北京市通州区冬季流感样病例病毒病原谱特征分析

目的了解北京市通州区冬季流感样病例病毒病原谱特征,为制定科学有效的防控措施提供依据。方法采用多重实时荧光PCR法,对2016年11月-2017年2月采集的265份流感样病例的咽拭子样本,检测人流感病毒、副流感病毒、人偏肺病毒、博卡病毒、人冠状病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒、腺病毒的核酸。结果本次检测中,任一病毒阳性率为36.60%,其中单一病毒感染占96.91%,混合感染占3.09%。单一病毒感染中,人流感病毒检出率最高(31.70%),其次为鼻病毒(2.26%)。2016年11月-2017年2月,不同月份病毒的总检出率差异无统计学意义(χ~2=1.780,P=0.619)。从年龄组成看,不同年龄组人群病毒的总检出率差异无统计学意义(χ~2=1.691,P=0.639),19~60岁组人群检出的病毒种类多于其他年龄组。结论 2016年11月-2017年2月,北京市通州区引起流感样病例的病毒并非只有流感病毒,也有鼻病毒、偏肺病毒、腺病毒等其他常见呼吸道病毒,建议加强常见呼吸道病毒的监测。     

人诺如病毒最新研究进展

人诺如病毒(Human noroviruses,HuNoVs)是杯状病毒科(Caliciviridae)的一种单股正链RNA病毒,它是导致全球急性非细菌性肠胃炎暴发的主要病原体之一。自1972年美国学者Kapikian利用透射电镜首次观察到首株诺瓦克病毒(Norwalk virus,NV)以来,该病毒在全球范围内多次广泛流行。据报道,全球每年有超过1亿人因感染HuNoVs而发病,其临床症状主要为恶心、呕吐、腹痛和腹泻,多数患者表现为自限性,但也会导致少数婴幼儿、老人和免疫缺陷患者发展成重症,甚至死亡。HuNoVs引起的疫情暴发给全球的公共卫生安全带来了较大的威胁。本文将对HuNoVs的病原学及流行病学、体外培养体系、动物模型、免疫反应和疫苗研发的最新研究进展进行概述。     

人Semaphorin 4D慢病毒载体的构建及鉴定

目的:构建并制备能够有效表达Semaphorin 4D的重组慢病毒。方法:从人急性T细胞白血病Jurkat细胞DNA 扩增人Semaphorin 4D基因,克隆至pWPI GW慢病毒载体上,与pVSVG及pSPAX质粒共转染人胚肾293T细胞,包装出重组慢病毒,将纯化后的重组病毒直接感染293T和HUVEC细胞,通过免疫印迹、免疫荧光染色和血管内皮细胞迁移分析等方法检测Semaphorin 4D的表达和诱导血管内皮细胞迁移的作用。结果: 重组慢病毒介导Semaphorin 4D在293T和HUVEC内获得表达,能介导血管内皮细胞迁移。结论:成功构建了表达Semaphorin 4D的重组慢病毒载体。     

《科学-转化医学》:有些猴子生来就能有效抵御SIV

一项新的研究报告说,猴子中的某些免疫和遗传学特征可增加某种猴类免疫缺陷病毒(或称SIV)疫苗的有效性。由于SIV与人类免疫缺陷性病毒(或称HIV)有着密切的关系,这些发现支持这样的观念,即某些人可能带有某些基因或免疫系统的特征,使得     

慢病毒介导的GFP-Hsp90αE47A基因在HepG2细胞表达及对细胞增殖性影响的研究

目的：建立真核细胞表达的GFP-Hsp90αE47A基因重组慢病毒载体三质粒包装细胞系统,并检测其对细胞增殖性的影响,为进一步研究HSP90分子伴侣功能奠定基础。方法：制备完整的重组慢病毒载体三质粒系统：转移质粒（Hsp90αE47A/psin-GFP）,包装质粒（ΔNRF）及包膜蛋白质粒（VSV-G）。磷酸钙法将三质粒共转染293T包装细胞,48h后收集病毒上清。将制备好的慢病毒颗粒感染HepG2细胞,在荧光显微镜下观察报告基因GFP的表达情况,Westernblot检测HepG2细胞GFP-Hsp90α表达。MTT法检测细胞增殖情况。结果：转染后的293T和感染后的HepG2细胞能观察到较强的绿色荧光,培养液上清病毒滴度约为3.0×103ifu/μl,HepG2细胞中有GFP-Hsp90α蛋白的表达。内源性Hsp90α表达无明显上升（为对照组的1.05±0.15倍,P〈0.05,t检验）,有明显外源性GFP-Hsp90αE47A蛋白的表达,为对照组内源性Hsp90α的0.68±0.12倍。外源性GFP-Hsp90αE47A蛋白的表达HepG2细胞增殖活性于第4d有明显抑制。（1.051±0.03vs1.349±0.05,P〈0.05,t检验）。结论：成功建立重组慢病毒载体的三质粒包装细胞系统,并将GFP-Hsp90αE47A基因在HepG2细胞中稳定表达,且并未引起细胞明显的热休克反应而导致的内源性Hsp90α增高;且能明显抑制细胞增殖,为后期Hsp90α分子伴侣功能进行研究奠定基础。     

牛病毒性腹泻病毒Erns-E2融合蛋白在果蝇S2细胞中的表达与鉴定

目的:利用果蝇S2细胞表达牛病毒性腹泻病毒(BVDV)Erns-E2融合蛋白,并对其抗体结合能力进行鉴定.方法:用RT-PCR方法扩增BVDV NADL株Erns和E2蛋白的编码基因,利用(G4-S)3柔性15肽基因将扩增的2个基因连接,再与昆虫表达载体pMT/BiP/V5-His连接构建重组表达载体pMT/BiP/V5-His-E(MS)-E2,将后者与筛选质粒pCoBlast共转染果蝇S2细胞后表达Erns-E2融合蛋白.并对表达产物进行鉴定.结果:SDS-PAGE结果表明,融合蛋白相对分子质量为76 800;Westem blotting检测表明,该融合蛋白具有与BVDV抗体良好的结合能力.结论:BVDV的Erns-E2融合蛋白能在果蝇S2细胞中进行表达;经鉴定,表达产物具有良好的抗体结合能力,可用于抗原检测.     

犬2型腺病毒通用载体的构建及鉴定

为了获得能够携带较大外源基因的犬2型腺病毒E3区缺失性载体,以犬2型腺病毒全基因组质粒pPolyⅡ-CAV-2及E3区重组质粒pVAX-E3为基础,缺失1381bp的E3区片段(92.6%的E3区全序列),插入Linker-NF(内含NotⅠ、ClaⅠ、FseⅠ多克隆位点),获得重组载体质粒pPolyⅡ-CAV-2-ΔE3（NF）(31.9kb)。以AscⅠ和PmeⅠ双酶切,游离重组基因组,在脂质体Lipofectamine^TM 2000介导下,转染MDCK细胞系,获得了E3区缺失的重组病毒CAV-2-ΔE3（NF）。通过病毒的形态学观察,血凝性、生长特性、感染性实验证明,该重组病毒与母源病毒没有差异。重组病毒CAV-2-ΔE3（NF）可以作为载体表达外源基因,其外源基因插入片段不小于3.3kb。     

甲型流感HIN1病毒抑制NK细胞杀伤效应及治疗策略展望

NK细胞是天然免疫系统的重要成员之一,在控制某些病毒感染与抗肿瘤中发挥着重要作用。根据表面标志表达水平的差异,将NK细胞分为CD56bright和CD56dim两大亚群;此外根据NK细胞在免疫应答过程中功能的不同又将NK细胞分为辅助性NK细胞、调节性NK细胞、杀伤性NK细胞与     

呼吸道合胞病毒感染促进豚鼠产生气道高反应性及其机制研究

目的：通过检测气道反应性和M2受体功能,研究呼吸道合胞病毒（RSV）感染与哮喘发病的关系及机制。方法：34只豚鼠随机分为4组：Hep-2滴鼻＋生理盐水雾化（Hep-2／NS,A）组,RSV滴鼻＋生理盐水雾化（RSV／NS,B）组,Hep-2滴鼻＋鸡卵蛋白（OVA）雾化（Hep-2／OVA,C）组和RSV滴鼻＋OVA雾化（RSV／OVA,D）组,其中A和B纽各9只,C和D组各8只,以A组为对照组。21d通过电刺激迷走神经检测各组气道反应性和M2受体功能,行嗜酸性粒细胞计数以及病理学观察。结果：B组气道内压力（mmH2O）与A组无明显差异（P〉0．05）,给予匹罗卡品,IP下降幅度高于A组,但差别无显著性（P〉0．05）。C组IP明显高于A且（P〈0．05）,且给予匹罗卡品,IP下降幅度明显低于A组,差别有显著性（P〈0．05）。D组IP明显高于C组（P〈0．05）,给予匹罗卡品后IP下降幅度明显低于C组（P〈0．05）。结论：RSV感染可促进过敏原引起的M2R功能障碍,从而促进AHR发生。