脆弱类杆菌基因探针初步应用的研究

使用地高辛标记的探针对３６株厌氧菌和需氧菌检测,用细菌直接点样滤膜与深针杂交结果,对脆弱类杆菌呈阳性反应,对其它厌氧菌和需氧菌呈阴性反应,其敏感性为８９％,其特异性为９１．７％,对脆弱类杆菌的检测灵敏度为１０ＰｇＤＮＡ和１０＾４ＣＦＵ细菌。     

干扰素基因表达调控研究进展

干扰素基因表达调控研究进展孙劲综述方企圣审（中国预防医学科学院病毒研究所,北京１０００５２）近年来,有关于扰素（ＩＦＮ）分子生物学的研究以及基因工程方法生产干扰素取得很大进展。本文将有关ＩＦＮ蛋白的诱导和基因调控机理方面最新进展作一综述。ＩＦＮ蛋白的...     

毛喉萜对人胃癌细胞BGC－823中蛋白激酶C及其亚类的影响

以人胃癌细胞ＢＧＣ－８２３为模型,研究了毛喉萜（ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ）对胃癌细胞中蛋白激酶Ｃ活性及其亚类基因表达的作用,同时也观察了毛喉萜对癌基因ｃ－ｊｕｎ及抑癌基因ｐ５３表达的影响．结果表明,２×１０~（－５）ｍｏｌ／Ｌ毛喉萜处理ＢＧＣ－８２３细胞７２ｈ,细胞质、膜和细胞核ＰＫＣ活性下降,ＰＫＣ亚类β,γ基因表达被抑制,癌基因ｃ－ｊｕｎ的表达也明显降低,而抑癌基因ｐ５３表达升高,上述变化可能是毛喉萜抑制胃癌细胞增殖等生理效应的重要分子事件。     

HCV C基因在E.coli中的高效表达

本文在基因克隆和序列分析基础上,设计并构建了五种不同的HCV C基因表达工程菌株,研究了影响HCVC基因在E.coli中高效表达的因素。结果表明疏水区编码序列的存在与否对基因表达水平影响较大;翻译通读现象可直接影响目的表达产物的累积水平;不同宿主细胞对外源基因表达水平的影响也同样具有重要意义。通过试验研究,获得了高表达工程菌株,其表达水平达38.5％,为制备高质量重组HCV C抗原并研究其在疾病防治中的作用奠定了基础。     

病原细菌致病性基因表达的环境调控

病原细菌致病性基因表达的环境调控胡稳奇（湖南省生物研究所长沙４４０００６）细菌是动物、植物乃至人类的重要致病微生物,可以引起人类的许多烈性和急性传染病,如鼠疫、霍乱、伤寒和传染性痢疾等。病理学家很久以前就注意到,病原细菌引起致病,是病原、行主及环境条...     

以融合蛋白形式在大肠杆菌中表达人MCP－1

将编码人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体ｐＥＸ３１Ａ中,在大肠杆菌中表达出ＭＳ２／ＭＣＰ－１融合蛋０白,该表达产物约占菌体总蛋白的１５％左右,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表明,表达产物可与ＭＣＰ－１抗体特异反应。采用琼脂糖平板法进行活性测定表明,表达产物具有明显的单核细胞趋化活性,说明Ｎ端融合一段细菌蛋白对ＭＣＰ－１有无趋化活性可能没有影响。     

昆虫杆状病毒晚期启动子在大肠杆菌中启动CAT基因表达

将油桐尺蠖（Ｂｕｚｕｒａｓｕｐｐｒｅｓｓａｒｉａ）核多角体病毒晚期基因──多角体蛋白基因启动子及５′端编码区,以两种不同方式置于缺乏启动子的氯霉素乙酰基转移酶（ＣＡＴ）基因上游,使其分别终止在不同翻译终止位点,其宿主菌具有明显不同的氯霉素抗性,最高达２００ｍｇ／Ｌ　ＬＢ培养基以上,表明昆虫病毒启动子能启动原核基因表达。对多角体蛋白基因启动子能在大肠杆菌中有效工作的原因进行了讨论。     

玉米叶绿体atpB及atpE基因在大肠杆菌中的表达

本实验构建了在大肠杆菌中能表达玉米叶绿体ＣＦ１完整β亚基、缺失Ｎ端２３个氨基酸残基的β亚基以及完整ε亚基的表达质粒。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ实验表明,在分别含这些表达质粒的细菌中β、ε亚基蛋白的合成量在诱导３ｈ后即达到饱和,其含量各占细菌体总蛋白的１０％左右。这些表达产物在细菌体中形成不溶性的包含体。可通过对菌体蛋白的分级分高,将表达产物溶于５ｍｏｌ／Ｌ的尿素溶液中。     

精子介导鱼类基因转移和聚合酶链反应检测技术

金鱼精子与美洲大绵ｗｅｉ的抗冻蛋白基因一起保温３０分钟后,再与卵子受精,共获得１４５尾成鱼和若干胚胎。从胚胎和成鱼中提取ＤＮＡ经聚合酶链反应（ＰＣＲ法）扩增和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分子杂交表明,外源的抗冻蛋白基因进入了部分受体鱼的染色体组内。测定了４５尾一年龄实验鱼中,有１２尾显示出明确的杂交带,阳性率为２６％。     

应用亲和层析法提纯 鸡马立克氏病病毒pp38基因重组产物

利用鸡马立克氏病病毒(MDV)1型特异单克隆抗体H19致敏Sepharose 4B—cNBr,从感染重组病毒BP38Ⅱ的昆虫细胞中提纯鸡马立克氏病毒pp38基因重组产物,获得良好效果。提纯的蛋白质在SDS—PAGE中表现出一条分子量约为38kDa的蛋白质条带,在免疫印迹试验中该蛋白质条带也能被单克隆抗体H19识别。利用该提纯的重组pp38免疫小鼠,所制备的小鼠抗血清在免疫荧光染色试验中不仅能与感染重组病毒的昆虫细胞Sf9反应,也能和Ⅰ型MDV型感染的鸡胚成纤维细胞反应。