2,4-二硝基氟苯衍生法测定游离氨基酸方法的优化

以美国HPLC 110 0系列为基本实验设备 ,在流速为 1 0ml/min ,紫外检测器波长为 36 0nm ,运行时间 2 5min ,进样量为 10ul情况下 ,筛选了流动相梯度、2 ,4_二硝基氟苯用量、柱温 ,测定了回收率。结果表明 :FDBN衍生法分析游离氨基酸 ,流动相Ⅰ为 0 0 4NKH2 PO4 ( pH =7 2± 0 0 5 ,40 %KOH调整 )缓冲液 ;流动相Ⅱ为乙腈的水溶液 ,其浓度为 5 5 % ,流动相Ⅰ的百分比梯度为 86 / 0min— 88/ 2min— 86 / 4min— 70 / 10min— 30 / 2 0min— 10 / 2 1min— 0 / 2 4.0min ,1%FDBN用量为 5— 2 0ul,柱温 40℃ ,样品AA浓度大于 0 5nmol/ul,17种AA分离效果最佳。此方法AA回收率在10 0 %～ 10 4%之间。     

K_(ATP)通道开放剂对颈动脉窦压力感受器反射的易化作用

在 30只隔离灌流颈动脉窦区的麻醉大鼠 ,观察了KATP通道开放剂 (cromakalim ,Cro)对颈动脉窦压力感受器反射的影响。结果如下 :( 1)以Cro ( 10 μmol/L)隔离灌流大鼠左侧颈动脉窦区时 ,压力感受器机能曲线向左下方移位 ,曲线最大斜率 (PS)由 0 36± 0 0 1增至 0 48± 0 0 1kPa/kPa (P <0 0 0 1) ,反射性血压下降幅度 (RD)由 5 78± 0 14增至 7 87± 0 12kPa (P <0 0 0 1) ;阈压 (TP)、平衡压 (EP)和饱和压 (SP)则分别从 8 34± 0 35 ,12 71± 0 2 5和 2 4 89±0 2 5下降至 6 41± 0 0 9kPa,11 78± 0 2 4kPa ,2 2 5 6± 0 16kPa (P <0 0 1～ 0 0 0 1)。其中RD ,PS和TP的变化呈明显的剂量依赖性。 ( 2 )用KATP通道阻断剂格列苯脲 (glibenclamide,10 μmol/L)预处理后 ,Cro的上述反射效应即被阻断。( 3)先给予腺苷 (adenosine,12 5 μmol/L)则可以加强Cro对压力感受器反射的影响。以上结果表明 ,KATP通道开放剂Cro对大鼠颈动脉窦压力感受器反射有易化作用 ,此作用是由KATP通道开放剂引起窦壁扩张而牵张压力感受器所致     

5-氯水杨醛缩2,4-二羟基苯酰肼的抗菌抗氧化活性研究

目的考察5-氯水杨醛缩2,4-二羟基苯酰肼对金黄色葡萄球菌的抗菌活性及体外抗氧化活性。方法采用试管法和平板法测定其对金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC),绘制杀菌曲线,并通过扫描电镜研究其作用机制,采用DPPH法测定抗氧化活性。结果该化合物对金黄色葡萄球菌的MIC为2.5 mg/m L,MBC为5 mg/m L。杀菌曲线结果表明该化合物对金黄色葡萄球菌的杀菌作用表现出明显的浓度依赖性。扫描电镜结果表明该化合物的作用机制可能与破坏菌体细胞壁、改变其通透性有关。同时该化合物具有较强的清除自由基的能力。结论 5-氯水杨醛缩2,4-二羟基苯酰肼具有显著的抗金黄色葡萄球菌作用,同时具有较好的体外抗氧化活性。     

苯那普利联合氯沙坦治疗早期糖尿病肾病的临床研究

目的：研究苯那普利联合氯沙坦对2型糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）患者肾功能以及血浆脂联素（adiponectin,APN）和高敏C反应蛋白（highsensitivity-C responseprotein,hs-CRP）的影响。方法：选择我院心血管内科住院的2型糖尿病肾病患者42例,均符合早期糖尿病肾病的诊断标准,给予苯那普利10-20mg治疗3个月后,给予苯那普利10mg联合氯沙坦50mg-100mg再治疗3个月,检测和比较治疗前后患者血肌酐（Scr）和24小时尿蛋白定量（24h—UPE）以及血浆hs-CRP和APN水平。结果：苯那普利治疗3个月后,患者的Scr、24h—UPE和hs-CRP水平较治疗前明显降低;血浆APN水平较治疗前明显升高,差异均有统计学意义（P〈0．05）。而苯那普利联合氯沙坦再治疗3个月后,患者的Scr、24h-UPE水平和hs-CRP水平较苯那普利治疗3月时更低,血浆APN水平较苯那普利治疗3个月时更高,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：苯那普利联合氯沙坦治疗可更好地保护早期糖尿病肾病患者的肾功能,这可能与其提高血浆APN水平和降低CRP水平有关。     

MPEP阻断mGlu5抑制肝癌细胞HepG2增殖

代谢型谷氨酸受体5（metabotropic glutamate receptors 5, mGlu 5）在神经系统的多种病理生理过程中发挥重要作用. mGlu5与肝细胞癌的发生发展关系密切,其抑制剂2-甲基-6-(苯乙基）-吡啶（2-methyl-6-(phenylethyl)-pyridine, MPEP）能够促进肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞的迁移.在此基础上,进一步探讨了MPEP与肝癌细胞增殖之间的关系.结果显示：在无血清和有血清的条件下,MPEP均能显著降低肝癌细胞HepG2的细胞活力.同时发现,有血清条件下MPEP能使HepG2细胞周期停滞在G1 期,显著降低HepG2细胞的DNA合成能力和克隆形成能力,并能下调细胞增殖信号ERK 通路的活性.该研究结果为进一步认识MPEP对肝癌细胞的抑制作用提供了新的实验证据.     

耐三苯氧胺乳腺癌异种移植瘤动物模型建立与评价

目的:建立耐三苯氧胺(TAM)人乳腺癌的裸鼠移植瘤模型,为研究和治疗乳腺癌对TAM耐药提供研究工具。方法:采用雌激素受体阳性,对TAM耐药的人乳腺癌细胞系LCC2,接种于BALB/c裸鼠皮下,观察肿瘤生长趋势,用免疫组化方法进行鉴定。结果:在接种细胞数大于5×106/只时,Matrigel能够显著促进移植瘤的生长。肿瘤组织病理学检测证实为浸润性导管癌,且Pgp和Her-2为阳性表达。结论:该方法建立的耐TAM人乳腺癌移植瘤模型,周期短,成瘤率高,保留了与细胞系相同的肿瘤生物学特征。     

土壤环境多氯二苯并二噁英/呋喃(PCDD/Fs)污染及其修复研究进展

多氯二苯并二噁英/呋喃(PCDD/Fs)是持久性有毒有机污染物,易沉积在土壤环境中,通过生物放大和生物富集最终输入到人和动物体内,对生态系统和人体健康有极大的威胁.本文在对PCDD/Fs环境行为与污染来源进行阐述的基础上,概述了PCDD/Fs污染的地域性特点以及土壤中PCDD/Fs的背景值和污染控制参考值;分析了我国土壤PC-DD/Fs污染状况和潜在污染源,江西、广州贵屿、长江三角洲、台湾南部、浙江台州、天津某化工厂等6个区域污染较严重,主要污染源有含氯化学品的生产与使用,垃圾焚烧和纸浆生产.最后,介绍了PCDD/Fs污染土壤的处置方法与修复技术,主要有物理化学处置方法、微生物修复方法、植物修复方法、植物-微生物联合修复方法,并对今后该研究方向进行了展望.     

外周苯二氮(艹卓)受体激动剂Ro5-4864抑制大鼠心肌细胞线粒体通透性转换

线粒体通透性转换（mitochondrial permeability transition,MPT）导致线粒体氧化应激性损伤。近年研究认为,位于线粒体外膜的外周苯二氮节受体（peripheral benzodiazepine receptor,PBR）参与了线粒体的重要生理功能。本研究在心肌细胞线粒体水平探讨激动PBR能否抑制Ca^2＋诱发的MPT。分离Sprague—Dawley大鼠心肌细胞线粒体,将PBR激动剂Ro5-4864（50、100、200μmol／L）和线粒体孵育,利用150μmol／L Ca^2＋诱发MPT,部分线粒体在与100μmol／L Ro5-4864孵育前5min加入MPT孔道开放剂苍术苷（atractyloside,ATR）。采用分光光度法观察线粒体膨胀情况：Westernblot检测线粒体细胞色素C（cytochrome C,CytoC）释放;利用荧光探针JC-1在激光共聚集显微镜下观察线粒体膜电位的变化。50、100、200μmol／L Ro5-4864均显著抑制Ca^2＋诱发的520nm处线粒体吸光度的下降,而且抑制Ca^2＋引起的线粒体CytoC释放和线粒体膜电位下降,但ATR可阻断R05—4864的上述作用。结果提示,PBR激动剂可抑制大鼠心肌MPT,保持线粒体CytoC含量和稳定线粒体膜电位,减轻线粒体损伤。PBR的激活可能成为减轻心肌细胞应激性损伤及心肌保护的新方法。     

基于Meta分析研究芪明颗粒治疗糖尿病视网膜病变效果

用Meta分析方法比较中药复方芪明颗粒与羟苯磺酸钙两种药物治疗糖尿病视网膜病变的临床疗效和安全性。本研究利用中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数据库、维普网、PubMed及Embase数据库检索芪明颗粒与羟苯磺酸钙治疗糖尿病视网膜病变的相关文献,检索时限均为建库至2016年5月31日,同时查阅该文献的参考文献。制定检索策略以及纳入和排除文献的标准,根据标准确定最终纳入的随机对照试验(RCT)文献。采用RevMan 5.2进行Meta分析,用固定效应模型进行数据合并。研究结果表明,共纳入文献8篇,均为RCT,涉及患者1 261名。纳入的研究方法学质量评价结果部分偏低。Meta分析结果显示:总有效率8项研究的同质性结果为卡方Ch^i2=5.98,自由度是7 (p=0.54),8项研究统计量均为二分类变量,故采取Z检验;M-H=1.96,95%可信区间为(1.52, 2.54),合并效应检验Z=5.13,p<0.001,表明芪明颗粒治疗组的总有效率大于对照组,两组比较差异具有统计学意义。不良反应发生率分析4项研究的同质性结果为卡方Ch^i2=0.41,自由度是3 (p=0.94),同属二分类变量,采取Z检验,M-H=0.15,95%可信区间为(0.05, 0.39),合并效应检验Z=3.82,p<0.001,表明芪明颗粒治疗组的不良反应发生率小于对照组,两组比较差异具有统计学意义。Meta分析初步表明,芪明颗粒治疗糖尿病视网膜病变疗效显著,安全性好。因不良反应原始研究的质量偏低,样本量小,尚需更多高质量、大样本的随机对照试验进一步观察研究。     

可视化突变建模、定点突变和表达超耐热菌D-乳酸脱氢酶

目的 构建产天然防腐剂苯乳酸的工程菌。方法 分析超耐热菌（Aquifex aeolicus,A.aeolicus ）D-乳酸脱氢酶（D-LDH）的三维构象,并与构建的可视化突变体三维模型进行对比,通过比较酶活性中心氨基酸残基与底物的空间构象,优选最佳模型进行定点突变,克隆、表达和苯乳酸发酵实验。结果 优选到F49A和Y297S两个单突变模型和一个F49A/Y297S双突变模型;分别进行定点突变和工程菌构建,三个突变工程菌,均能发酵产生苯乳酸。结论 可视化定点突变乳酸脱氢酶可作为构建高产苯乳酸工程菌的有效方法。