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51.
用PCR方法扩增人微小纤溶酶原(Microplasmingen,mPlg)基因,再与表达载体重组.构造mPlg原核表达质粒并转化大肠杆菌。阳性克隆pSSE-mPlg经温度诱导表达,SDS-PAGE等方法证明表达产物的分子量约为29kDa。占全菌总蛋白的24%左右,并在菌内形成包涵体。经半胱氨酸再氧化法和空气氧化法复性。表达产物r-mPlg经SK作用后显示纤溶活性。同时对蛋白质浓度、复性时间等因素对复性的影响进行了初步探讨。 相似文献
52.
53.
PSⅡ反应中心D1蛋白的小肽抗体的制备和鉴定 总被引:7,自引:3,他引:4
用人工合成的PSⅡ反应中心D1蛋白中(229~240)的12肽,与牛血清白蛋白偶联后做为抗原免疫家兔, 获得抗菠菜D1蛋白抗体. 免疫双扩散法测得其具较高的效价,蛋白印迹检测结果显示该抗体仅与D1蛋白有免疫亲和反应. 表明此抗体可作为检测D1蛋白及其光抑制时降解产物的探针. 相似文献
54.
酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶基因(PGK1)启动子片段的亚克隆 总被引:1,自引:0,他引:1
含有3-磷酸甘油酸激酶基因(PGK1)的酿酒酵母染色体3.1kb HindⅢ片段,已被克隆到大肠杆菌-酵母菌穿梭载体pCN60上。Kpn Ⅰ核酸内切酶在pCN60上没有酶切位点,而在pCN60(PGK1)上仅有一酶切位点。用此酶将pCN60(PGK1)质粒完全酶切,再用Bal31从两端逐步消解碱基对,使反应终止于每端消解500bp左右,加上EcoR Ⅰlinker。用EcoRⅠ、BamH Ⅰ酶切,分离1. 9kb的DNA片段,插入用同样双酶切的酵母启动子探针载体pVC727上,转化E.coli C600,再从转化子中提取重组质粒转化酵母受体菌NA87-11A。用菌落染色法筛选出PHO5基因高效表达转化子,这个转化子质粒含有1.9kb的BamH Ⅰ、EcoRⅠ酶切片段,它具有强启动子功能,并测定其3'末端序列。 相似文献
55.
56.
编码天麻抗真菌蛋白cDNA的分子克隆 总被引:9,自引:0,他引:9
用重组DNA 技术研究了编码天麻抗真菌蛋白(GAFP)的基因,从天麻(Gastrodia elataBl.)块茎中提取Poly(A) m RNA 后合成cDNA,构建成表达型cDNA 文库,用纯化的蛋白质探针通过免疫筛选找出对应的cDNA 克隆。在进一步证明所选用的cDNA 克隆含有重组的λ-phage DNA 后,提取和纯化含有插入片段重组子的DNA,用Eco RI酶切分析可见插入片段。已分离出编码天麻抗真菌蛋白的基因 相似文献
57.
从cDNA文库中筛选分析阳性克隆的简便方法 总被引:2,自引:0,他引:2
cDNA文库中阳性克隆的传统筛选分析法既费时又费力.利用微波炉加热的方法,简化了原位杂交中噬菌斑裂解、DNA变性与固定的程序;进一步运用PCR扩增技术,特异扩增克隆载体中插入的cDNA片段,加快了阳性克隆分析的进程. 相似文献
58.
张大达 《中国生物工程杂志》1984,4(2):74-77
大豆胚胎发生的中熟期(mid-maturation)合成的大量贮存蛋白质为研究高等植物基因表达调节提供了一个极好的系统。已对其中两种主要的贮存蛋白质,大豆球蛋白(glycinin)(11s)和conglycinin(7S)作了生物化学定性。 相似文献
59.
60.