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191.
为研究水稻蜡质基因(waxy)5'上游调控区中存在的顺式作用元件,我们将水稻waxy基因翻译起始声、(ATG)5'上游3.4kb(-2118~+1291bP)片段经外切核酸酶ExoⅢ部分酶解,得到一系列5'端缺失的片段。将这些缺失片段分别与gus基因编码区连接,构建成融合质粒,经PEG介导引入水稻原生质体,26℃培养48h后,定量测定GUS酶活力,并以同时导入的由35S启动子指导的荧光素酶(LUC)基因表达的酶活力作为内对照。结果表明,GUS酶活性随5’上游调控区长度的减少而逐渐减弱。由─861bp缺失至─640bP时,gus基因表达水平有较明显的降低,推测在该区域中可能存在一个顺式作用元件区。 相似文献
192.
对酵母NMT基因在大肠杆菌中表达进行较详细的研究,进而构建了复制子为p15A并含卡那霉素抗性基因的相容性表达质粒pKZMT,将其与表达质粒pCZmCα1共转化进大肠杆菌BL21(DE3)F′,进行双质粒表达偶联加工修饰研究,其中pCZmCα1表达底物蛋白小鼠cAMP依赖的蛋白激酶催化亚基α(PKA-mCα)。SDSPAGE及Westernblot分析表明,双质粒表达系统中,PKA-mCα都得到了稳定的高表达,尤其在23℃低温诱导表达时,表达产物的可溶性部分明显增多;而酵母NMT被控制在有利于活性功能的可溶性低水平表达。[3H]myristicacid标记测定及放射自显影的结果显示,在大肠杆菌中表达的重组PKA-mCα被豆蔻酰化修饰。 相似文献
193.
酿酒酵母与球形红假单胞菌原生质体跨界融合研究 总被引:1,自引:0,他引:1
测定了球形红假单胞菌原核细胞与酿酒酵母真核细胞的原生质体形成、再生及融合最佳组合条件。以溶菌酶EDTA反应系统处理球形红假单胞菌P9479,最适脱壁条件为:溶菌酶浓度0.5mg/ml,EDTA浓度为0.2%,蔗糖浓度20%,酶作用时间为40min;此条件下原生质体形率为78.9%,再生率为11.2%。用蜗牛酶巯基乙醇反应系统处理酿酒酵母Y9407,最适脱壁条件为:蜗牛酶浓度1.0%,巯基乙醇浓度0.1%,蔗糖浓度20%,酶作用时间为30min;此条件下酵母原生质体形成率为99.8%,再生率为9.7%。用聚乙二醇诱导P9479与Y9407的原生质体发生融合,当聚乙二醇的浓度为30%,Ca2+浓度为50mmol/L,pH为6.5,时间为10min时,有最高的融合率为7.6×10-6。 相似文献
194.
酵母属间原生质体融合改进菌株木糖发酵性能 总被引:2,自引:0,他引:2
通过单倍体分离和紫外诱变,获得了14株树干毕赤酵母(Pichiastipitis)7124和酿酒酵母(Sacharomycescerevisiae)1300的营养缺陷型突变株。用聚乙二醇(PEG)和电诱导融合及致死融合等方法,实现了树干毕赤酵母和酿酒酵母的属间原生质体融合。融合子能发酵木糖产生酒精,其厌氧发酵木糖和木糖葡萄糖混合液的能力明显优于亲株,耐酒精的性能也比亲株树干毕赤酵母7124有所提高。融合子经DNA含量、细胞体积测定和稳定性能实验证明为稳定融合子。 相似文献
195.
196.
运用差异展示分离特异性表达的基因 总被引:3,自引:0,他引:3
在高等生物中含有约100000个不同的基因,其中仅有15%的基因在任何个体细胞中均表达.因此分离特异的目的基因便显得十分重要.差异展示是通过部分扩增mRNA的逆转录产物、经测序胶电泳,分离到差异性表达的基因.它与消减杂交相比是分离特异表达基因的更有效的手段.虽然这种方法在实际运用中存在着这样或那样的困难,但随着对这种技术的不断改进,它将会有越来越广泛的用途. 相似文献
197.
噬菌体短肽库的构建及其随机短肽的多样性 总被引:1,自引:0,他引:1
噬菌体短肽库是将随机合成的寡核苷酸序列通过与单链噬菌体外壳蛋白基因融合,从而将随机短短肽表达于噬菌体的表面,将体外随机化学合成的寡聚核苷酸序列重组到单价噬菌体表达载体,构建了噬菌体短肽库,证明其库容为2×10^7集落形成单位,重组率为93%。 相似文献
198.
本文报道了云南8种树桂的染色体组型,并对目前所已知的树蛙种类的染色体组型进行了比较。锯腿小树蛙Philautuscavirostris(Guenther)的2n=26,5对大染色体和8对小染色体,9M+4SM,NF=52,No.7长臂近着丝粒处和No.8短臂端部备有一个次缢痕;白颊小树蛙Phi.palpebralisSmith的2n=26,5对人染色体和8对小染色体,8M+5SM,NF=52,No.6短臂近着丝粒处有一个次缢痕。白颌大树蛙Rha.maximusGuenther的2n=26,5对大染色体和8对小染色体,9M+4SM,NF=52;棕褶树蛙Rha.feaeBoulenger的2n=26,5对大染色体和8对小染色体,9M+4SM,NF=52;黑蹼树蛙Rha.reinwardtii(Boie)的2n=26,5对大染色体和8对小染色体,9M+4SM,NF=52,Mo.1短臂近着丝粒处有一个次缢痕;红蹼树蛙Rha.rhodopusLiuetHu的2n=26,5对大染色体,1对中染色体和7对小染色体,9M+4SM,NF=52;斑腿泛树蛙Polypedatesmegacephalus的2n=26,5对大染色体 相似文献
199.
构建了同时表达麻疹病毒LA株HA和F基因及人白细胞介素2(IL2)的重组痘苗病毒疫苗株RVJMLHAFKIL2。Westemblot结果显示,HA、F和人IL2基因均在痘苗病毒中稳定有效表达,且产物与天然蛋白相近。HA分子有糖化的79kD和非糖化的田kD两种形式;F分子以60kD的前体F0、43kD的F1和18kD的F2三种形式存在。表达产物的血凝效价为1:8,血溶活性OD540的测定结果是O37。该重组病毒免疫新西兰白兔及C57小鼠,可以产生抗麻诊病毒HA和F蛋白的特异性ELISA(1:644~1600)、血凝抑制(1:256~512)、血溶抑制(1:80~160)和NT(1:640)抗体。接种兔及裸鼠后的毒力反应,明显低于只表达IL2的重组痘苗病毒疫苗株RVJ123,表现为兔皮肤红肿范围小,持续时间短,皮肤无坏死;裸鼠毒力的结果,表现出RVJMLHAFKIL2病毒只存留于接种局部,而且滴度大大降低,未发现该病毒向其它脏器播散和增殖。麻疹重组痘苗病毒疫苗株的构建为该疫苗株的人体免疫观察奠定了基础。 相似文献
200.
应用基因重组技术,把编码EB病毒早期蛋白BCRF1基因重组于真核表达载体pSG5中,并使该基因在乳地鼠肾(BHK)传代细胞中获得良好表达,表达率为0.5%,血清学实验证实,鼻咽癌,类风湿性关节病人和正常人血清中均不同程度地含有IgG/BCRF1抗体,抗体阳性率分别主92%,86%和77%,几何平均滴度(GMT)分别是:1:16.35,1:14.72和1:10.15。两组病人和正常人血清中IgA/B 相似文献