Y盒结合蛋白1单克隆抗体的研制、表位测定及其免疫学应用

建立稳定分泌抗人Y盒结合蛋白1单克隆抗体(anti-YB-1 mAb)的杂交瘤细胞株,鉴定其表位与免疫学应用。将重组YB-1蛋白免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合。经ELISA法筛选鉴定、定株后采用腹水诱生法制备anti-YB-1 mAb;Protein G亲和层析法纯化mAb,ELISA法测定mAb效价、亚型及相对亲和力。采用抗原表位预测法鉴定anti-YB-1 mAb识别表位所在区域。Western blot和免疫组化鉴定mAb识别内源性YB-1的特异性。经筛选鉴定获得2株稳定分泌anti-YB-1 mAb的杂交瘤细胞(1-D9,3-E8);腹水抗体效价均≥1×10-6,亚型均为IgGl;1-D9和3-E8单抗识别表位分别位于(134-160aa)与(266-303aa)肽段。Western blot、免疫组化结果证实anti-YB-1 mAb能特异性识别内源性YB-1。该研究为YB-1免疫学定性、定量检测方法的建立、肿瘤靶向抗体治疗及进一步探讨YB-1的生物学功能奠定了基础。     

女人要好好呵护自己的乳房——乳腺癌的防治

乳腺于青春期开始发育,乳房腺体由15～20个腺叶组成,腺叶分成若干个腺小叶,每一腺小叶又由数十个腺泡组成。这些腺泡紧密地排列在小乳管周围,腺泡的开口与小乳管相连。总导管又称输入管,开口于乳头。静止期乳腺是指未孕女性的乳腺,腺体不发达;     

SPECIES OF THE GENUS PHOBETES F(O)RSTER (HYMENOPTERA, ICHNEUMONIDAE, CTENOPELMATINAE) FROM CHINA WITH AKEY TO SPECIES KNOWN IN CHINA

报道在江西和河南发现的浮姬蜂属Phobetes F(o)rster,1869的种类,其中有2新种:白环浮姬蜂Ph.albiannularis sp.nov.和河南浮姬蜂Ph.henanensis sp.nov.;中国1新纪录种:北海道浮姬蜂Ph.sapporensis( Uchida,1930).指出了新种与近似种的鉴别特征,并附彩色特征图.编制了该属中国已知种的检索表.     

植物甜蛋白马宾灵(Mabinlin Ⅱ)的二级结构及其B细胞抗原表位预测

马宾灵(MabinlinⅡ)是中国所特有的植物甜蛋白,在目前已知的7种植物甜蛋白中具有最佳的热稳定性,将其作为新型甜味剂有着广阔的市场前景。本研究以马宾灵的氨基酸序列为基础,采用Garnier-Robson方法和Chou-Fasman方法预测马宾灵的二级结构,采用Karplus-Schulz方法预测马宾灵的蛋白质骨架区柔韧性,采用Kyte-Doolittle方法预测马宾灵的蛋白质疏水性,采用Emini方法预测马宾灵的蛋白质表面可能性,采用Jameson-Wolf方法预测马宾灵的B细胞抗原表位。分析结果表明,马宾灵的A链多形成转角和无规则卷曲结构,A链的N端27～30区段形成较柔软的蛋白质骨架结构,A链的N端4～6、7～9、10～11、12～14、20～22、23～26和30～33区段为抗原位点的可能性较大;马宾灵的B链多形成β折叠和转角结构,B链的N端0～7、9～13、28～29、33～34、40～45、53～54和55～57区段为抗原位点的可能性较大。本研究以生物信息学手段分析预测马宾灵的二级结构及其B细胞抗原表位,为设计马宾灵多克隆抗体以检测马宾灵在不同生物反应器中的表达研究提供参考数据。     

小麦eIF3c基因片段的克隆及序列分析

根据真核翻译起始因子eIF3c的保守序列,搜索小麦EST,由拼接的序列设计引物,从普通小麦‘川麦107'幼苗总RNA中克隆出1102bp的小麦eIF3c1基因片段命名为WeIF3c1.序列分析表明,该片段推断的氨基酸序列与两个拟南芥、水稻、甜樱桃、人类、线虫、老鼠等物种的真核翻译起始因子eIF3c相比较同源性分别为69、61%、85%、72%、38%、36%和38%.     

一株耐热脂肪酶产生菌的鉴定及其脂肪酶基因的克隆

目的:从北方堆肥土样中分离、筛选获得产耐热脂肪酶的嗜热菌株 FS32b,确定该菌株的分类学地位及其所产耐热脂肪酶基因.方法:通过研究该菌株 16S rDNA 基因序列的系统进化树,进行菌种分类鉴定并利用PCR技术获得其脂肪酶基因.结果:FS32b 与报道过的 Bacillus subtilis X60646 有紧密的亲缘关系,二者的 16S rDNA 序列相似性为 99%,其脂肪酶基因经序列测定分析表明,该菌株含长度为 639bp 的耐热脂肪酶基因的完整开放阅读框架(ORF).此片断编码有 213 个氨基酸的酶.结论:FS32b初步鉴定为Bacllus subtilis,其脂肪酶基因的克隆为以后高效基因工程菌的构建奠定了基础.     

传染性支气管炎病毒抗原模拟表位在大肠杆菌鞭毛上的展示

目的：进一步验证通过噬菌体肽库筛选得到的2个传染性支气管炎病毒（IBV）抗原模拟表位在脱离噬菌体后仍具有与IBV抗体结合的生物学活性。方法：应用基因工程技术合成2个IBV抗原模拟表位（KSPKHSSSALHF和SIIQMNLHRPTS）的编码碱基序列,将其分别插入质粒pFliTrx,构建重组展示载体p1和p2,并分别转化大肠杆菌G1826,形成展示IBV模拟抗原表位肽的重组菌F1和F2,进行体外抗原抗体反应。结果：体外抗原抗体反应试验表明,重组菌F1与172可以与IBV阳性鸡血清特异性结合。结论：提示得到的2个抗原模拟表位在脱离噬菌体后,仍具有与IBV抗体结合的生物学活性,在研制IBV新型疫苗和诊断试剂方面具有潜在的应用价值。     

衣原体感染不孕不育患者血清中自身抗体的检测

目的:探讨衣原体感染与血清中抗精子抗体(AsAb)、抗心磷脂抗体(ACA)、抗子宫内膜抗体(EMAb)之间的关系.方法:用ELISA法检测120例衣原体感染不育男性(男性衣原体感染组)和55例正常生育男性(男性正常时照组)的血清中AsAb、ACA;检测142例衣原体感染不孕女性(女性衣原体感染组)和60例正常生育女性(女性正常对照组)的血清中AsAb、ACA、EMAb.结果:男、女衣原体感染组AsAb、ACA检出率高于相应对照组,具有显著性差异(P值均＜0.05);女性衣原体感染组EMAb检出率高于女性对照组,具有显著性差异(P＜0.05).结论:生殖道衣原体感染和与不孕不育有着密切的相关性,且AsAb、ACA、EmAb的产生与衣原体感染有关.     

急性胰腺炎大鼠腺泡细胞凋亡及X连锁凋亡抑制蛋白XIP的表达

目的:研究急性胰腺炎(AP)大鼠腺泡细胞凋亡,X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达及其与疾病严重程度的关系。方法:通过胰胆管逆行注射不同浓度的牛黄胆酸钠,制备急性水肿型胰腺炎(AEP)和急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠模型,同时设假手术(SO)组为对照。收集各模型组3,6和12h标本,对胰腺组织进行病理学评分,并测定血清淀粉酶和腹水量;用TUNEL染色检测胰腺腺泡细胞的凋亡,分别RT-PCR和Western Blotting法测定大鼠胰腺组织XIAP mRNA及蛋白的表达。结果:成功建立了大鼠AP模型。同SO组相比,ANP和AEP组胰腺组织在各时间点均有不同程度的病理损害,血清淀粉酶也显著增高(P均<0.01)。且ANP组显著高于AEP组(P均<0.01)。造模成功3h后,各组大鼠胰腺腺泡细胞均出现少量凋亡,但ANP和AEP组凋亡显著多于SO组(P<0.05),ANP和AEP组间没有差别(P>0.05)。同SO组相比,ANP和AEP组在6h和12h时凋亡均增多(P<0.01),且AEP组显著高于ANP组(P<0.01)。造模成功3h后,各模型组XIAP mRNA表达没有差异(P>0.05);6h和12h时AEP组XIAP mRNA表达明显下降,而ANP组明显升高,两组间差异有显著性(P<0.01)。XIAP蛋白表达水平与mRNA表达水平相一致。结论:急性胰腺炎大鼠胰腺组织XIAP表达与腺泡细胞凋亡情况相反,且与疾病严重程度平行。XIAP可能负性调控AP大鼠胰腺腺泡细胞的凋亡。     

汉滩病毒S基因的分段表达及其线性和构象型抗原表位分析

构建汉滩病毒76—118N蛋白及其分别从N-端和C-端缺失的共6个突变体,在大肠杆菌BL-21中进行表达,并对其中一些蛋白进行了纯化。通过Western blot、酶联免疫吸附试验(ELISA)进行汉滩病毒N蛋白的抗原表位分析,N蛋白及6个缺失突变体都与组特异性抗体L13F3呈阳性反应,而缺失突变体与型特异性抗体AH30呈阴性反应。构建汉滩病毒76—118N蛋白及其6个缺失突变体的真核表达载体,并在COS-7细胞中进行表达。通过间接免疫荧光试验(IFA)进行汉滩病毒N蛋白的抗原表位分析,病人血清与真核表达的N蛋白及6个缺失突变体呈阳性反应。而仅有N蛋白及缺失N端1～30位氨基酸序列的NPN30与型特异性抗体AH30呈阳性反应。证实组特异性抗体L13F3结合的抗原表位位于N端1～30位氨基酸;而C端抗原表位对于型特异性抗体AH30与N蛋白的识别和结合具有重要意义,缺失N端100位氨基酸序列可能破坏羧基端构象型表位,也可以影响N蛋白与AH30的结合。