绿色荧光蛋白标记的D-氨基酸氧化酶基因在人宫颈癌细胞中的表达研究

为了探讨绿色荧光蛋白标记的红色酵母D 氨基酸氧化酶 (DAAO)基因在人宫颈癌细胞 (HeLa细胞 )中的表达及其功能 ,采用基因重组技术构建了含有CMV启动子和EGFP、DAAO基因开放阅读框 (ORF)的真核表达载体 pIRES DAAO。脂质体法转染HeLa细胞 ,荧光显微镜下观察转染细胞中绿色荧光蛋白的表达 ,流式细胞术分析转染效率并筛选荧光阳性细胞 ,命名为HeLa D。以不同浓度的前药D Ala处理HeLa D细胞 ,MTT法检测细胞存活率。结果显示 ,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白在HeLa D细胞中表达 ,流式细胞术成功筛选出HeLa D细胞。前药D Ala能明显杀伤HeLa D细胞。结果表明 ,EGFP可作为报告基因快速筛选DAAO表达载体转染的细胞 ,DAAO/D Ala自杀基因系统可进一步用于肿瘤的基因治疗研究     

细胞“自杀”基因

细胞“自杀”基因李雨民,孙元明（中国医学科学院放射医学研究所,天津３００１９２）关键词自杀基因,程序性死亡象人寿有限一样,细胞也有它的自然死亡。细胞“自杀”并不是一件怪事而是健康机体的需要。在个体发育期间,这种机制清除了不需要的或是有害机体的组织细胞...     

CD/TK单、双自杀基因重组腺病毒的制备及初步应用

为制备表达大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶 (cytosinedeaminase ,CD)和单纯疱疹病毒 1 胸苷激酶(herpessimplexvirustype 1thymidinekinase ,TK)双自杀基因的重组腺病毒载体 ,为再狭窄基因治疗的应用奠定基础 ,首先构建了含单、双自杀基因的腺病毒穿梭载体 ,细菌内同源重组法获得重组腺病毒质粒 .脂质体介导下转染 2 93细胞进行包装并大量扩增得到Ad TK、Ad CD、Ad TK CD、Ad LacZ 4种重组腺病毒 .氯化铯 (CsCl)梯度离心法纯化后利用报告基因绿色荧光蛋白 (GFP)测定病毒滴度 ,可达 10 9pfu ml .PCR和Western印迹法对外源基因进行鉴定 ,证明单、双自杀基因均已整合入腺病毒基因组并表达 .重组腺病毒感染血管平滑肌细胞后 ,用MTT法比较了单、双自杀基因的杀伤作用 ,发现在感染复数≤ 2 0时 ,双自杀基因对细胞的抑制作用明显高于单基因 .成功地构建腺病毒双自杀基因共表达载体 ,为进一步的体内外实验奠定了基础 .     

上海市高中生自杀态度及自杀意念水平研究

目的 了解上海市高中生对自杀态度的取向以及其自杀意念的水平,为提高青少年心理健康提供依据.方法 采用青少年生活事件量表、父母教养方式评价量表及Beck抑郁问卷,对上海市1 695名高中生进行调查,由学生自评后统一回收问卷并进行评分.结果 41.18％的学生轻度抑郁,19.17％的学生中度抑郁,13.75％的学生重度抑郁,不同性别和地区的抑郁程度差异无统计学意义.在自杀意念影响因素中,青少年生活事件总应激量、母亲的惩罚严厉、父亲的过度保护均为危险因素,0R值分别为1.10,1.08,1.12;而家庭的情感温暖,学习成绩好是保护因素,0R值分别为0.94和1.38.结论 应采用综合性措施从个人、学校和家庭三方面共同努力,提高青少年心理健康水平.     

老年抑郁症患者自杀意念与生活事件、家庭功能及多导睡眠图参数的关系研究

摘要 目的：研究老年抑郁症患者自杀意念与生活事件、家庭功能及多导睡眠图参数的关系并予以分析。方法：选取从2019年1月～2020年10月期间我院收治的154例老年抑郁症患者纳入研究。将其按照是否存在自杀意念分作自杀意念组83例和无自杀意念组71例。比较分析两组生活事件、家庭功能及多导睡眠图参数等方面的差异,并以Spearman相关性分析明确老年抑郁症患者自杀意念与生活事件、家庭功能及多导睡眠图参数的关系。结果：自杀意念组正性事件、负性事件评分均高于无自杀意念组（均P＜0.05）。自杀意念组各项家庭功能评分均高于无自杀意念组（均P＜0.05）。自杀意念组N3期非快速眼动睡眠时间以及N3期非快速眼动睡眠占比均低于无自杀意念组（均P＜0.05）。经Spearman相关性分析可得,老年抑郁症患者自杀意念与各项生活事件评分、家庭功能评分均呈正相关,而与N3期非快速眼动睡眠时间以及N3期非快速眼动睡眠占比呈负相关（均P＜0.05）。结论：老年抑郁症自杀意念与生活事件、家庭功能及多导睡眠图参数密切相关,临床可通过对这些方面的观测来评估老年抑郁症的病情,以预防和减少老年抑郁症患者自杀行为的发生。     

选择性复制型腺病毒介导的自杀基因HSV -tk 在 肿瘤基因治疗中的应用

自杀基因治疗是肿瘤基因治疗的手段之一,治疗效果与自杀基因能否被高效、选择性的导入肿瘤细胞有关。肿瘤选择性复制型腺病毒（conditionally replication adenovirus,CRADs）可以特异性的在肿瘤细胞中复制,在复制的同时所携带的治疗基因也大量表达。由CRAds介导的自杀基因,实现了对肿瘤的病毒治疗和基因治疗的结合,提高了治疗效率和使用复制型腺病毒的安全性。     

CD真核表达载C 体的构建及在 2KHE39 细胞中的表达

目的：构建含自杀基因胞嘧啶脱氨酶（CD）的真核表达载体pcDNA3．1／HA—myc-His（-）Z—CD,并进行哺乳动物细胞HEK293转染研究。方法：以本实验室保存的含CD基因全长的质粒为模版,用PcR方法扩增CD基因阅读框序列,并定向克隆到带有HAtag的pcDNA3．1／HA—myc-His（-）Z载体上,使目的基因与HAtag在同一阅读框。重组体质粒经EcoRI和BamHI双酶切鉴定,并对插入的CD基因片段进行测序,将鉴定好的阳性重组质粒pcDNA3．1／HA—myc-His（-）Z—CD用脂质体介导转染HEK293,提取细胞蛋白,western blot检测CD基因的表达情况.结果：阳性重组质粒pcDNA3．1／HA—myc-His（-）ZCD经Eco砌和BanHI双酶切后,获得约为5．5kb片段和1．3kb插入片段,序列分析表明插入的片段与GenBank发布的序列一致．western blot检测到CD基因的表达。结论：成功构建了含自杀基因CD的真核表达质粒。     

细菌黑社会之以和为贵

越来越多的数据表明，用战争来比喻病原体与宿主之间的对抗并不贴切，病原体利用卧底渗透、建立掩护机构和逼迫自杀的手段来进行黑手党般的隐秘破坏。     

基因工程技术在建立噬菌体抗性机制研究中的应用

在自然发生的噬菌体抗性机制的基础上,应用基因工程技术可以建立广泛的噬菌体抗性机制,为有效解决噬菌体感染问题提供了新的策略。噬菌体编码的抗性、反义RNA技术、自杀陷阱及限制/修饰系统的应用是近年来发展起来的几种抗噬菌体策略,着重对其作用机制、研究进展及其意义作一介绍。同时指出应用基因工程技术构建的噬菌体抗性菌株应用于食品发酵工业中所存在的问题,并对其应用前景作了展望。