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971.
用差异显示技术寻找家蚕诱导前后特异表达的基因 总被引:8,自引:0,他引:8
分别抽取诱导和未诱导家蚕(Bombyx mori)蛹脂肪体总RNA进行DDRT-PCR反应。产物于非变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳展开,得到的差异条带扩增后大多可以在2%琼脂糖凝胶上得到一条以上的带。Northern blot证明为阳性的一条带克隆后得到6个阳性转化子,SSCP证明它们含有相同的插入片段。对其中之一进行测序,结果显示片段长241bp,没有发现同源性较高的基因。对此基因的进一步研究有望揭示它在昆虫免疫反应中可能扮演的角色。 相似文献
972.
产气肠杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶基因的克隆和表达及影响重组酶活性的因素 总被引:4,自引:0,他引:4
用PCR方法从产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)中克隆出09kb的DNA片段,经DNA测序证明是α-乙酰乳酸脱羧酶(α-acetolactate decarboxylase,α-ALDC)基因。将α-ALDC基因重组到质粒pBV220后,转化大肠杆菌,经筛选获得高效表达的重组子菌株。重组α-ALDC基因表达量占菌体总蛋白量的27%。酶活检测表明重组子细胞表达的α-ALDC活性是产气肠杆菌的12000倍。另外,粗提的重组α-ALDC的最适pH为6.5~7.0,pH稳定范围为5.5~8.0,适合的温度为35~45℃。Ba2+、Cd2+、Fe2+、Co2+、Mn2+、Sn2+可提高重组α-ALDC的活性。氨基酸修饰剂可降低其活性。 相似文献
973.
人微小纤溶酶原基因在甲醇营养型酵母中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
用PCR方法扩增人微小纤溶酶原(Microplasminogen,mplg)cDNA,与分泌型酵母表达载体pHILD8重组,构成受醇氧化酶基因(AOX1)的启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒,然后转化GS115酵母菌,经表型筛选、PCR扩增筛选阳性克隆,然后以甲醇诱导表达,mplg分泌至培液,以酪蛋白琼脂糖平板溶圈法、发色底物法检测,mplg显示出纤溶活性。 相似文献
974.
唾液酸(NANA)是一族神经氨酸类衍生物,它处于许多糖蛋白的寡糖链的非还原末端,具有重要的生理功能和药用价值。由于唾液酸的常规化学合成分离方法复杂,难以大量制备,因此价格很贵。而用酶法合成唾液酸,即在唾液酸醛缩酶(ALD)作用下,以丙酮酸钠和NI乙酰甘露糖胺为底物合成唾液酸.则原料便宜,步骤简单、产率高,且适合工业化生产。但唾液酸醛缩酶是一个诱导酶,只能在以唾液酸为唯一碳源的培养基下才能生成,这就大大影响了它的应用。因此,我们构建了产该酶的工程菌,为唾液酸作为药物和原料药的大量应用打下了基础。 相似文献
975.
976.
利用PCR扩增方法获得1.5 kb人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)基因组基因,将其受控于2.6 kb的鼠乳清酸蛋白(WAP)基因的启动子下,构建成乳腺表达载体.通过显微注射方法建立转基因鼠,PCR及DNA印迹鉴定证实获得两只转基因阳性鼠.在其乳腺表达出极低的G-CSF.为探讨低表达的原因,采用RT-PCR方法,从转基因鼠乳腺获得G-CSF cDNA,序列分析表明,其RNA剪接出现错误,将其第四外显子识别为内含子,由此导致其低水平表达. 相似文献
977.
NaCl 胁迫下小麦突变体和野生型叶片中一些有机溶质累积和基因表达差异 总被引:5,自引:0,他引:5
盐胁迫下突变体和野生型叶片中的脯氨酸累积量均有显著的增加,野生型的增加幅度不及突变体。至96 h ,两者含量均下降,但突变体的脯氨酸含量仍高于野生型。100m mol/L的NaCl 胁迫72 h ,突变体叶片中可溶性糖的含量有显著的增加,增加量随盐浓度增加而降低。至96 h,各个盐浓度处理的突变体可溶性糖的含量基本恢复到其对照的水平;除100 mmol/L 盐胁迫处理组外,野生型叶片中可溶性糖含量均大幅度下降。盐胁迫下突变体和野生型叶片细胞可溶性蛋白组分有明显的差异。mRNA 差异显示结果表明,突变体有6 个差异性的cDNA 片段 相似文献
978.
家蚕NPV SOD基因序列和在大肠杆菌中表达 总被引:3,自引:0,他引:3
通过PCR 克隆了家蚕核型多角体病毒(BmNPV) SOD基因, 并在大肠杆菌中进行表达, 证明了Bm NPVSOD基因产物确有SOD活性, 其活力单位约为576 u/mL 培养液。DNA 测序结果表明Bm NPV SOD 基因编码151 个氨基酸, 与人的SOD1 基因的核苷酸同源性为56 % , 与AcNPV 拟为的SOD基因同源性为97 .2% 。 相似文献
979.
利用细小RNA 病毒属脑炎和心肌炎病毒(EMCV)的内核糖体进入位点(IRES)元件构建了人肿瘤坏死因子受体75 基因(hTR75) 和新霉素抗性基因(neoR)的双顺反子表达载体, 通过电脉冲转染BHK21 细胞, 筛选出分别和同时稳定过量表达两种hTNF受体的细胞株。这些细胞在mRNA 和蛋白质水平均可检测到hTR75 的表达。利用野生型和具有两种受体选择性结合活性的hTNFα突变体对这些细胞株进行测定, 发现过量表达的hTR75 可以独立地介导hTNFα对BHK21 细胞的细胞毒性, 而hTR55 的存在并不能显著增强这种作用。上述结果为进一步阐明TR75 的功能以及两种受体间的相互作用提供了一条新的途径。 相似文献
980.
家蚕NPV SOD基因序列和大肠杆菌中表达 总被引:7,自引:0,他引:7
通过PCR克隆了家蚕核型多角体病毒(BmNPV)SOD基因,并在大肠杆菌进行表达,证明了BmNPVSOD基因产物确有SOD活性,其活力单位约为576u/mL培养液。DNA测序结果表明BmNPVSOD基因编码151个氨基酸,与人的SOD1基因的核苷到同源性为56%,与AcNPV拟为的SOD基因同源性为97.2%。 相似文献