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941.
肝再生增强因子的cDNA克隆,表达及表达产物的生物活性研究 总被引:23,自引:1,他引:22
以肝部分切除后再生肝组织为起始材料,利用RT-PCR扩增出大夺再生增强因子(ALR),亚克隆子于PGEM-T载体,核苷酸序列测定证实为大鼠ALR;将ALPCDNA亚克隆于PBV220质粒,构建了原核表达载体,并获高效表达菌株,特异表达蛋白占细菌总蛋白的15%,原核表达的ALR在体外缺乏促进大鼠原代培养肝细胞及SMMC-7721肝癌细胞DNA合成的活性,但天体内1/3肝部分切除模型中可刺激肝细胞DN 相似文献
942.
943.
人类免疫缺陷病毒1型(HIV—1)核心蛋白(p24)在大肠杆菌中的表达,纯化… 总被引:2,自引:0,他引:2
在大肠杆菌中,利用新构建的含T7噬菌体g-10核糖体结合位点(RBS),以及λ噬菌体PR启动子的新型原核表达载体,通过表达gag-pol基因片段,获得了具有天然序更的人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)核心蛋白P24(CA)的高效表达,克隆的gag-pol基因片段 在其阅读框架移位区域插入了4bp碱基,其的病毒蛋白酶在阅读框架上与gag一致,从而实现了对gag-pol融合蛋白有有效加工,产生成熟的核 相似文献
944.
SSKOIDE 《Cell research》1997,7(1):51-59
INTRODUCTIONEpidermalgrowthfactor(EGF)wasinitiallyisolatedandpurifiedfromthesubmaxillarygland(SMG)ofmalemouse[1].Itisapolypeptidecomposedof53aminoacidresidues[2].Itinfluencescellproliferationanddifferentiationandmodulatesthegrowthanddevelopmentofmammalianorgans[3--7].AnoteworthyfindingisthatextirpationofmouseSMGresultsinamarkedreductionofserumEGFconcentrationassociatedwithanimpairedspermatogenesis[3].ThisfindingsuggeststhatEGFmayregulatespermproductionanddifferentiation.Inhumantest… 相似文献
945.
946.
鸡肌球蛋白轻链激酶表达载体的构建 总被引:3,自引:0,他引:3
鸡肌球蛋白轻链激酶(MLCK)在调节平滑肌细胞收缩中具有重要作用。用PCR产生构建所需的限制性内切酶Sal I位点,将鸡MLCK cDNA插入质粒pBKrsv中,构建成pBKrsv-MLCK,并通过酶切图谱、SalI位点序列分析得到证实。重组质粒在大肠杆菌中获得表达。 相似文献
947.
rhGM—CSF/LIF融合蛋白基因的克隆及表达 总被引:2,自引:0,他引:2
利用基因重组技术,人工构建了一个编码五肽G-S-G-G-S的基因接头,将GM-CSF和LIF的cDNA相连而构成融合基因,将融合基因载入原核表达载体pBV220后转化大肠杆菌,经热诱导后进行Western印迹反应鉴定证实获得rhGM-CSF/LIF融合蛋白(简称rhgM-LIF)活性测定表明重组的融合蛋白具有两因子双重活性。 相似文献
948.
报道了人肿瘤坏死因子α(hTNFα)基因穿梭表达载体的构建及其在丝状体蓝藻鱼腥藻 712 0中的表达和鉴定结果 .将质粒pRL rhTNF上hTNFα的cDNA连于pRL 43 9质粒上的PpsbA启动子下游 ,得到中间载体pRL TC .进一步与穿梭质粒pDC 8重组 ,得到可在大肠杆菌和蓝藻中均可表达的穿梭表达载体pDC TNF .pRL rhTNF ,pRL TC和pDC TNF三者在大肠杆菌中的表达量分别为 11.8% ,16 9%和 15 .0 % .通过三亲接合转移将pDC TNF引入鱼腥藻 712 0中并获稳定遗传的转基因株 .从转基因的鱼腥藻 712 0中检测到pDC TNF质粒的存在 ,且在和TNFα的cDNA探针进行的Southern杂交中呈阳性反应 .抽提转基因藻的蛋白样品进行检测 ,在Western印迹中和TNFα单克隆抗体呈阳性反应 .采用TNF对L92 9细胞的细胞毒性方法 ,证明转基因藻粗提液中 ,TNF确有细胞毒活性 . 相似文献
949.
用重组p27Kip1蛋白(rP27Kip1) 免疫小鼠,从免疫和未经免疫的小鼠脾脏抽提mRNA并扩增小鼠H链(H链)及L链(L链)基因,分别组装成单链可变区片段(ScFv)基因,构建噬菌体免疫抗体库及天然抗体库. 文库仅经一轮抗原-抗体亲和筛选后,用TaqⅠ/HinfⅠ酶切分析转化子. 获自免疫抗体库的64个克隆中,有11个克隆的酶切片段相同,而天然抗体库的64个克隆的片段则都彼此不同,但有1个克隆的酶切片段与免疫抗体库的11个克隆酶切片段相同. 将这些酶切图谱相同的重组片段分别克隆入原核表达载体pET28b(+),并在大肠杆菌(E. coli)中表达,表达产物经ELISA分析,证实可特异结合rP27Kip1抗原,一方面说明在抗体筛选过程中辅以酶切图谱分析,可以有效提高筛选效率,另一方面,也说明从噬菌体抗体库筛选特异性抗体是制备单克隆抗体(McAb)的理想途径之一. 相似文献
950.