利用mRNA差异显示技术分离甜菜M14品系特异表达基因的cDNA片段

二倍体栽培甜菜与白花甜菜杂交、进一步回交而获得的单体附加系M₁₄,其染色体组成中除了含有18条栽培甜菜染色体外,还附加有一条野生白花甜菜第9号染色体,该附加染色体通过母本的传递率为96.5%;单体附加系传递率如此高的原因是因为M₁₄中有无融合生殖基因的存在。本实验采用mRNA差异展示技术对甜菜无融合生殖品系M₁₄和正常有性生殖的二倍体栽培甜菜A_2Y花蕾减数分裂时期的基因表达进行了差异分析。采用GT₁₅A,GT₁₅G,GT₁₅C 3种锚定引物,共筛选了20个随机引物,通过RT-PCR检测,获得了6个阳性差异表达的cDNA片段,应用NCBI的BLASTx软件对测序结果进行同源序列、相似序列检索,为进一步克隆无融合生殖基因提供侯选cDNA片段。     

融和蛋白GST-SUMO-MT在大肠杆菌中的表达、纯化及其活性研究

将编码融合蛋白GST-SUMO-MT的DNA片段连接到大肠杆菌表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-GS-MT并转化到大肠杆菌Origami（DE3）中。20℃,1mM的IPTG诱导20h后,获得分子量约为43Kd的融合蛋白,表达量占菌体上清总蛋白的38.4％。利用谷胱甘肽交联琼脂糖（Glutathione Sepharose 4B）凝胶柱和Sephardex G-25分子筛联用可以得到纯度为95%以上的融合蛋白,得率约为70mg/L。该融合蛋白可与GST抗体产生阳性反应。融合蛋白GST-SUMO-MT可以显著提高宿主对Cd2+、Zn2+和Cu2+离子聚积的能力,其耐受能力比对照组分别提高4.2倍、4倍及1.6倍。此外,原子吸收光谱法测定,每分子GST-SUMO-MT可以结合2-3个Cd2+离子。     

牛分枝杆菌单基因及双价融合基因DNA疫苗免疫效果的研究

利用PCR技术和SOE技术扩增牛分枝杆菌ag85b、esat-6、hsp65、mpb64基因和ag85b-esat-6、hsp65-esat-6和mpb64-esat-6融合基因,连接真核表达载体pCDNA3.1(+),构建重组质粒pCA、pCE6、pCH、pCM、pCAE、pCHE和pCME。转染SP2/0细胞,检测目的基因的表达。以各重组质粒和pCDNA3.1(+)及PBS免疫BALB/c小鼠后检测血清特异性抗体水平、脾淋巴细胞增殖情况和IFN~γ分泌情况。结果表明,七种重组质粒免疫后小鼠血清抗体水平持续上升,与 pCDNA3.1(+)对照组和PBS对照组相比差异显著 （P<0.05）,其中pCA组血清抗体水平明显高于其他六种DNA疫苗免疫组 （P<0.05）;三免两周后,融合基因免疫组的刺激值（SI值）与单基因免疫组相比差异显著（P<0.05）,其中以pCME组的SI值最高;PPD刺激后融合基因DNA疫苗免疫组小鼠脾细胞分泌的IFN~γ高于单基因DNA疫苗组（P<0.05）,而两对照组则未检测到IFN~γ的产生。本试验成功构建了牛分枝杆菌ag85b、esat-6、hsp65、mpb64单基因和ag85b-esat-6、hsp65-esat-6、mpb64-esat-6双价融合基因DNA疫苗,从而为牛结核病新型疫苗的研制奠定了基础。     

科教融合栏目征稿启事

科教融合是当前我国高等教育发展的趋势,较多的高校和研究机构已经在科教融合的模式和教学实践方面进行了探索。提倡高水平科学家参与教学活动,教学方法和教学内容的创新,是科教融合推进中的重要内容之一。为此,我刊开辟了"科教融合"栏目,该栏目将主要刊登以下各类论文:生命科学教学中新课程的开设与探索;包含生命科学新思想或前沿知识的优秀教学案例;生命科学教学方法的探索希望通过科教融合栏目的开辟和建设,积极探索高水平科学家参与教学活动的途径和方法,为从事生命科学教学工作的教师提供交流的园地。     

甲型肝炎病毒H2快速复制株在人二倍体细胞中的增殖研究

研究甲型肝炎病毒H₂快速复制株在人二倍体细胞中的生长特性,并缩短甲肝病毒的培养周期。将甲型肝炎病毒H₂株感染人二倍体细胞（KMB17细胞株）,采用高病毒感染复数（MOI）将病毒培养时间从26d缩短至10d后收获病毒,并通过连续传代进行适应研究,建立H₂株快速复制毒种库,在不同培养时间检测病毒抗原、感染性滴度,绘制病毒生长曲线,进行传代稳定性验证和病毒形态学的观察。甲肝H₂株快速复制病毒株在KMB17细胞上培养10d后收获,连续传代从第5代至第9代,抗原含量均在512～2 048之间,感染性滴度均在8.33 lgCCID₅₀/mL±0.125lgCCID₅₀/mL,H₂株快速繁殖至5代病毒和9代病毒在电镜下观察到多为成熟的实心颗粒。在5批次的重复试验中,病毒培养至10d、16d、22d时,收获的病毒感染性滴度无显著差异（P>0.005）。筛选后的甲型肝炎病毒H₂株的快速复制株缩短了甲肝病毒的培养时间,且保持较...     

高效合成葡萄糖二酸酿酒酵母工程菌的构建

葡萄糖二酸是天然存在的一种重要二元酸,其在医疗保健和化工工业等领域具有很高的实际应用价值,因此被称为"最具价值的生物炼制产品之一".以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)为底盘微生物,文中考察了过量表达肌醇转运蛋白Itr1、融合表达肌醇加氧酶和葡萄糖醛酸脱氢酶以及弱化表达葡萄糖6-磷酸脱氢酶基因...     

LB克隆系统的构建及在鞘氨醇单胞菌基因融合表达中的应用

为摆脱限制性酶切位点不足的限制,构建可灵活改变多基因融合方向的表达载体,基于ⅡS型和ⅡT型限制性内切酶LguⅠ和BbvC Ⅰ设计开发了 LB克隆系统.该克隆系统是以广宿主质粒pBBR1MCS-3为初始载体,利用 PCR的方法,在其多克隆位点区插入LB片段(GCTCTTCCTCAGC)构建得到的.LB片段含Lgu Ⅰ和B...     

专创融合课程体系建设探索与实践——以植物保护专业为例

科技创新人才是创新型国家建设和增强国家竞争力的决定性因素,而培养建设创新型科技人才队伍正是人才优先发展战略布局的关键.当前新形势下需要大量创新创业型人才推动我国经济转型升级,作为创新型人才培养的重要阵地,高校要顺应时代,与时俱进,以实现教学专创融合为目标,不断推进教学改革.本文重点分析了我国植物保护专业“专创融合”体系建设背景及建设现状,具体阐述了植物保护专业“专创融合”课程体系的课程设计框架,分析了高校植物保护专业实现“专创融合”取得的成效,揭示了当前高校植物保护专业在实施“专创融合”教育过程中存在的问题,深刻剖析了问题成因,提出了加强政府协调引导、加强产学研合作等多项对策与建议.这些举措有助于进一步推动我国高校植物保护专业的发展,提升人才培养质量,为我国经济转型升级提供有力支撑.     

日本血吸虫中国大陆株28kDa GST基因在大肠杆菌中的表达

在大肠杆菌ＴＢ１中表达含日本血吸虫中国大陆株２８ｋＤａ抗原基因的重组质粒，表达产物是融合蛋白，分子量来３３ｋＤａ。采用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析柱纯化表达产物。２，４－二硝基氯苯／谷胱甘肽分光光度测定法和琼脂糖－淀粉凝胶电泳显示重组抗原具有较高的谷胱甘肽Ｓ－转移酶活力。     

野牛草幼穗愈伤组织的诱导及植株再生

以野牛草[Buchloe dactyloides(Nutt．)Engelm．]幼穗为外植体,建立了愈伤组织诱导、继代培养和植株再生体系。结果表明,雌穗比雄穗难以脱分化形成愈伤组织;小于8mm雄幼穗在2mg／L2,4-D培养基上的愈伤组织诱导率为80．0％～86．8％;添加10mg／L AgNO3对愈伤组织诱导率影响不明显,但可改善愈伤组织质量。2mg／L 2,4-D结合0．1mg／L 6-BA的培养基有利于愈伤组织的继代培养;继代超过3次、继代间隔超过3周,愈伤组织分化能力明显下降。雄穗愈伤组织在含1．0mg／L 6-BA培养基上,弱光条件下分化出芽的频率较高,达31．8％～35．0％;附加3％麦芽糖既可减轻褐化程度,又利于丛生芽的分化。分化苗在1/2MS 0．3mg／L IBA培养基上的生根率为62．5％。