茶树CsPNPO基因的功能鉴定与表达分析

PNP氧化酶是VB_6代谢途径中一个重要的转化酶。该研究以茶树‘龙井43’为材料,采用RT-PCR方法克隆PNP氧化酶基因,以pET22b(+)为载体构建原核表达载体,通过IPTG进行诱导表达并进行功能鉴定;采用荧光定量PCR方法分析茶树不同组织中CsPNPO基因的表达差异以及在低温和干旱胁迫下的表达特征,为进一步解析茶树VB_6的生理生化功能奠定基础。结果表明:(1)茶树CsPNPO编码框长度为1 503 bp,编码501个氨基酸,分子量为48.5 kD,理论等电点5.82,不含信号肽,属于亲水性的非分泌蛋白,定位于叶绿体;氨基酸序列分析结果显示,其有叶绿体转运肽区域、YjeF-N功能域和PNP氧化酶功能域。(2)成功构建pET22b(+)-CsPNPO原核表达载体,并在pH 8.5、37℃时测定重组蛋白有较强的PNP氧化酶活性。(3)荧光定量PCR检测结果显示,CsPNPO基因在茶树叶中的表达量最高,其次是茎,根的表达量最低仅为叶的十分之一,表明CsPNPO基因具有组织表达特异性;在低温和干旱条件下CsPNPO基因的表达量下降明显,推测CsPNPO基因可能参与了茶树对低温和干旱的逆境应答。     

贵州古茶树资源结构组成与分布特征

目的：摸清贵州古茶树资源组成与分布，为区域古茶树资源保护、利用提供基础。方法：采用线路调查的方法，对贵州省内古茶树进行全面调查，利用地理信息系统和统计学分析贵州古茶树资源种类组成、地理分布特征、年龄结构特征及生长状况。结果：（1）资源调查涉及338个分布点，记录了7 816株古茶树，隶属5种2变种；（2）赤水河-綦江水系是疏齿秃房茶现有分布中心、乌江水系是茶现有分布中心、都柳江水系是突肋茶现有分布中心；（3）古茶树垂直分布于海拔200 m到2 500 m之间，随着海拔升高，分布的物种数越多，在1 000～1 500 m海拔段物种数量达到峰值，随后海拔越高物种数越少；（4）古茶树树高一般在10 m以下，地围在20～100 cm的居多，平均冠径集中在3 m以下，绝大部分古茶树生长势正常，也存在因生境影响而处于衰弱或濒危状态。结论：调查显示贵州古茶树资源共7种，含5种2变种，存在疏齿秃房茶、茶、突肋茶等3个物种的现有分布中心。古茶树生长状况良好，少数处于衰弱或濒危状态，亟需加强古茶树保护与管理力度。