正交优化法建立奶牛基因组DNA RAPD-PCR最佳反应体系

从 36头荷斯坦奶牛血样中提取基因组DNA ,以相同DNA浓度混成DNA池。以其为模板 ,通过正交设计试验 ,建立了RAPD PCR最佳反应体系。     

盐藻RAPD反应条件的优化

从盐藻中提取基因组DNA作为模板进行RAPD反应的优化试验 ,获得PCR扩增反应的最佳条件 :随机引物为CPS32 0 (5′ GGCTCATGTG 3′) ;2 0 μl体系中Mg2 2 .0mmol/L ,退火温度 35℃ ;Taq酶活性值 0 .8U。     

抗真菌拮抗放线菌的筛选及摇床发酵条件的优化

从陕西渭北旱原的土壤中分离到 1株对水稻稻瘟、小麦赤霉、棉花枯萎、小麦根腐、小麦全蚀、梨黑星等多种植物病原真菌拮抗性好的放线菌。对其进一步纯化后 ,进行发酵条件的优化 ,认为选用 1 2号培养基 ,pH 8.0 ,培养 72h ,3 0～ 3 4℃ ,1 5 0r/min条件为最佳。     

黑翅土白蚁乙酰胆碱酯酶最佳反应体系的建立及药剂敏感度比较

用正交试验方法研究了酶浓度、底物浓度、反应体系pH值、反应温度、反应时间5个因素对黑翅土白蚁Odontotermes formosanus (Shiraki)乙酰胆碱酯酶(AChE)活性测定的影响。通过对正交试验结果进行极差和方差分析,明确了测定黑翅土白蚁AChE活性的最适反应条件是酶浓度为12.5 g/L,底物浓度为8 mmol/L,pH值8.0,反应温度40℃,反应时间5 min。此外,研究了6种药剂对黑翅土白蚁体内AChE活性的影响。结果表明：灭多威、辛硫磷、三唑磷、丙溴磷、马拉硫磷和氧化乐果6种药剂对黑翅土白蚁AChE抑制中浓度(IC₅₀)分别为3.52×10^-4,1.86×10^-3,5.13×10^-3,9.55×10^-4,8.81×10^-3,和1.39×10^-2 mol/L。在3.3×10^-7～5×10^-3 mol/L的浓度范围内,上述6种药剂对黑翅土白蚁体内AChE活性的抑制作用都具有明显的剂量效应关系。     

海滨锦葵油制备生物柴油工艺条件优化

以海滨锦葵油为原料制备生物柴油。通过单因素试验及正交试验研究了反应温度、催化剂用量、醇油摩尔比、反应时间、搅拌强度等因素对酯交换率的影响。结果表明,在试验范围内各影响因素对酯交换率作用的大小依次为：搅拌强度＞催化剂用量＞醇油摩尔比＞反应时间＞反应温度。海滨锦葵油制备生物柴油的最佳工艺参数为：搅拌强度为1800r.min-1,催化剂KOH用量为海滨锦葵油质量的1%,醇油摩尔比6/1,反应时间60min,反应温度65℃,在该工艺条件下,酯交换反应三次,酯交换率达到97.8%。     

结缕草属植物SSR反应体系的优化及其应用

以结缕草属植物DNA为模板,应用正交设计法对简单重复序列(simple sequence repeats,SSR)反应体系中的各个主要影响因子进行了优化筛选,并通过比较不同浓度的模板DNA对聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的影响,确立了适合结缕革属植物SSR-PCR反应的最佳体系.结果表明,10μl的SSR反应体系中各组分的最适浓度分别为:10×PCR缓冲液,Mg2+ 2.5mmol/L,dNTP 200μmol/L,左右引物分别为0.6μmol/L,Taq DNA聚合酶0.5U,模板DNA的用量在30～90ng均可.利用该优化体系,通过30对SSR引物对包含结缕草属植物4个种的10份材料进行了种质鉴定,结果发现Xgwm系列SSR引物可以有效地用于结缕草属植物不同种源间的鉴定及遗传多样性研究.其中有3对引物Xgwm459-6A、Xgwm149-4B和Xgwm135-1A因具有特异性条带或条带的缺失可以很明显地将大穗结缕草Z010与其他材料区分开来,在抗寒性和青绿期两极端类型材料的研究中发现,引物Xgwm484-2D和Xgwm44-7D均在抗素性弱的部分材料和青绿期长的部分材料中扩增出一条抗寒性强和青绿期短的材料中没有的特异带,且两对引物中具有特异带的材料具有较高的一致性,初步认为这两标记可能与结缕革属植物的抗寒性或青绿期相关.     

超声辅助从柿叶中提取熊果酸的工艺研究

通过单因素实验,以熊果酸的提取率为指标,考察了柿叶中熊果酸超声提取过程的几个影响因素;并通过正交实验,对过程参数进行了优化。结果表明,各因素对熊果酸提取效果的影响程度从高到低分别是：乙醇体积分数→提取次数→提取时间→液固比;确定的最适提取条件为：体积分数95％乙醇溶液超声提取2次,每次40min,液固比为10：1。     

丙酮提取金顶侧耳发酵液多糖的优化设计

以液体深层发酵法培养金顶侧耳,发酵液以丙酮为提取剂在不同的浓度﹑时间﹑温度条件下提取多糖,利用正交设计试验分析,得到了一种优化方案。试验结果表明:发酵液多糖提取最优方案是提取温度为70℃、丙酮浓度为75%、提取时间为1.5h。     

大鼠骨髓间充质干细胞分离与培养条件的优化研究

目的:建立和优化大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的分离培养条件,以获得群体均一、未分化状态保持良好的MSCs.方法:收集不同周龄大鼠骨髓细胞;以不同浓度Percoll密度梯度离心分离骨髓单个核细胞;以60%低糖DMEM40%MCDB201为基础培养基,培养24h去悬浮细胞;以不同接种密度传代培养;碱性磷酸酶染色和油红O染色考察MSCs向骨和脂肪组织分化的潜能.结果:采用57%Percoll液的分离效果优于70%Percoll液.6周龄(体重约180g)大鼠能在细胞分离的质和量上达到最佳效果.24h进行悬浮细胞去除、5×103/cm2接种密度传代培养,光镜和电镜显示MSCs增殖能力强,功能状态活跃,成脂成骨实验显示多向分化潜能保持良好.结论:优化大鼠周龄、分离液的密度、细胞培养条件及改进培养方法有助于获得多向分化潜能保持良好的均一的MSCs.     

α-淀粉酶水解魔芋飞粉最佳条件优化的研究

本研究采用单因素和正交试验的方法对α-淀粉酶水解魔芋飞粉的酶用量、pH值、温度、[Ca2 ]和底物浓度等条件进行优化,结果表明当α-淀粉酶用量为4u/g淀粉、pH为6.0、温度为60℃、[Ca2 ]为0.01mol/L和底物浓度为8%时,水解度达20%,为最佳反应条件,研究为进一步利用α-淀粉酶水解魔芋飞粉生产燃料乙醇奠定了基础.