戊型肝炎病毒第4基因型中国株ORF2编码蛋白的抗原表位分析

以戊型肝炎病毒(HEV)第4基因型中国株ORF2编码蛋白p166Chn制备单克隆抗体(McAbs), 同时制备20个N端或C端逐渐截短的p166Chn截短蛋白, 与7种不同基因型和亚型的p166蛋白一起, 通过ELISA、免疫印迹(Western blot)以及竞争抑制实验对主要存在于我国的HEV第4基因型毒株进行抗原表位分析。结果发现所制备的McAbs与p166Chn截短蛋白的免疫反应有两种类型, 以1G10为代表的McAbs能与N端不短于aa477、C端不短于aa613的截短蛋白反应, 其针对的抗原表位是构象依赖型表位, 依赖于aa477~aa613肽链区段; 而McAb 2F11则能与N端不短于aa474、C端不短于aa617的截短蛋白反应, 其针对的抗原表位也是构象表位, 但需依赖于较长的肽链区段(aa474~aa617)。竞争抑制实验显示两类McAbs互不抑制, 进一步证实了所发现的两个抗原表位在空间位置上的不同。更有意义的是, 两类McAbs均能与其他不同HEV基因型和亚型来源的p166重组蛋白发生阳性反应, 表明这两个抗原表位是HEV基因型共同性的, 可以在世界各国分布的不同基因型HEV毒株中诱导交叉免疫。     

玉兰育种研究初报

玉兰育种工作在我国尚处在起步阶段,现所采用的育种方法有：（1）在栽培繁殖过程中选择天然优良变异品种,现已根据花色,花型,花期选出10多个新品种;（2）通过人工杂交育种,现已获得三批杂交实生苗;人工杂交主要需克服花期不遇的困难,在杂种实生苗的管理上采用适当多次移栽和嫁接的方法,使实生苗提早开花,缩短育种年限 ;（3）物理,化学诱变,遗传工程,生物技术在玉兰育种中运用的较少。     

矿区可持续生态环境管理规划方法研究

矿区生态规划理论与方法研究可为矿区的可持续发展提供具体的理论指导和技术支持．作为矿区生态规划的重要组成部分之一的矿区可持续的生态环境管理规划,贯穿于矿区整个开发生产过程．以可持续的生态环境建设和管理的思想为基础,建立了矿区生态环境管理体系框架,对生态环境管理指标的确定、生态环境因素的识别以及生态环境管理方案的决策提出了具体的方法．     

铁炮百合组培中不定芽形成的细胞学观察

以铁炮百合鳞片诱导的无菌苗叶段作外植体,在MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L培养基上诱导不定芽,效果较好。诱导过程中定期取样进行石蜡制片,观察不定芽分化过程中的细胞组织学变化。结果表明,脱分化始于切口周围的细胞;形态发生的主要方式是由愈伤组织分化出不定芽,不定芽通常起源于愈伤组织团从外到内第2~7层细胞的分生细胞团。     

苏云金芽胞杆菌cry26Aa和cry28Aa基因共表达可在芽胞外壁内侧形成伴胞晶体

苏云金芽胞杆菌幕虫亚种的伴胞晶体在预芽胞外壁内侧形成,呈现晶体芽胞粘连的现象。根据已发表的cry26Aa1和cry28Aa1基因序列设计引物,从苏云金芽胞杆菌幕虫亚种T02中扩增得到cry26Aa和cry28Aa基因,通过穿梭载体将这两个基因分别和同时转化到苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB171后,透射电镜下可在芽胞外壁内侧和外侧同时观察到伴胞晶体,而单独表达时可在芽胞外壁外侧观察到伴胞晶体。结果表明,伴胞晶体在芽胞外壁内侧表达不单独依赖于启动子的时空调控,可能还受到晶体蛋白相互作用的影响。     

苏云金芽胞杆菌高效表达载体的构建

[目的]通过比较cry1A、cry3A、cry4A和cry8E四个基因的启动子转录活性,筛选出一个强启动子,利用强启动子构建一个苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)高效表达载体.[方法]利用启动子融合lacZ技术检测了4种启动子的转录活性.通过扫描电子显微镜观察晶体、SDS-PAGE、蛋白定量和生物活性测定等方法对新建高效表达载体进行功能验证.[结果]构建了Pcry1A、Pcry3A、Pcry4A和Pcry8E4个启动子融合报告基因lacZ的表达载体,经β-半乳糖苷酶活性分析得知,启动子活性从高到低依次为Pcry8E＞Pcry1A＞Pcry4A＞Pcry3A.选取cry8E启动子,以pHT315作为基础载体构建苏云金芽胞杆菌高效表达载体pHT315-8E21b,将cry1Ac基因连接到pHT315-8E21b和广泛应用的cry3A启动子指导的pSXY-422b上,分别转入无晶体突变株HD-73-,获得菌株HD-8E1Ac和HD-422-1Ac.扫描电子显微镜观察显示,HD-8E1Ac菌株可以形成菱形晶体,说明正确表达了cry1Ac基因.SDS-PAGE分析结合蛋白定量实验表明pHT315-8E21b表达效率高于pSXY-422b.对小菜蛾(Plutella xylostella)的生物活性测定表明HD-8E1Ac菌株对小菜蛾有生物活性,且菌株活性高于HD-422-1Ac.[结论]利用强启动子Pcry8E构建了一个能在Bt中高效表达的穿梭载体pHT315-8E21b,该载体可正确表达cry1Ac基因,其表达效率高于被广泛应用的pSXY422b.     

假坚强芽胞杆菌中乙醇降解相关酶的克隆、表达及酶学特性

【目的】研究假坚强芽胞杆菌OF4中乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶的酶学特性。【方法】通过引物设计,采用PCR技术从嗜碱芽胞杆菌OF4的基因组DNA中扩增获得乙醇脱氢酶(adh)基因和乙醛脱氢酶(aldh)基因,构建表达载体,通过异源原核表达,Ni-NTA柱层析纯化酶蛋白,分析其酶学特性。【结果】乙醛脱氢酶的最适反应温度为35℃,最适反应pH值为8.0,酶蛋白的活力为979.6 U/mg,其稳定性在25℃和35℃下比45℃稍好;尽管由于乙醇脱氢酶的表达量低而未能纯化获得酶蛋白,但通过双基因共表达及乙醇耐受性实验发现乙醇脱氢酶也具备较高的催化活性。【结论】成功地从假坚强芽胞杆菌OF4中克隆获得了乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶基因,二者共同作用能够较大提高宿主对乙醇的耐受性。     

有益芽孢杆菌受体菌研究

采用酸性茚三酮法测定了30株有益芽胞杆菌的赖氨酸产量,然后在不同的溶菌酶浓度下,对赖氨酸产量超过0．07g/L的21株菌进行原生质体转化质粒pUB110,测定原生质体形成率、原生质体再生率及转化频率,结果6103,6104,6120,6129四株菌的转化频率较高。最后,采用经典遗传学方法选育AEC抗性突变株,使赖氨酸积累提高。其中,B.licheniformis 6104诱变菌株610401能积累赖氨酸2．91g/L ,比出发菌株提高了17倍左右,转化率也提高了一个数量级。通过质粒的再转化试验及传代稳定性试验,进一步证实B.licheniformis 6104及其 突变菌株610401是较好的受体菌,尤其是用于赖氨酸合成酶基因的表达。     

基于表达元件和宿主优化促地衣芽胞杆菌高效表达L-天冬酰胺酶

L-天冬酰胺酶(L-asparaginase, L-ASN)广泛用于恶性肿瘤治疗及低丙烯酰胺食品生产,然而其较低的表达水平限制了应用推广。异源蛋白表达是提高目标酶表达水平的有效策略,芽胞杆菌广泛用于酶蛋白的高效生产,本研究拟通过表达元件及宿主优化提高芽胞杆菌(Bacillus)中L-天冬酰胺酶产量。首先,筛选了5种信号肽(SP_SacC、SP_AmyL、SP_AprE、SP_YwbN、SP_WapA)用于L-天冬酰胺酶的分泌表达,其中SP_SacC介导下L-天冬酰胺酶分泌效果最好,酶活达到157.61 U/mL。随后,选取了4种芽胞杆菌强启动子(P43、P_ykzA-P43、P_Ubay、P_{bac A}),其中串联启动子P_ykzA-P43介导的L-天冬酰胺酶表达量最高,较对照菌株提高了52.94%。最后,筛选了3种芽胞杆菌表达宿主：地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformi...     

从生态位观点评价苏南地区种植业结构调整

从生态位观点评价苏南地区种植业结构调整高德明（南京农业大学农学系,２１００１４）ＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＣｒｏｐｐｉｎｇＳｔｒｕｃｔｕｒｅＡｄｊｕｓｔｌｎｅｎｔｓｉｎＳｏｕｔｈｅｒｎＪｉａｎｇｓｕｆｒｏｍｔｈｅＶｉｅｗｐｏｉｎｔｓｏｆＮｉｃｂｅＴｋｅｏｒｙ￥．ＧａｏＤｅｍｉｎｇ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＡｇｒｏｎｏｍｙ,ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ,２１００１４）．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＥ－ｃｏｌｏｇｙ,１９９３,１２（２）：４３－４４．ＡｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｃｏｎｃｒｅｔｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｉｎｓｏｕｔｈｅｒｎＪｉａｎｇｓｕ,ｔｈｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ,ｎｅｃｅｓｓｉｔｙａｎｄｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｙｏｆａｄ－ｊｕｓｔｉｎｇｃｒｏｐｐｉｎｇｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｒｅｅｖａｌｕａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｖｉｅｗｐｏｉｎｔｓｏｆｎｉｃｈｅｔｈｅｏｒｙ．Ｔｈｅｅｆｆｉｃｉｅｎｃｉｅｓｏｆｔｗｏｃｒｏｐ－ｐｉｎｇｓｙｓｔｅｍｓｉｎｕｔｉｌｉｚｉｎｇｐａｄｄｙｆｉｅｌｄｎｉｃｈｅｓａｒｅａｎａｌｙｚｅｄａｎｄｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｔｈａｔｔｈｅｃｒｏｐｐｉｎｇｐａｔ