江浙蝮蛇毒酸性与碱性磷脂酶A2溶液构象变化的差示扫…

运用差示扫描量热法,在不同ＰＨ值的缓冲溶液内和各种浓度的碱土族氯化溶液内,研究了来自江浙蝮蛇毒的酸性与碱性磷脂酶Ａ２的热变性过程。得到表征这两种酶深液构象变化的热力学参数。依据这些参数研究了两者的溶液构象及其变化。在ＰＨ４．５以下,分子净荷正电的这两种酶在溶液中不形成可热致伸展的有序构象;ＰＨ高于４．５时,Ａｓｐ和Ｇｌｕ的侧链羧基以负离子形式存在有利于有序构象的稳定。Ｈｉｓ是决定ＰＬＡ２活力和热稳     

蝮蛇三龙丹胶囊对大鼠实验性脑血肿的影响

目的探讨蝮蛇三龙丹胶囊对大鼠实验性脑血肿的影响。方法采用大鼠自体血液颅内注入造成大鼠脑血肿模型,观察蝮蛇三龙丹胶囊的作用。结果蝮蛇三龙丹胶囊（０．２ｇ／ｋｇ、０．４ｇ／ｋｇ）可明显降低脑指数、脑组织含水量（Ｐ＜０．０１）及Ｃａ２＋离子含量（Ｐ＜０．０１）,对Ｎａ＋、Ｋ＋离子含量无明显影响（Ｐ＜０．０５）。结论蝮蛇三龙丹胶囊对实验性脑血肿诱发脑水肿有一定防治作用,且对小鼠出、凝血时间无影响,亦未见对大鼠实验性脑血肿发生再出血。本实验为蛇毒制剂治疗高血压性脑出血提供可靠依据。关键词蝮蛇三龙丹胶囊脑血肿脑水肿     

重组白眉蝮蛇去整合素定点突变对其生物活性的影响

RGD为存在于许多糖蛋白配体中的氨基酸序列,对整合素具有识别作用.此序列也发现于许多蛇毒去整合素分子中.采用基因克隆技术从大连产白眉蝮蛇的毒腺中克隆出的去整合素adinbitor是含73个氨基酸残基的去整合素,分子中含有12个半胱氨酸和RGD模体.实验证明,adinbitor作为去整合素的新成员,具有典型的抗ADP诱导的人血小板聚集作用和抗肿瘤血管新生作用.为了将adinbitor的这2种功能分开,采用PCR基因定点突变的方法,将其cDNA序列中RGD模体改变成KGD.重组adinbitor(KGD)在E.coli BL21得到表达,并通过His•Bind亲和层析予以纯化.实验发现,adinbitor对ADP诱导的人血小板聚集具有明显抑制作用,其IC50=85 nmol/L,明显优于adinbitor(RGD) （IC50=150 nmol/L）.然而,与adinbitor(KGD)相比,adinbitor(KGD)则丧失了对血管生成的抑制作用.结果说明,adinbitor(KGD)可作为专一的抗人血小板聚集药具有潜在的开发前景.     

长白山白眉蝮蛇蛇毒PLA2分离纯化及性质鉴定

目的 从长白山自眉蝮蛇粗毒中分离提取了一种新的PLA2,并对其进行了性质鉴定.方法 采用DEAE Sephadex A-25、Sephadex G-75、HPLC等层析方法 ;聚丙烯酰胺凝胶电泳;磷脂酶A2活性测定.结果 得到了一种新的PLA2,分子量在14 kD左右,PLA2比活力为41μmol·mg-1·min-1,最适温度50℃,最适pH8.5左右.结论 长白山白眉蝮蛇毒存在一种新的PLA2同源物,具有PLA2活性,有较好的耐热、耐酸性.     

白眉蝮蛇毒血凝酶的药理作用和临床应用

白眉蝮蛇毒血凝酶是国内新上市的一种新药,是从长白山白眉蝮蛇毒的毒液中提取的含有凝血酶和类凝血酶的复合制剂,近来广泛应用于临床各科。现就其药理作用和临床应用及安全性作一综述。     

蛇岛蝮蛇消化道嗜银细胞的分布及形态学观察

应用Grimelius银染法对蛇岛蝮蛇Gloydius shedaoensis 消化道嗜银细胞的分布密度及形态进行研究.结果 表明,蛇岛蝮蛇的消化道中嗜银细胞分布广泛,见于其全长,主要分布于上皮细胞基部、上皮细胞之间、腺泡上皮细胞之间,也有少量位于固有膜内;胃贲门是嗜银细胞分布密度的高峰,胃体次之,食管分布密度最低;嗜银细胞形态多样,主要有锥体形、梭形、圆形和椭圆形,具有内、外分泌两种功能.     

蝮蛇肌肉中次黄嘌呤的鉴定与含量测定

目的建立一种高效液相色谱法测定蝮蛇肌肉中次黄嘌呤的新方法。方法采用Venusil MP-C18柱分离和LC—MS技术联用鉴定蝮蛇肌肉中存在次黄嘌呤,并测定蝮蛇肌肉中次黄嘌呤的含量。姑果该法适合于蝮蛇肌肉中次黄嘌呤含量的测定。操作简便,样品稳定。结论该法操作简便,结果准确可靠,为蝮蛇药材的质量控制提供了有效的方法。     

蛇伤凉血合剂对尖吻蝮蛇咬伤患者凝血四项的影响

目的观察蛇伤凉血合剂对尖吻蝮蛇咬伤的临床疗效。方法将60例尖吻蝮蛇咬伤患者随机分为观察组和对照组各30例,两组患者均给予常规治疗,治疗组加服蛇伤凉血合剂,观察比较两组患者就诊时(咬伤2h内)、咬伤后72h凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、纤维蛋白原(Fg)的变化。结果两组患者就诊时TT、PT、APTT、Fg均在正常范围,两组比较差异无统计学意义。伤后72h,两组患者的TT、PT、APTT均升高,Fg均降低,而且组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论蛇伤凉血合剂对尖吻蝮蛇咬伤所致凝血功能障碍有防治作用。     

江浙蝮蛇神经生长因子在大肠杆菌中的表达及纯化*

将江浙蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas,A.h.P)神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)基因克隆于分泌型原核表选载体pET-22b⁺,以c端融合了6个组氨酸的形式在大肠杆菌B12l(DE3)中进行了IPTG诱导表达。SDSPAGE分析确定有一比理论值略大的诱导表达条带,其表达量占全菌蛋白质的20％左右,且表达蛋白质主要是以包涵体的形式存在。用6mol／L的盐酸胍溶解包涵体后,利用固定化金属离子(Ni²⁺)配体亲和层析一步纯化目的蛋白质,纯度可达80％左右。对该重组肽进行变复性研究。利用PCl2细胞进行生物活力测定,证明表达产物具有NGF生物活力。     

尖吻蝮蛇毒碱性磷脂酶A2的表达及其生化特征

将尖吻蝮蛇毒碱性磷脂酶A₂（A.aBPLA₂）基因克隆至温敏表达载体pBLMVL2,在大肠杆菌RR1中成功诱导表达.表达产物A.aBPLA₂约占细菌蛋白质总量的20％,并以包涵体的形式存在.纯化包涵体后,将产物变性、复性,然后用FPLC Superose^TM12纯化,产物经过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测只有单一条带.对纯化后的表达A.aBPLA₂进行了酶活性、抑制血小板聚集活性和溶血活性的测定.结果显示,表达A.aBPLA₂的酶活性与变性后复性江浙蝮蛇酸性磷脂酶A₂酶活性相近,具有类似变性后复性江浙蝮蛇碱性磷脂酶A₂的溶血活性,没有抑制血小板聚集活性.最后对磷脂酶A₂的结构与这些活性的关系进行了讨论.