Neurofibromatosis： The role of guanosine triphosphatase activating proteins in sensory neuron function

Neurofibromatosis type 1 (NF1) is a common autosomal dominant disease characterized by formation of multiple benign and malignant tumors. People with this disorder also experience chronic pain, which can be disabling. Neurofibromin, the protein product of the Nfl gene, is a gnanosine triphosphatase activating protein (GAP) for p21Ras (Ras). Loss of Nfl results in an increase in activity of the Ras transduction cascade. Because of the growing evidence suggesting involvement of downstream components of the Ras transduction cascade in the sensitization of nociceptive sensory neurons, we examined the stimulus-evoked release of the neuropeptides, substance P (SP) and calcitonin gene-related peptide (CGRP), from primary sensory neurons of mice with a mutation of the Nfl gene (NfI 1-). Measuring the levels of SP and CGRP by radioimmunoassay, we demonstrated that capsaicin-stimulated release of neuropep-tides is 3-5 folds higher in spinal cord slices from Nfl 1-mice than that from wildtype mouse tissue. In addition, the potassium- and capsaicin-stimulated release of CGRP from the culture of sensory neurons isolated from Nfl 1- mice was more than double that from the culture of wildtype neurons. Using patch-clamp electrophysiological techniques, we also examined the excitability of capsaicin-sensitive sensory neurons. It was found that the number of action potentials generated by the neurons from Nfl 1- mice, responsing to a ramp of depolarizing current, was more than three times of that generated by wildtype neurons. Consistent with that observation, neurons from Nfl 1- mice had lower firing thresholds, lower rheobase currents and shorter firing latencies compared with wildtype neurons. These data clearly demonstrate that GAPs, such as neurofihromin, can alter the excitability of nociceptive sensory neurons. The augmented response of sensory neurons with altered Ras signaling may explain the abnormal pain sensations experienced by people with NFI and suggests an important role of GAPs in the mechanism of sensory neuron sensitization.     

核酸条形码技术：扩展蛋白质-蛋白质相互作用检测通量的新方法

蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction, PPI)几乎参与了机体内所有重要的生物学过程,在细胞的基本生命过程中扮演了至关重要的角色,开发高通量的PPI检测新方法具有重要的生物学意义。目前,下一代测序技术(next-generation sequencing, NGS)发展快速,能在几天内测定超过10亿个模板的DNA序列。由于并行DNA测序技术所特有的敏感性、特异性、高通量和多路复用优势,其已被用作广谱分子计数器,应用于基因组测序和转录物组测序等领域。核酸条形码技术通过将寡核苷酸标签与目标蛋白质连接起来,从而标记编码蛋白质。之后,利用高通量的测序方法检测相互作用的蛋白质,实现了PPI的高通量检测。这一技术推动了PPI检测方法的飞速发展,提升了单次实验检测的通量,为构建PPI网络提供了强有力的技术支持。本文详细阐述了核酸条形码在PPI检测方法中的设计、生成和读取;通过分析核酸条形码技术在PPI研究中的应用范例,探讨了各自的优势和不足,并评估了数据的可靠性,讨论了基于核酸条形码技术的PPI检测方法未来的发展趋势。     

染色质免疫沉淀技术在研究DNA与蛋白质相互作用中的应用

在后基因组时代,DNA-蛋白质的相互作用是研究基因表达调控的一个重要领域。与其他方法相比,染色质免疫沉淀技术（chromatin immunoprecipitation assay, ChIP）是一种在体内研究DNA-蛋白质相互作用的理想的方法。近年来这种方法与DNA芯片和分子克隆技术相结合,可用于高通量的筛选已知蛋白因子的未知DNA靶点和研究反式作用因子在整个基因组上的分布情况,这将有助于深入理解DNA-蛋白质相互作用的调控网络。总结了染色质免疫沉淀技术的方法,特别介绍了使用这些方法取得的最新进展。     

氯沙坦对自发性高血压大鼠肾脏蛋白质表达谱的影响

目的:研究氯沙坦对自发性高血压大鼠肾脏组织蛋白质表达的影响。方法:采用蛋白质组学的技术,建立自发性高血压和氯沙坦干预后高血压大鼠肾脏的蛋白质二维凝胶电泳图谱,利用Imagemaster2Dv5.0软件分析蛋白点,并通过LC-MS/MS质谱分析和数据库检索鉴定差异蛋白质。结果:两组凝胶的平均蛋白点数分别为570±48、686±30。氯沙坦干预后有13个蛋白表达发生了显著变化,表达增强4个,表达降低4个,蛋白点消失5个。13个差异蛋白点进行质谱分析,鉴定出的7个蛋白质为Heat shock protein(Hsp)、Tubulin alpha-1chain、Transthyretin precursor、Liver regeneration-related protein LRRG03、Ezrin-radixin-moesin binding phosphoprotein50、Phosphoglycerate kinase1、Anionic trypsin I precursor。结论:这些差异表达的蛋白质可能在氯沙坦对高血压肾脏保护中发挥一定作用。     

蛋白质组学进展

在蛋白质水平上定量、动态、整体性研究生物体的蛋白质组学 ,将在后基因组时代大大增进我们对基因功能的理解。简要介绍了蛋白质组学的概念、研究手段 ,及最新进展     

马立克氏病病毒超强毒感染鸡羽髓蛋白质组分析

【目的】羽毛是细胞游离马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)释放的部位,为了解感染MDV后鸡羽中宿主基因表达的变化及对病毒感染的应答,进行了MDV感染鸡的羽髓蛋白质组学分析。【方法】1日龄无特定病原体(specific pathogen free,SPF)鸡人工感染MDV超强毒RB1B株(1000PFU),感染后21d采集鸡羽毛,提取羽髓蛋白,以17cm,pH5-8的IPG胶条进行二维电泳,以未感染病毒的SPF鸡羽髓蛋白为对照,使用PDQuest软件对二维电泳图谱进行差异蛋白分析,并选取部分差异斑点进行质谱鉴定。【结果】PDQuest软件分析发现攻毒组和对照组表达差异大于两倍的蛋白点有41个,其中攻毒组表达上调的蛋白点25个,下调的蛋白点7个,新出现的蛋白点有9个。质谱分析共成功鉴定了21个斑点,对应于20个蛋白。如载脂蛋白AI(apolipoprotein AI)、14-3-3 sigma(两个斑点均为该蛋白)、癌蛋白18(stathmin)等。【结论】功能预测表明这些蛋白涉及到宿主的抗病毒应答、物质代谢、细胞骨架成分、细胞增殖相关等方面。     

Biological characteristics of dengue virus and potential targets for drug design

Dengue infection is a major cause of morbidity in tropical and subtropical regions, bringing nearly 40% of the world population at risk and causing more than 20,000 deaths per year. But there is neither a vaccine for dengue disease nor antivirai drugs to treat the infection. In recent years, dengue infection has been particularly prevalent in India, Southeast Asia, Brazil, and Guangdong Province, China. In this article, we present a brief summary of the biological characteristics of dengue virus and associated flaviviruses, and outline the prowess on studies of vaccines and drugs based on potential targets of the dengue virus.     

线粒体蛋白质组研究的进展

应用蛋白质组技术已对正常人胎盘和大鼠肝线粒体蛋白质进行分离与鉴定,补充了线粒体蛋白质组数据库,并且通过比较蛋白质组学研究技术寻找病理条件下线粒体差异表达的蛋白质,为疾病的诊断和治疗提供作用靶标。随着蛋白质组技术的发展和完善,一些新方法也被应用于线粒体蛋白质的研究,推动了线粒体研究的发展。线粒体蛋白质组研究虽然已取得了一些成果,但线粒体蛋白质组数据库中的数据仍较匮乏,并且还有一些问题亟待解决和改善。     

在条锈菌侵染早期小麦初生叶内多聚核糖体水平与蛋白质合成能力的变化

小麦初生叶接种条锈菌毒性生理小种（ＣＹ２９）及其弱毒突变菌系（ＣＹ２９－ｍｕｔ３）后,呈不亲和反应的寄主叶片可溶性蛋白质合成能力在接种后２４ｈ显著高于未接种对照,但其后逐渐降低,直至接近对照;而呈亲和性反应的寄主叶片可溶性蛋白质合成在侵染早期与对照相近,但与膜结合蛋白质在９６ｈ时大大高于对照。对接种叶中核糖体的密度梯度分析证实：呈不亲和反应寄主叶片游离多聚核糖体及亲和反应的寄主内与膜结合多聚核糖体均有特异性增加。上述结果表明寄主的抗病和感病反应均与蛋白质合成能力的变化有关。     

水杨酸与植物抗逆性

综述了植物体内水杨酸对不同逆境的响应与信号转导、基因表达和蛋白质合成过程 ;对外施水杨酸的效应和与活性氧、抗氧化系统、脱落酸的关系 ,以及水杨酸作为系统信号分子的可能性作了讨论