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141.
部分酶解酵母高效电击转化研究 总被引:2,自引:0,他引:2
以酵母质粒YCp50为外源DNA,电击转化部分酶解酵母宿主菌AB1380,转化效率稳定在10~6转化子/μg质粒DNA左右,比不酶解酵母或酵母原生质球作受体的电击转化效率高一个数量级以上,也比PEG介导的酵母原生质球转化高3~5倍,而且适合于大片段DNA如水稻YAC分子的转化。达最佳转化时的有关技术参数为:新接菌种通气培养至细胞密度1×10~8~1.5×10~8个/ml;转化时细胞密度控制在1×10~9~1.5×10~9个/ml;每毫升酶解缓冲液加15u溶菌酶(lyticase),30℃下处理酵母5min进行部分酶解;电击时,电场设置在6.25kV/cm、电容25μF,电击后直接铺板。 相似文献
142.
143.
本实验室已得到的亮氨酰-tRNA合成酶(LeuRS)基因,与文献相比,67位氨基酸残基由His变为Arg,此酶被定名为LeuRS67R。我们从该基因与pUC19重组质粒的大肠杆菌TG1转化子TG1-91中得到LeuRS的高表达,粗抽液中LeuRS的表达量在转化子中比在宿主菌TG1中高20倍以上。用三步拉层析得到电泳一条带的酶,其比活为1789单位/毫克。测定其动力学常数,氨酰化活力对Leu、ATP的Km值分别为0.027mmol/L、0.47mmol/L,Kcat值分别为3.5~5.1s-1。ATP-PPi交换活力对Leu、ATP的Km值分别为0.03mmol/L、1.0mmol/L,Lcat值分别为140~155s-1。此结果与从野生型大肠杆菌K-12中提纯的LeuRS的动力学常数差别很小,67位氨基酸残基在与活性中心无直接关系的域可能是大肠杆菌的种间差异。 相似文献
144.
将大肠杆菌精氨酰tRNA合成酶(ArgRS)上Lys306用基因点突变的方法分别变为Ala和Arg的密码子;得到变种基因args306KA和args306KR。变种基因重组在pUC18上,转化到大肠杆菌TG1中,转化子中ArgRS及其变种ArgRS306KA和ArgRS306KR所表达的蛋白量至少为TG1表达ArgRS蛋白量的100倍。细胞粗抽提液中ArgRS的比活TG1、转化子pUC18-args、pUC18-args306KA和pUC18-args306KR分别为1.65、210、1.8和38单位/毫克。结果表明ArsRS的Lys306为Ala取代使活力完全丧失;若被Arg取代,则活力丧失80%以上。Lys306为ArgRS活力所必需。 相似文献
145.
固定化虫荧光素酶光纤传感器 总被引:1,自引:0,他引:1
固定化虫荧光素酶光纤传感器蔡谨,王顺光,杨歧生,吉鑫松(浙江大学化工系生化教研室,杭州310027;中国科学院上海生物化学研究所,200031)关键词虫荧光素酶,ATP,固定化酶,光纤生物传感器ATP是生物体内极为重要的能量物质。如何准确快速地定量A... 相似文献
146.
在Plesiomonas sp.90-1中,降解直链烷基苯环酸钠(LAS)相关的酶为诱导酶.使用正交多因子法研究了细胞降解LAS酶活诱导的最佳条件为:细胞培养温度30℃,LAS诱导浓度10ppm,酵母膏0.008%,pH8.0,通气.在此条件下,LAS酶活比未经诱导者提高1.4倍.碳源的加入会阻遏LAS降解酶的活力形成.在所试氮源中,以(NH_4)H_2PO_4对LAS降解酶的形成最有利.低浓度的磷酸盐对LAS降解酶活形成无影响,但高浓度的磷酸盐对LAS降解酶活形成不利.利用微量检压技术发现经此条件诱导的细胞耗氧量上升2—3倍. 相似文献
147.
利福霉素生产菌产生钝化RifSV物质的分离及性质研究 总被引:1,自引:0,他引:1
利福霉素SV(简称RifSV)生产菌──地中海拟无枝菌酸菌在生物合成RifSV过程中,产生一种能钝化自身产物(RifSV)的物质.实验证实,该物质是由谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸及缬氨酸等14种常见氨基酸组成的蛋白质.分子量(MW)约2.5×104D,等电点(PI)为5.7—6.1.在100℃下加热10min,其活性丧失.作用于RifSV的最适pH值范围为7.4—8.6,最适温度为29℃,初步证实该物质是一种酶(暂称利福霉素钝化酶) 相似文献
148.
氨基酰化酶在LDS溶液中的失活与去折叠的比较研究 总被引:1,自引:1,他引:0
氨基酰化酶在阴离子去污剂十二烷基硫酸溶液中的失活与去折叠的研究结果表明,在低浓度的LDS溶液中变性时,以荧光和紫外差吸收方法监测的酶分子构象尚未发生明显变化,而酶的活力已经大部分或几乎全部丧失。当LDS浓度达1.6mmol/L时,此时酶分子的构象变化才达到最大程度。在实验使用的LDS的浓度范围内,用远紫外CD光谱监测的二级结构没有发生明显的变化。 相似文献
149.
本文对103例锰作业工人测定了血液流变学中的七项指标,结果表明:全血粘度(高切、低切)、血浆粘度、红细胞压积、纤维蛋白原、红细胞电泳、血小板粘附、血沉等项指标,均明显高于正常对照组(P<0.01),证实锰作业工人普遍存在高粘滞血症,为临床治疗锰中毒开辟新的途径提供了依据。对其中的52例锰中毒(包括症状较重的观察对象),用清栓酶治疗后,复查其七项指标与治疗前比较,均有明显下降(P<0.01),其症状与体征得以改善,进一步说明清栓酶是治疗锰中毒的理想药物之一。 相似文献
150.
反应介质对脂肪酶稳定性的影响 总被引:6,自引:0,他引:6
脂肪酶Lipozyme^IM在有机溶剂中的热稳定性显著提高,在水溶液中,热处理温度高于50℃后,其催化甘油三酯水解的活力迅速下降,温度升到60℃时,水解活力仅残存13.6%,温度高于70℃该酶完全失活,而在有机溶剂正庚烷中,温度高达85℃仍表现出较高的活性,反应介质的疏水性越强,酶抗超声辐射变性作用的能力越强,经同样的超声辐射处理后,正已烷中Lipozyme^IM的酯水解活力仅损失11.8%,而在 相似文献