shASPP2 H22稳转肝癌细胞系的构建及ASPP2敲低对H22移植瘤小鼠血管生成的影响

摘要 目的：构建小鼠shASPP2 H22稳转肝癌细胞系,观察ASPP2敲低对血管生成的影响。方法：针对小鼠ASPP2基因设计了3个不同的shRNA干扰序列（Y18421,Y18422,Y18423）及1个对照序列（GL427NC2）,采用双酶切（Age Ⅰ和EcoR Ⅰ）及质粒连接构建重组质粒,使用菌落PCR和测序比对进行鉴定;使用293T细胞将各重组质粒包装慢病毒并测定滴度;将 shASPP2和对照慢病毒质粒转染H22细胞,采用流式细胞术测定转染效率;采用qRT-PCR、Western Blot法观察shASPP2慢病毒对H22细胞ASPP2的干扰效果;采用CCK8法观察ASPP2敲低对H22细胞增殖的影响;采用Western Blot法观察ASPP2敲低对H22细胞及上清VEGF表达和分泌的影响;采用细胞注射法建立小鼠ASPP2敲低H22细胞皮下移植瘤模型,游标卡尺法观察肿瘤体积大小,采用活体激光共聚焦观察肿瘤血管生成情况,采用Western Blot法观察肿瘤组织VEGF的表达。结果：双酶切、菌落PCR和测序鉴定结果表示各重组质粒构建成功;各重组质粒经慢病毒包装后,测定显示Y18421、Y18422、Y18423和GL427NC2慢病毒质粒的滴度分别为3.40×10⁸ TU/mL、4.08×10⁸ TU/mL、5.49×10⁸ TU/mL和1.7×10⁹ TU/mL;Y18421、Y18422、Y18423及GL427NC2慢病毒质粒转染效率分别为：86.2 %、69.6 %、60.8 %和76.9 %。与GL427NC2 H22细胞相比,Y18421 H22细胞的ASPP2 mRNA及蛋白的表达明显降低（P<0.01,P<0.05）;Y18421细胞在培养24,48,72 h后增殖速率显著增加（P<0.0001,P<0.001,P<0.01）;Y18421细胞及上清的VEGF表达显著升高（P<0.001,P<0.01,P<0.05）。与GL427NC2 细胞移植瘤相比,Y18421细胞移植瘤体积明显增大（P<0.05）,总血管长度显著增加（P<0.05）,VEGF蛋白的表达明显上调（P<0.05）。结论：小鼠shASPP2 H22稳转肝癌细胞系构建成功,ASPP2敲低可能通过上调VEGF的表达促进小鼠H22细胞移植瘤血管生成。     

血管生成素样蛋白4和Ⅱ型肺泡细胞表面抗原-6与急性呼吸窘迫综合征严重程度的关系及对预后的评估效能研究

摘要 目的：分析血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)和Ⅱ型肺泡细胞表面抗原-6(KL-6)与急性呼吸窘迫综合征严重程度的关系及对预后的评估效能。方法：选择我院自2020年1月至2022年12月收治的120例急性呼吸窘迫综合征患者作为研究对象（观察组）,根据氧合指数（PaO₂/FiO₂）分为轻度组、中度组和重度组;另选120例非急性呼吸窘迫综合征患者作为对照组。检测所有患者血清ANGPTL4和KL-6的表达水平,分析血清ANGPTL4和KL-6与APACHE Ⅱ评分、PaO₂/FiO₂的关系,使用受试者工作特征曲线（ROC）下面积（AUC）评价血清ANGPTL4联合KL-6对急性呼吸窘迫综合征预后的评估效能。结果：对比对照组,观察组血清ANGPTL4、KL-6的表达水平均明显升高（P＜0.05）;血清ANGPTL4、KL-6的表达水平在轻度组、中度组和重度组中差异有统计学意义,且急性呼吸窘迫综合征越严重,升高越明显（P＜0.05）;经Pearson相关性分析,急性呼吸窘迫综合征患者血清ANGPTL4、KL-6的表达水平与PaO₂/FiO₂呈负相关,与APACHE Ⅱ评分呈正相关（P＜0.05）;经ROC曲线分析,血清ANGPTL4联合KL-6预测急性呼吸窘迫综合征患者入院28d内死亡的敏感度为90.14%、特异度为65.74%,AUC为0.900。结论：血清ANGPTL4、KL-6表达水平升高与急性呼吸窘迫综合征严重程度增大密切相关,两者联合在患者预后评估中具有一定价值,可作为判断病情及预后的辅助指标。     

血清LPA、AngII及β2-MG在老年2型糖尿病患者病情监控中的作用及其与胰岛素抵抗的相关性分析

摘要 目的：分析血清溶血磷脂酸（LPA）、血管紧张素II（AngII）及β2-微球蛋白（β2-MG）在老年2型糖尿病患者病情监控中的作用及其与胰岛素抵抗的相关性。方法：选择我院自2020年1月至2023年6月收治的106例老年2型糖尿病患者作为观察组,其中34例患者并发肾病（糖尿病肾病组）,72例患者不并发肾病（单纯糖尿病组）;另选106例健康体检者作为对照组。检测所有入选者血清LPA、AngII及β2-MG表达水平,使用多因素Logistic 回归分析血清LPA、AngII及β2-MG与老年2型糖尿病患者并发肾病的关系,Pearson相关性分析血清LPA、AngII及β2-MG表达水平与空腹血糖（FPG）、餐后2 h血糖（2hPG）、空腹胰岛素（FINS）、糖化血红蛋白（HbA1c）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、胰岛β细胞功能指数（HOMA-β）的关系。结果：观察组血清LPA、AngII、β2-MG表达水平均高于对照组（P＜0.05）;糖尿病肾病组血清LPA、AngII、β2-MG表达水平均明显高于单纯糖尿病组（P＜0.05）;经多因素Logistic 回归分析,血清LPA、AngII及β2-MG均是老年2型糖尿病患者并发肾病的独立预测因素（P＜0.05）;观察组FPG、2hPG、FINS、HbA1c表达水平均高于对照组,HOMA-IR大于对照组,HOMA-β小于对照组（P＜0.05）;经Pearson相关性分析,老年2型糖尿病患者血清LPA、AngII及β2-MG均与FPG、2hPG、FINS、HbA1c、HOMA-IR呈正相关（P＜0.05）,与HOMA-β呈负相关（P＜0.05）。结论：血清LPA、AngII及?茁2-MG表达水平升高对老年2型糖尿病患者的病情监控具有一定作用,且均与胰岛素抵抗程度密切相关,值得进一步研究应用。     

肌萎缩侧索硬化患者血清SOD、GSH-Px、MIP-1α、VEGF水平与肌电图特征及病程的关系研究

摘要 目的：研究肌萎缩侧索硬化（ALS）患者血清超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、巨噬细胞炎性蛋白-1α（MIP-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）水平与肌电图特征及病程的关系。方法：将从2018年12月起直至2020年12月,我院收治的ALS患者86例纳入研究,记作病变组。另取同期90例于我院进行体检的健康人员作为对照组。检测并比较两组血清SOD、GSH-Px、MIP-1α、VEGF水平及肌电图特征。将所有病变组患者根据病程的差异分为病程较长组42例以及病程较短组44例,比较两组血清SOD、GSH-Px、MIP-1α、VEGF水平以及肌萎缩侧索硬化症功能评分量表（ALSFRS-r）评分。采用Pearson相关性分析ALS患者血清SOD、GSH-Px、MIP-1α、VEGF水平与肌电图特征及病程的关系。结果：病变组血清SOD、GSH-Px水平均低于对照组,而MIP-1α、VEGF水平均高于对照组（均P＜0.05）。病变组各项肌电图参数水平均低于对照组（均P＜0.05）。病程较长组血清SOD、GSH-Px水平以及ALSFRS-r评分均低于病程较短组,而MIP-1α、VEGF水平均高于病程较短组（均P＜0.05）。经Pearson相关性分析可得：ALS患者血清SOD、GSH-Px水平与肌电图各神经符合肌肉动作电位（CMAP）、ALSFRS-r评分均呈正相关,与病程呈负相关（均P＜0.05）;MIP-1α、VEGF水平则与肌电图各神经CMAP、ALSFRS-r评分均呈负相关,与病程呈正相关（均P＜0.05）。结论：ALS患者血清SOD、GSH-Px水平较低,MIP-1α、VEGF水平较高,且和肌电图特征以及病程密切相关,值得临床关注。     

No relation between ACEml/D polymorphism and high altitude pulmonary edema in the Han Chinese

Objectives To explore whether the angiotensin T -converting enzyme （ACE） I/D （insertion/ deletion） polymorphism is associated with the susceptibility to high altitude pulmonary edema （HAPE） in the Han Chinese. Methods One hundred and forty-seven HAPE-p （HAPE patients） and 193 HAPE-r （HAPE resistants） were enrolled from the Yushu earthquake reconstruction workers in Qinghai province where the altitude is over 3 500 m above sea level. Blood samples were collected from each of the HAPE-p and HAPE-r groups. Information about physiological phenotypes was obtained via fieldwork investigation. The ACE-I/D polymorphism in HAPE-p and HAPE-r was detected by polymerase chain reaction （PCR）. Results The SaO2 was significantly lower while HR was significantly higher in HAPE-p group than those in HAPE-r group. The genotype frequencies of ACE-I/D for II, ID, DD in HAPE-r and HAPE-p groups were 0.430, 0.446, 0.124 and 0.435, 0.469, 0.095, respectively, the allelic frequencies of I and D were 0.650, 0.350 and 0.670, 0.330, respectively. The OR of ID, DD and D alleles relative to II for HAPE was 0.961 （0.610-1.514）, 1.322 （0.634-2.758） and 1.080 （0.783-1.489）. There was no significant difference of the genotypic and the allelic frequencies in ACE-I/D polymorphism between HAPE-p and HAPE-r groups. Conclusions There is no relation between ACE-I/D polymorphism and HAPE in the Han Chinese.     

转移性结直肠癌抗血管生成靶向治疗的研究进展

近年来,由于各种新的化疗药物及分子靶向药物的使用,转移性结直肠癌(metastatic colorectal cancer,m CRC)的个体化治疗逐步取得了重要的成果。研究表明,抗血管生成靶向药物与化疗药物的联合使用作为转移性结直肠癌的一线治疗方案,可明显改善治疗效果,延长患者的生存时间。血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)是肿瘤血管生成过程中最主要的因子。贝伐单抗是通过基因工程技术得到的针对血管内皮生长因子-A(VEGF-A)的单克隆抗体,作为抗血管生成靶向药物用于转移性结直肠癌的临床治疗。本文对近年来转移性结直肠癌的抗血管生成靶向治疗,尤其是贝伐单抗治疗的相关研究进展进行综述并展望未来抗血管生成靶向治疗的发展前景。     

凉血活血汤联合阿维A胶囊治疗银屑病的临床疗效及其机制研究

目的:探讨凉血活血汤联合阿维A胶囊治疗银屑病的临床疗效及其可能作用机制。方法:选择2012年7月~2015年11月于我院就诊的银屑病患者60例,按照就诊先后顺序分为实验组与对照组,每组各30例,实验组患者使用凉血活血汤联合阿维A胶囊进行治疗,对照组患者仅给予阿维A胶囊进行治疗。比较治疗前后两组患者血清白细胞介素17(IL-17)、白细胞介素22(IL-22)、白细胞介素23(IL-23)及血管内皮因子(VEGF)水平,同时比较两组患者的不良反应发生率及临床总有效率。结果:与治疗前相比,两组患者血清IL-17、IL-22、IL-23及VEGF水平均降低;治疗结束后与对照组相比,实验组患者血清IL-17、IL-22、IL-23及VEGF水平较低(P0.05);且与对照组相比,实验组患者的不良反应发生率较低(P0.05);临床总有效率较高(P0.05)。结论:凉血活血汤联合阿维A胶囊能明显提高银屑病患者的临床疗效,且安全性较高,可能与其降低血清IL-17、IL-22、IL-23及VEGF水平有关。     

瑞舒伐他汀对高胆固醇血症患者的降脂疗效及对血管内皮舒张功能 的影响

目的:探讨瑞舒伐他汀对高胆固醇血症患者的降脂疗效及对血管内皮舒张功能(FMD)的影响。方法:选择我院92例高胆固醇血症患者作为实验组并给予瑞舒伐他汀治疗,另选择同期来我院参加健康体检的健康志愿者42例作为对照组,检测治疗前(T0),以及治疗1个月(T1)、2个月后(T2)的血脂水平及肱动脉FMD和非依赖性血管内皮舒张功能(NMD),并对其治疗的不良反应情况进行统计分析。结果:治疗前,实验组患者血浆中TC、TG和LDL-C水平明显高于对照组,而HDL-C水平显著低于对照组,且差异均具有统计学意义(P0.05)。相对于T0,实验组患者T1和T2血浆中TC、TG和LDL-C水平明显下降,而HDL-C水平显著升高,且差异均具有统计学意义(P0.05)。患者T2时血浆中TC和LDL-C水平明显低于T1的水平(P0.05),而TG和HDL-C水平与T1之间的差异无统计学意义(P0.05);治疗前,实验组患者的FMD值明显低于对照组的健康志愿者(P0.05)。经过瑞舒伐他汀干预2个月后,实验组患者T2时FMD值明显高于T0(P0.05),而T2的NMD与T0之间的差异无统计学意义(P0.05);治疗期间并未出现严重的不良反应。结论:瑞舒伐他汀对老年高胆固醇血症患者降脂效果显著,且有改善FMD的作用。     

丹皮酚通过酸性鞘磷脂酶/ 神经酰胺通路改善血管紧张素II 所致动脉内 皮功能障碍

目的:探讨丹皮酚(Paeonol,Pae)对血管紧张素II(AngiotensinⅡ,AngⅡ)所致动脉内皮功能障碍的保护作用及其机制。方法:采用实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)和Westernblot检测酸性鞘磷脂酶(acidsphingomyelinase,ASM)基因及蛋白表达;采用免疫组织荧光检测血管环神经酰胺(ceramide,Cer)含量变化;采用血管环张力描记技术检测主动脉血管环的舒张功能;采用二氢乙啶荧光探针(dihydroethidium,DHE)检测血管环超氧阴离子(superoxideanion,O2-·)水平。结果:与对照组相比,AngⅡ孵育后主动脉对乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)的舒张反应显著降低,Pae与AngⅡ共孵育则无明显改变;AngⅡ及Pae孵育后,动脉对硝普钠(sodiumnitroprusside,SNP)的舒张反应均无明显变化;AngⅡ孵育可增高动脉环O2-·水平,这一反应被Pae明显抑制;与对照组相比,AngⅡ孵育动脉ASMmRNA水平无明显改变,但蛋白表达显著增加,Cer含量显著增多,Pae与AngⅡ共孵育动脉ASM蛋白及Cer水平与对照组相比均无明显改变;采用神经酰胺酶抑制剂N-oleoylethanolamine(OEA)增加动脉Cer含量后,Pae降低动脉O2-·水平以及增强Ach舒张反应的效应被显著抑制。结论:Pae通过ASM/Cer通路改善AngⅡ所致动脉氧化应激增强和内皮功能障碍。     

TBHQ激活自噬保护血管内皮细胞脂毒性作用的研究

目的:改善脂毒性引起的血管内皮细胞损伤在心血管疾病防治中发挥重要作用。本研究旨在探讨叔丁基对苯二酚(tert-butylhydroquinone,TBHQ)对脂毒性引起的血管内皮细胞损伤的保护作用。方法:以人脐静脉血管内皮细胞系EA.hy926为研究对象,给予不同浓度的饱和游离脂肪酸及TBHQ进行干预,检测细胞的凋亡情况。采用westernblotting及信号通路阻断技术对TBHQ的作用机制进行研究。结果:给与血管内皮细胞饱和游离脂肪酸进行干预可显著增加细胞死亡(P0.05)。TBHQ显著抑制饱和游离脂肪酸诱导的细胞死亡(P0.05)。激活自噬可显著抑制饱和游离脂肪酸引发的血管内皮细胞脂毒性(P0.05)。此外,TBHQ可显著激活血管内皮细胞的自噬(P0.05),采用自噬抑制剂可阻断TBHQ对脂毒性的保护作用(P0.05)。结论:TBHQ通过激活自噬有效地抑制饱和游离脂肪酸诱导的血管内皮细胞损伤,对于改善或防治高脂血症引起的血管损伤可能具有重要的现实意义。