积液适用于各型鞘膜积液,具有手术时间短、效果好、损伤小、恢复快、并发症少,并可发现并处理对侧隐性鞘状突未闭合等优点.     

蛋白酶抗性人睫状神经营养因子突变体基因的构建及其在巴斯德毕赤酵母中的表达

AX15是一种比天然睫状神经营养因子具有更高的生物学活性、更好的稳定性和可溶性的hCNTF突变体。在巴斯德毕赤酵母中表达时AX15易发生降解。氨基酸序列分析表明降解位于由12和13位氨基酸残基组成的双碱性氨基酸之后。根据KEX2蛋白酶的底物专一性把双碱性氨基酸从RR变为RK,构建了KEX2抗性的AX15突变体AX15（R13K）。AX15（R13K）的稳定性得到了显著的提高,在诱导100 h后也未发生降解。利用超滤浓缩和凝胶过滤得到了纯度>90%的AX15（R13K）。TF-1细胞存活实验表明AX15（R13K）具有与AX15相同的生物学活性。蛋白酶抗性人睫状神经营养因子突变体可能具有更好的体内稳定性,在临床应用上具有潜在的优势。     

小儿伪膜性肠炎58例临床分析

伪膜性肠炎是难辨梭状芽胞杆菌的外毒素所致的结肠和小肠粘膜的急性坏死炎症,并在坏死粘膜上形成伪膜.本病临床表现不一,重者可致死亡.1998年1月～2003年12月,我科共收治伪膜性肠炎58例,现报告如下.     

一品红组织培养中植物激素对胚状体发生的效应

以一品红(Euphorbia pulcherrima Willd)幼茎为外植体,接种在培养基MS+ZT 0.5mg*L-1(以下单位相同)、NAA 0.5、IBA 0.5、2,4-D 1.0、6-BA 1.0上诱导愈伤组织,其中以MS+NAA 0.5时愈伤组织诱导率最高,为96.4%.将继代培养的愈伤组织,接种到MS+ZT 1.0+NAA 0-2.0、IBA 0-2.0、2,4-D 0-2.0;MS+6-BA 1.0+NAA 0-2.0、IBA 0-2.0、2,4-D 0-2.0培养基上,进行胚状体的分化培养,其中以ZT 1.0+2,4-D 0.5效果最好.     

非洲菊盘状花雄蕊发育与舌状花生长着色的对应关系

非洲菊(Gerbern hybrida)头状花序由外轮舌状花和内轮盘状花构成。通过观察内轮盘状花雄蕊花粉囊和花粉粒的形态结构与发育顺序,和测定外轮舌状花花瓣的长度、宽度、花色素苷含量等,对它们之间的对应关系进行了研究。花序外轮舌状花花瓣开始着色时为P3期,此时第1轮盘状花出现成熟花粉粒。研究明确了内轮盘状花花粉粒发育与外轮舌状花生长时期和花色素苷积累的对应关系。     

蜡状芽孢杆菌S1发酵条件的研究

对一种新近分离的蜡状芽孢杆菌（Bacillus Cereus)菌株S1发酵产新型抗真菌多肽APS的发酵培养基组成（碳,氮源）和工艺条件（发酵温度,初始,PH,通气方式和通气量）进行了摸索,通过单因互实验和正交优化实验,确定了S1发酵培养基的组成。麸皮5％,玉米粉5％,尿素0．2％,或NH4NO31．5％,酵母浸亮1．5％,葡萄糖6％,NaCl0．1％;最适发酵培养温度为28度;最适发酵培养初始Ph为7．4或6．8,。在优化条件下,效价最高为8－10mg/ml,S1生长的最适温度和初始PH为30度和7．0,通气对S1发酵具有显著的影响。