苏云金芽胞杆菌Rpp39杀虫晶体蛋白基因的鉴定及cry2Aa12基因的克隆表达

[目的]本研究的目的是分析从四川生态条件下分离的苏云金芽胞杆菌Rpp39菌株的特性,从分子水平上揭示该菌株对鳞翅目高毒力的原因;进一步从中分离克隆cry2Aa基因,并对其进行初步的表达研究.[方法]本研究主要采用扫描电镜观察、PCR-RFLP鉴定法和SDS-PAGE分析法研究菌株的特性;采用PCR直接克隆法克隆cry2Aa全长基因,并亚克隆到原核表达载体pET-30a中,构建重组表达质粒pET-2Aa,再转入受体菌E.coli.BL21(DE3)中进行诱导表达;采用室内生物测定法测定表达产物对小菜蛾和水稻二化螟的毒力.[结果]经扫描电镜观察菌株Rpp39主要产生菱形、方形和圆形3种伴胞晶体;SDS-PAGE分析表明主要产生130 kDa和60 kDa左右2种蛋白;经PCR-RFLP鉴定,该菌株含有cry1Aa、cry1Ab、cry1Ac、cry1Ia和cry2Aa五类杀虫晶体蛋白基因;1种cry2Aa类杀虫晶体蛋白全长基因被克隆,序列分析显示该基因的开放阅读框(ORF)为1902 bps,编码由634个氨基酸组成的蛋白质,氨基酸序列与Cry2Aa1蛋白同源性为99.7%,被国际Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会命名为cry2Aa12.重组表达质粒pET-2Aa在E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导能正常表达,SDS-PAGE电泳验证含有65 kDa表达蛋白.生物活性测定表明表达的包涵体蛋白对小菜蛾和二化螟具有杀虫活性,LC50分别为5.4 μg/mL和22.3μg/mL.[结论]菌株Rpp39及从中分离克隆的cry2Aa12基因来自四川生态条件,丰富了菌株及基因的资源,在资源积累方面具有重要意义.     

苏云金芽胞杆菌产苏云金素菌株CT-43及其 缺失突变株的差异蛋白

[目的]苏云金素(Thuringiensin)的合成和代谢途径的相关研究在国内外一直进展缓慢,本文拟从蛋白质组水平揭示与苏云金素合成或代谢相关的蛋白.[方法]利用双向电泳技术研究了高产苏云金素的苏云金芽胞杆菌野生菌株CT-43、其高产突变菌株CT-43-1C及不产突变菌株BMB0806在蛋白表达水平的差异,然后对差异蛋白点进行质谱鉴定,最后对鉴定出的蛋白进行生物信息学分析.[结果]与野生型和高产菌株相比,在BMB0806中发现了13个差异显著的蛋白点,鉴定出了其中的9个,生物信息学结果显示有6个蛋白可能与苏云金素合成或代谢相关.[结论]通过蛋白质组研究找到了6个可能与苏云金素合成或代谢相关的蛋白,为苏云金素合成基因簇的克隆和合成途径的验证提供了有力的证据.     

凝结芽胞杆菌对大鼠降糖作用的实验研究

目的：考察凝结芽胞杆菌（简称TQ33）对糖尿病大鼠病理模型的降血糖作用及糖耐量的影响,方法：以四氧嘧啶制备糖尿病大鼠病理模型后,灌服TQ33口服液,以氧化酶法测定大鼠血清中血糖含量。结果：TQ33对正常大鼠的空腹血糖基本无影响,对糖耐量的Cmax有明显的降低作用,并促进血糖水平迅速恢复;TQ33可降低实验性糖尿病大鼠的血糖水平,对糖耐量的Cmax有明显的降低作用,使糖耐量减低现象好转,结论：TQ33对由于四氧嘧\啶造成的糖尿病大鼠模型有一定的治疗作用。     

几种离子及有机物对蜡样芽胞杆菌蛋白酶活力的影响

研究不同浓度的金属离子及有机物对蜡样芽胞杆菌蛋白酶活力的影响,结果表明①五种无机离子中Mg     

罗布麻实生幼苗地下部再生能力观察（摘要）

罗布麻根有不定芽,若生长期刈除地下部后,具有再生新株的能力,但需了解其具再生力的苗龄。如遇病害或其它原因地上部被毁坏,即可预知其能否再生,并在移苗,间苗时都有一定的指导作用。用山东红麻鲁3做试验材料,结果看出一年生实生幼苗在9－10对真叶时,开始有再生能力,再生率为39％－69％,再生苗长势较弱;幼苗真叶达11对以上时,再生力较,再生率为80％－90％,再生苗生长势较强,生长速度也较快。     

含质粒复制起始区ori44的苏云金芽胞杆菌解离载体的构建

将苏云金芽胞杆菌转座子Tn4430的解离酶识别位点res分别插入克隆载体pRSET B和pUC19得到质粒pBMB1201和pBMB1202。这两个质粒分别经BamHI/HindⅢ和EcoRI/HindⅢ双酶切回收含res位点的小DNA片段,与穿梭载体pHT3101经EcoRI/HindⅢ双酶切后回收的含大肠杆菌复制起始区、氨苄青霉素抗性基因和红霉素抗性基因的3.3kb片段连接,获得重组质粒pBMB1203。封闭pBMB1203两res位点外的BamHI和EcoRI位点后,得到解离载体pBMB1204。将来源于苏云金芽胞杆菌库斯塔克亚种YBT-1520的质粒复制起始区ori44片段插入pBMB1204的两res位点之间,得到解离穿梭载体pBMB1205。该解离载体插入壮观霉素抗性基因后电转化无晶体突变株,在辅助质粒所提供的解离酶作用下可发生解离消除抗性基因,解离频率为100%,解离后的质粒稳定性为93%。利用解离穿梭载体pBMB1205可在用抗性筛选到转化子后特定消除抗性标记基因和其它非苏云金芽胞杆菌DNA片段。     

苏云金芽胞杆菌LM1212菌株cry基因启动子的活性分析

【背景】前期发现一株具有独特分化表型的苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)LM1212,该菌株共有14种杀虫基因,组成了10个转录单元。利用源自菌株LM1212的晶体产生细胞调控因子(crystal producing cell regulator, CpcR)以及其可以激活的cry35-like基因启动子,已在典型Bt菌株HD73中成功构建了非芽胞杀虫蛋白表达体系。【目的】比较菌株LM1212的不同杀虫基因启动子的转录活性,明确可被转录因子CpcR激活的且转录活性较高的启动子,以此为基础优化非芽胞杀虫蛋白表达体系。【方法】将10个启动子区域分别与lacZ报告基因融合构建在pHT304-18Z载体上,得到了10个重组质粒;然后将cpcR基因及其启动子(PcpcR-cpcR)分别反向构建在选取的启动子区域与lacZ报告基因的上游,得到可以表达CpcR且与上述构建相对应的10个重组质粒,将这些重组质粒分别转入不含CpcR的菌株HD73,即获得20个可用于测定β-半乳糖苷酶活性的重组菌株。通过光学显微镜观察和SDS-PAGE检测明确杀虫蛋白表达的情况。【结果】在...     

银苗的组织培养与快速繁殖

1　植物名称　银苗 (Stachysfloridana)又称地灵、银条菜、银根芽。2　材料类别　茎尖。3　培养条件　芽分化培养基 :( 1 )MS + 3%糖 (云南产食用白砂糖 ,下同 )。增殖培养基 :( 2 )MS +6 BA 0 .1mg·L- 1 (单位下同 ) +IBA 0 .2 +CH(酸水解酪蛋白 ) 1 5 0 + 3%糖 ;( 3) 1 /2MS +IAA 0 .2 +2 .5 %糖。生根培养基 :( 4 ) 1 /2MS +IAA 0 .2 +IBA 0 .1 + 3%糖。上述培养基均加入 0 .5 5 %纯化琼脂粉 ,pH5 .8,1 2 1～ 1 2 3℃高温灭菌 1 5min。培养室温度 1 8～ 2 8℃ ,光照时间 1 2h·d- 1 ,光照度1 5 0 0～ 2 5 0 0lx。4　生长与分…     

杂交鹅掌楸的不定芽诱导及植株再生

1　植物名称　杂交鹅掌楸 (Ｌｉｒｉｏｄｅｎｄｒｏｎｈｙｂｒｉｄ———Ｌ .ｃｈｉｎｅｎｓｅ×Ｌ .ｔｕｌｉｐｉｆｅｒａ)。2　材料类别　春季的萌动芽。3　培养条件　不定芽的诱导培养基 :(1 )ＭＳ 6 ＢＡ1 .0ｍｇ·Ｌ-1(单位下同 ) ＫＴ 0 .5 ＩＢＡ 0 .2 Ｖｃ5 ;(2 )     

芽殖酵母细胞周期的检查点调控

芽殖酵母是研究真核细胞的模式菌。细胞周期检查点是确保细胞周期正常运行的一种调控机制。就芽殖酵母细胞周期检查点调控加以介绍。