小蓬草精油对两种蚊虫的毒杀活性和成分分析

【目的】明确小蓬草Conyza canadensis ( L.) Cronq.精油的杀虫潜力及其活性成分。【方法】通过浸虫法和密闭熏蒸法测试了小蓬草精油对白纹伊蚊Aedes albopictus和致倦库蚊Culex pipiens quinquefasciatus幼虫及成蚊的毒杀活性, 并利用气相色谱 质谱联用仪（GC-MS）对精油的挥发性成分进行了定性分析。【结果】 小蓬草精油对白纹伊蚊1-4龄期幼虫及蛹的24 h LC50值分别为25.01, 45.88, 56.94, 64.60和346.23 μg/mL; 对致倦库蚊幼虫1-4龄期幼虫及蛹的24 h LC₅₀值分别为9.16, 8.65, 32.12, 43.68和197.83 μg/mL。在剂量分别为48, 64, 80, 96, 112和128 μg/cm3时, 小蓬草精油对白纹伊蚊成蚊的KT₅₀值分别为28.81, 22.31, 20.38, 17.05, 13.92和9.74 min; 对致倦库蚊的KT50值分别为34.90, 32.97, 23.97, 19.60, 15.20和10.34 min。 24 h熏蒸对白纹伊蚊和致倦库蚊成蚊的LC50值分别是75.46和99.19 μg/cm³。小蓬草精油的GC MS定性分析共分离鉴定出31种化合物, 其中单萜类物质6种, 倍半萜烯类物质17种, 含氧萜烯类6种。【结论】结果表明小蓬草精油对这两种蚊虫的毒杀活性较高, 具有深开发潜力。     

外源性PTEN增强放射线诱导胰腺癌ASPC-1细胞G2/M期阻滞

目的观察外源性PTEN在乏氧及放射前后对胰腺癌细胞系ASPC-1细胞周期及克隆形成的影响。方法将质粒pEAK8和pEAK8-PTEN分别转染ASPC-1细胞,获得ASPC-1-pEAK8细胞及ASPC-1-pEAK8-PTEN细胞,将ASPC-1、ASPC-1-pEAK8和ASPC-1-pEAK8-PTEN细胞各分成常氧组、乏氧组、照射组、乏氧照射组。乏氧组施加乏氧（1%O2）处理,乏氧时间为24 h,照射组接受4Gy单次照射,乏氧照射组在乏氧下进行照射。应用Western印迹杂交、流式细胞术、成克隆分析法检测外源性PTEN对ASPC-1细胞PTEN蛋白表达、细胞周期分布及细胞克隆形成能力的影响。结果ASPC-1-pEAK8-PTEN细胞较ASPC-1、ASPC-1-pEAK8细胞PTEN蛋白增加明显。常氧下,ASPC-1-pEAK8-PTEN细胞较ASPC-1、ASPC-1-pEAK8细胞G2/M期细胞增多,并且放射线进一步增强了G2/M期细胞阻滞。乏氧8h后,ASPC-1-pEAK8-PTEN细胞较ASPC-1、ASPC-1-pEAK8细胞凋亡比例显著提高。常氧及放射后,ASPC-1、ASPC-1-pEAK8、ASPC-1-pEAK8-PTEN细胞克隆形成率分别为33.33±8.38%、31.67±4.32%、24.00±3.90%和5.53±0.52%、5.33±0.74%、3.73±1.20%。乏氧及放射后,细胞克隆形成率分别为29.67±4.97%、29.50±3.39%、19.83±5.12%和12.08±0.78%、11.17±0.73%和7.38±0.58%。结果表明,ASPC-1-pEAK8-PTEN细胞较ASPC-1,ASPC-1-pEAK8细胞在照射及乏氧前后克隆形成率均明显降低。结论外源性PTEN可使胰腺癌ASPC-1细胞阻滞在G2/M期,增强乏氧诱导细胞凋亡,增强放射线诱导ASPC-1细胞G2/M期阻滞的能力,提高放射线对ASPC-1细胞在常氧及乏氧下的细胞杀伤。     

内皮素-1通过L-型钙通道的Ca^2＋内流和钙致钙释放诱导心肌细胞内[Ca^2＋]的增加

本研究利用fura-2-AM荧光成像和膜片钳技术,发现内皮素-1（Endothelin-1,ET-1）可显著提高大鼠分离心肌细胞内钙离子水平（[Ca^2＋]i）,激活心肌细胞钙通道．ETA受体阻滞剂BQ123能够消除ET-1提高[Ca^2＋]i的效应,而ETB受体阻滞剂BQ788对该效应无影响,用ryanodine受体阻断剂ryanodine（10μmol／L）预处理,可以使ET-1诱导的[Ca^2＋]i的增加抑制46.7％,蛋白激酶A（PKA）的抑制剂、蛋白激酶C（PKC）的抑制剂和血管紧张素Ⅱ-型受体（ATI receptor）的抑制剂都能够抑制ET-1诱导的[Ca^2＋]i的增加,本研究发现ET-1能够提高全细胞L-型钙通道电流的幅度,增加L-型钙通道单通道的开放概率．并且BQ123完全阻止了ET-1诱导的L-型钙通道开放概率增加的效应．本研究证明了ET-1通过一系列机制调节钙超载,包括L-型钙通道的激活,钙致钙释放（CICR）,ETA受体,PKC,PKA和血管紧张素Ⅱ-型受体也参与到了这个途径中。     

A型流感病毒NS1基因密码子去优化改造引起病毒毒力减弱

根据A型流感病毒密码子使用偏嗜性,选取稀有密码子对A/Puerto Rico/8/34(H1N1)病毒NS1基因内部110个氨基酸区域进行密码子同义突变改造,并全基因合成NS基因,利用反向遗传操作技术拯救出含有密码子去优化NS1基因的重组病毒(deoNS)。体外细胞噬斑形成实验和病毒生长曲线证明该病毒在MDCK细胞内的感染和复制能力比野生型病毒低约1000倍;BALB/c小鼠体内致病力实验证明deoNS病毒不能引起小鼠发病和死亡,该病毒在小鼠肺内的复制滴度比野生型病毒低100～1000倍。本研究探索了通过基因组密码子去优化改造途径降低A型流感病毒毒力的可行性,首次证明流感病毒NS1基因密码子去优化同义突变可以降低病毒毒力,为流感减毒活疫苗的研究提供了新的思路。     

有关IUCN红色名录中“地点”参数合理应用的讨论

“地点”参数是构成IUCN红色名录标准的重要参数之一。在IUCN红色名录评估过程中,使用“地点”参数时常常忽略或简化致危因子的作用,有时仅以标本记录、采集地点数、观测数据、文献记录的分布点、管理单元及行政单位等信息代替“地点”参数,导致“地点”参数不准确甚至偏离实际情况。为解决这些问题,采用图解方式详细描述了“地点”参数的4类正确判断方法,包括根据致危因子的变化判断物种的“地点”参数、根据亚居群范围判断物种未受影响区域的“地点”参数、根据“地点”的最小尺度判断物种未受影响区域的“地点”参数、根据历史记录预测物种的“地点”参数;并以中国特有植物岩生红豆（OrmosiasaxatilisK.M.Lan）为实例对“地点”参数的正确判断方法进行进一步说明。在此基础上,对“地点”参数正确使用过程中存在的困难进行了讨论分析并提出了该参数的使用建议。     

Permethrin resistance variation and susceptible reference line isolation in a field population of the mosquito,Culex quinquefasciatus （Diptera： Culicidae）

This study examines the genetic variations and mechanisms involved in the development of permethrin resistance in individual mosquitoes from a field population of Culex quinquefasciatus, HAmCq^G0, and characterizes susceptible reference lines of mosquitoes with a similar genetic background to the field HAmCq^G0 strain. Six upregulated cytochrome P450 genes, CYP9M10, CYP9J34, CYP6P14, CYP9J40, CYP6AA7, and CYP4C52v1, previously identified as being upregulated in the larvae of resistant HAmCq68 mosquitoes were examined in the larvae of 3 strains （susceptible S-Lab, parental HAmCq^G0 and permethrin-selected highly resistant HAmCq68） and 8 HAmCq^G0 single- egg raft colonies, covering a range of levels of susceptibility/resistance to perrnethrin and exhibiting different variations in the expression of A and/or T alleles at the L-to-F kdr locus of the sodium channel. The 2 lines with the lowest tolerance to permethrin and bearing solely the susceptible A allele at the L-to-F kdr locus of the sodium channels, from colonies Cx_SERC5 and Cx_SERC8, showed lower or similar levels of all 6 of the P450 genes tested compared with the S-Lab strain, suggesting that these 2 lines could be used as the reference mosquitoes in future studies characterizing insecticide resistance in HAmCq mosquitoes. This study also provides a detailed investigation of the mechanisms involved in insecticide resistance in individuals within a population： individuals with elevated levels of resistance to permethrin all displayed one or more potential resistance mechanisms-either elevated levels of P450 gene expression, or L-to-F mutations in the sodium channel, or both.     

三带喙库蚊体内猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离与鉴定

【目的】调查猪场蚊虫是否能携带猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病毒。【方法】采集发生PRRS疫情的3个养猪场蚊虫样本,采用RT-PCR方法检测PRRS病毒核酸,取阳性蚊虫样本接种Marc-145细胞进行病毒的分离培养,以间接免疫荧光抗体技术和分子克隆技术进行病毒的鉴定。【结果】 养猪场内的蚊虫主要有三带喙库蚊Culex tritaeniorhychus、凶小库蚊Culex modestus、中华按蚊Anopheles sinensis和骚扰阿蚊Armigeres obturbans,其中三带喙库蚊占86.76%;以PRRS病毒N基因引物进行扩增,三带喙库蚊样本呈现阳性反应,而其他蚊种均为阴性。在蚊虫接种的Marc-145细胞中可见细胞融合和空泡形成等细胞病变效应;用抗PRRS病毒N蛋白抗体和羊抗猪IgG(H+L)-FITC进行间接免疫荧光染色,感染细胞呈现黄绿色荧光;以NSP2基因引物进行RT-PCR扩增、克隆与测序,发现库蚊源病毒与相应猪场猪源病毒中相应基因的序列具有较高同源性。【结论】 三带喙库蚊为猪舍优势蚊种,并能携带猪繁殖与呼吸综合征病毒。     

SARS冠状病毒N蛋白激活hfgl2凝血酶原酶基因的研究

研究鉴定激活hfgl2凝血酶原酶基因的SARS冠状病毒结构蛋白.从SARS尸检肺组织中抽提RNA后制备cDNA,分别扩增SARS-CoV的N、S2和M全长基因序列,再分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)上.应用免疫组织化学分析鉴定pcDNA3.1-N、pcDNA3.1-M和pcDNA3.1-S2的表达.构建人纤维介素(hfgl2)启动子荧光素酶报告基因质粒,并将SARS冠状病毒结构蛋白表达质粒分别与其共转染以明确激活hfgl2基因转录的SARS冠状病毒结构蛋白.将目的片段克隆至pcDNA3.1(+),经酶切鉴定和测序鉴定无误;免疫组织化学染色可见明显的CHO细胞胞浆棕染.与hfgl2启动子共转染实验阐明SARS冠状病毒膜(M)蛋白和刺突糖(S2)蛋白对hfgl2基因的激活与对照组无显著差异,而SARS冠状病毒核心(N)蛋白可激活hfgl2启动子,使其转染活性提高4.6倍.SARS冠状病毒N蛋白可增强hfgl2基因的转录活性.     

致倦库蚊对登革Ⅱ型病毒的中肠感染屏障作用

为探讨致倦库蚊对登革Ⅱ型病毒的中肠感染屏障作用,通过病毒分离、逆转录聚合酶链反应、透射电镜等技术进行了相关研究。结果表明：吸食感染性血液后,登革Ⅱ型病毒能侵染白纹伊蚊中肠上皮细胞并大量复制,但不能侵染致倦库蚊中肠上皮细胞。以上研究证明致倦库蚊对登革Ⅱ型病毒存在中肠感染屏障。     

DBP对斜生栅藻及天然混合藻类致毒效应研究

作为塑料和橡胶等化工产品的增塑剂,邻苯二甲酸酯类化合物的生产量和使用量在我国和世界上均呈上升趋势,其在环境中的广泛存在及其所产生的行为效应已引起人们的高度重视。