枯草杆菌蛋白酶基因工程的研究进展

本文介绍了枯草杆菌蛋白酶(Subtilisin)的研究现状,即利用定位诱变和体外重组等技术改变酶的性质,包括催化活性、底物特异性、稳定性、低温适应性以及酶在有机相中的性能等。对枯草杆菌蛋白酶的成功改造不仅有可观的商业价值,而且为蛋白质工程的发展作出了重要的贡献 。     

一种重组抗胰蛋白酶单体人胰岛素突变体的设计,制备？…

用缺口双链ＤＮＡ的定向突变方法分别将胰岛素前体中Ｂ链第２２、２８、２９和３０位改变为Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ和Ｌｙｓ,酵母分泌表达的前体经胰蛋白酶直接酶切,得到重组〔Ｂ２２Ａｓｐ、Ｂ２８Ｌｙｓ、Ｂ２９Ｐｒｏ、Ｂ３０Ｌｙｓ〕人胰岛素。它与受体的结合能力约为猪胰岛素的６％,而体内生物活力保留５０％。通过ＦＰＬＣ分子筛测定其自身结合能力,在生理条件下浓度达１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ时它以单体形式存在。作为可抗胰     

人心肌肌球蛋白轻链1的克隆,表达纯化和单抗制备

报道了中国人心肌肌球蛋白轻链１ｃＤＮＡ的核苷酸序列,并由此推算的氨基酸序列。与国外发表的人心肌肌球蛋白轻链的氨基酸序列比较,发现有两处差异,即在２４位,由谷氨酸变为丙氨酸,则从９８位起至１０１位有４个氨基酸序列的连续差异,即由天冬酰胺－精氨酸－丝氨酸－赖氨酸变为赖氨酸－脯氨酸－精氨酸－谷氨酰妥,推测可能是由于人种差异而引起的。利用该ｃＤＮＡ在大肠杆菌内的表达产物,已获得一株高效的抗中国人心肌肌球蛋     

幽门螺杆菌毒力相关基因及所致疾病

幽门螺杆菌（Ｈｐ）作为各种常见胃肠疾患的重要病原已得以确认,但其确切的致病机制的尚未阐明。目前倍受关注的是其两个特征性致病因子：细胞空泡毒素（ＶａｃＡ）和细胞毒相蛋白（ＣａｇＡ）。国外科研人员对这两种因子编码基因、同常见胃肠疾患的相关性以及在ＨＰ致病机制中的作用进行了广泛而深入的研究。     

检测SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中家蝇蛋白的新方法——海波银染法

介绍一种检测SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中家蝇幼虫蛋白的新方法-海波银染法。该方法对传统银染方法中的试剂与步骤加以改进,省略了乙醇固定与洗涤步骤,只需20 min即可完成全部染色过程,且仅在国产分析纯试剂及普通操作条件下,灵敏度可达毫微克级水平。     

PCR及其衍生技术在基因突变检测中的应用

许多人类遗传性疾病及某些抗艾滋病药物的抗性乃至细菌对某些抗生素的抗药性通常源于基因突变。本文对近年来在基因突变检测中应用日益广泛的各种PCR 衍生技术作一综述;重点介绍了错配PCR技术,以及我们实验室近期报道的一种快速检测喹诺酮类药物耐药大肠杆菌的错配PCR方案。 Abstract:Many inherited diseases and drug resistance have been attributed to mutations in corresponding genes.In this paper,several techniques based on PCR used in diagnosis were concluded.The development and research progress of Mismatch PCR were discussed in details.Some information about an assay that we developed for detection of antimicrobial resistance to quinolones was also described.     

DNA复制调控与人类重大疾病——我国生物医学科学中长期战略发展的一个方向

目前,人类正受到日益严重的癌症、心血管疾病、病毒感染、老年病和其它人类疾病的困扰。疾病的肆虐将导致社会危机、威胁人类文明,如非典型肺炎对我国和世界的袭击所带来的损失和震撼。因此,为了与人类疾病斗争,通过新的途径了解疾病发生机理和发现新的特效药物是极为必要的。其中之一就是ＤＮＡ复制调控与人类疾病的基础和应用研究。生命现象最本质的内容就是ＤＮＡ复制。从生命科学发展来说,“ＤＮＡ复制调控和人类疾病...     

双向凝胶电泳分析小鼠子宫内膜胚泡着床点和着床旁组织蛋白质组

目的 :研究小鼠子宫内膜胚泡着床点和着床旁蛋白质表达图谱及其差异。方法 :用固相pH梯度双向凝胶电泳分离 5d .p .c .(dayspostcoitum)小鼠子宫内膜胚泡着床点和着床旁总蛋白 ,同时分离同龄未交配小鼠子宫内膜总蛋白 ,银染显色 ,PDQuest 2DE软件分析。结果 :图像分析测得三块胶的匹配率达 74 5 %以上 ,在等电点pI 3～ 1 0、分子量 1 4 4～ 75 4kDa范围内分离得未交配小鼠子宫内膜蛋白点大约 81 0个 ,受孕小鼠子宫内膜胚泡着床旁和着床点蛋白质点分别大约为 95 0个和 1 0 4 0个 ,其中至少 90个蛋白点在三种不同的生理状态间有 2倍以上的量变。结论 :在“着床窗口期” ,小鼠子宫内膜特别是着床位点内膜合成更多的蛋白质 ,以适宜胚泡成功地植入。     

高温对水稻叶片蛋白质表达的影响

为明确高温对耐热性不同水稻品种叶片蛋白质表达的影响,以耐热性不同的2个籼稻品种双桂1号(不耐热)和黄华占(耐热)为材料,分别于苗期、减数分裂期及抽穗(始穗后0—10d)和灌浆早期(始穗后11—20d)进行高温处理,之后取材并采用双向凝胶电泳技术研究高温对不同水稻品种叶片蛋白质表达的影响。结果表明,高温胁迫导致叶片中蛋白质的变化呈4种状况:新蛋白质的产生,一些蛋白质表达量上调,一些蛋白质的表达被抑制,一些蛋白质表达量下调。蛋白质表达变化在两品种以及4个处理时期的表现不同,总体表现为在热敏感品种中表达谱发生变化的蛋白质总数高于耐热品种。质谱分析表明,差异蛋白质主要涉及光合作用和信号转导,该类蛋白质在热敏感品种中表现为不表达或表达量下降,而在耐热品种则表现为有新诱导的蛋白质的产生或表达量上调,表明参与光合作用和信号转导的蛋白质在水稻耐热机制中发挥了重要作用。     

长江江豚感染铜绿假单胞菌肺炎的诊治

本文记录了一例患急性铜绿假单胞菌肺炎的长江江豚诊断、治疗和预后观察过程。病原学鉴定采用鲜血琼脂平板对该江豚鼻腔拭子,在37℃下进行细菌需氧、厌氧培养和分离,并对所分离的细菌种类进行细菌学鉴定,结合血常规和血生化的检测结果,判定病原为铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,PA）。依据病原菌的药敏试验结果对患病江豚进行治疗,预后良好。通过对整个过程的资料分析以及预后观察,得到如下提示：1）应做好饲养环境的消毒措施,防止江豚出现获得性PA感染;2）对江豚日常呼吸道和粪便中PA的检测,有利于疾病的早期预防和控制;3）江豚呼吸系统疾病的治愈依赖于准确的病原鉴定和及时的治疗,药敏试验对于PA感染的治疗非常必要;4）行为学的改变在江豚呼吸道疾病发病初期以及预后有重要的指示作用。