pilO基因对鲍曼不动杆菌运动能力的影响

目的:构建无标记的鲍曼不动杆菌pil O基因缺失突变株,通过表型鉴定pil O基因缺失对鲍曼不动杆菌运动能力的影响。方法:PCR扩增pil O基因上下游各1 kb同源臂,连接至p MO130-TelR自杀质粒,质粒转化大肠杆菌S17-1后再接合至鲍曼不动杆菌4294中;蔗糖诱导自杀质粒与基因组同源重组,以获得基因缺失突变株;蹭行实验观察pil O基因缺失对鲍曼不动杆菌运动能力的影响。结果:构建了pil O基因缺失鲍曼不动杆菌4294菌株突变株;缺失株与野生株生长曲线无明显差异,但蹭行能力显著下降。结论:pil O基因与细菌蹭行能力密切相关,提示其编码鲍曼不动杆菌Ⅳ型菌毛结构蛋白。     

四环素抗性重组鼠李糖乳杆菌的构建

将含有鼠李糖乳杆菌同源序列的自杀质粒pUC-ldhD-Ter转化到鼠李糖乳杆菌JCM 1553中,成功获得2株含四环素抗性的重组鼠李糖乳杆菌GL-1和GL-2。采用PCR技术鉴定重组菌株染色体基因组上含有四环素抗性基因Ter;生长曲线说明四环素抗性基因的插入对鼠李糖乳杆菌的生长没有较大影响。抗性菌株GL-1和GL-2在含10%葡萄糖的摇瓶发酵培养基发酵结果显示:37℃,200 r/min发酵40h,菌体密度OD₆₀₀最大达到25.49和24.66,残糖含量为0.60%和0.63%,L-乳酸最高产量为93.956 g/L、93.693 g/L,葡萄糖转化率达到94.82%、94.56%,与原始菌株没有显著区别。     

180 例自杀死亡者自杀方式及其自杀环境的法医学回顾性研究

目的:调查自杀死亡者对自杀方式和自杀环境的选择是否因性别、年龄和社会经济阶层的不同而存在差异性。方法:运用自编调查表,调查了昆明市公安局及其四个分区(五华区、西山区、盘龙区、官渡区)公安局2008年1月至2010年10月备案登记的180例自杀案例,将这些案例分为三组:性别组、年龄组和社会经济阶层组,分组后采用SPSS11.5统计学软件进行检验分析。结果:不同性别和不同社会经济阶层对自杀方式的选择不存在显著性差异;不同年龄段对自杀方式的选择存在显著性差异;不同性别和不同年龄段对自杀环境的选择存在显著性差异,不同社会经济阶层对自杀环境的选择不存在显著性差异。结论:自杀事件是一种复杂的社会现象,虽然它的发生受到众多复杂因素的影响,但不同的自杀人群对自杀方式和自杀环境的选择存在一定的特殊性,法医学工作者在实际工作中,对自杀死亡事件的鉴定需要扎实的理论知识和丰富的工作经验。     

150例服毒自杀原因分析及护理对策初探

3年来我科收治 1 5 0例服毒自杀病人 ,现分析其自杀原因 ,并对护理对策进行探讨。1　临床资料　　以本院 1 999年以来 ,内科收住院救治的 1 5 0例服毒自杀病人为调查对象 ,采取一般情况调查及半标准化会谈的方式进行随机调查 ,即按照预先准备好的问题 ,不论其顺序前后 ,先交谈后提出问题 ,统一记录。2　结果　　 1 5 0例服毒自杀患者中男性占 44.7% ,女性占5 5 .3% ,年龄为 1 5～ 5 1岁 ,平均 2 5岁。其中农民占 5 6% ,工人占 2 2 % ,学生占 1 6% ,其他为 6%。自杀原因 :家庭纠纷占 5 0 .7% ,人际关系失调占2 0 .7% ,婚姻恋爱受挫为 1 8% ,…     

新型纳米转染试剂转染PNP自杀基因体外杀伤实验

将壳聚糖纳米粒包裹的报告基因pEGFP-N1质粒转染至HEK293细胞,并在HEK293细胞中成功表达荧光蛋白的基础上,进一步将本室自行构建的PNP基因的真核高效表达载体质粒pcDNA3-PNP转染至HEK293细胞。转染72h后,对转染的HEK293细胞给予前体药6-MPDR至终浓度40μg/ml,一天后,采用MTT比色法测定药物对细胞增值的影响,并进行统计学处理。实验结果表明采用壳聚糖纳米粒转染试剂转染并给予前体药6-MPDR的实验组活细胞数,与用壳聚糖转染但不给前体药6-MPDR的对照组活细胞数相比,有显著差异(P<0.05),说明新筛选出的壳聚糖纳米粒转染试剂可以将PNP自杀基因递送至靶细胞中,并在细胞中进行表达,从而使PNP/6-MPDR自杀基因系统发挥杀伤细胞的作用。分别采用相同工作浓度的脂质体与壳聚糖纳米粒转染试剂转染相同浓度的基因质粒,壳聚糖纳米粒对靶细胞生长数量影响很小,说明的壳聚糖纳米粒细胞毒性大大低于阳离子脂质体的细胞毒性。     

磷酸钙纳米介导自杀基因载体的构建及其应用研究

构建由CEA启动子、CMV增强子驱动的融合自杀基因PCDNA3.1(-)CVyCDglyTK表达载体和分别由CEA启动子和巨细胞病毒(CMV)增强子驱动的融合自杀基因PCDNA3.1(-)CEAyCDglyTK、PCDNA3.1(-)CMVyCDglyTK表达栽体.以磷酸钙纳米为载体分别转染CEA阳性的人结肠癌细胞株LOVO细胞和CEA阴性的HeLa细胞,Lovo细胞在感染以上3种质粒表达栽体后均有yCDglyTK mRNA表达,且对5-FC的敏感性明显增强:HeLa细胞在纳米PCDNA3.1(-)CMVyCDglyTK复合物感染后有yCDglyTK mRNA表达,对5-FC的敏感性增强,而在另外两种复合物感染后则没有yCDglyTK mRNA表达,5-Fc对其亦无杀伤作用,结果表明靶向性基因治疗栽体能使融合自杀基因在CEA阳性细胞中专一性表达,达到靶向治疗肿瘤的目的.     

血清血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子水平变化对服药自杀青少年心理状况的影响

摘要 目的：研究服药自杀青少年血清血管内皮细胞生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）变化,及其与患者心理状况的相关性。方法：纳入2018年1月到2020年12月四川大学华西医院收治的服药自杀青少年81例（研究组）,同时纳入81例健康志愿者作为对照（对照组）。检测两组研究对象血清VEGF和bFGF水平,并使用汉密顿抑郁量表（HAMD）、抑郁自评量表（SDS）和自杀意念自评量表（SlOSS）评估两组患者心理状态。结果：两组研究对象性别、年龄、身高以及体质指数（BMI）具有可比性（P>0.05）;研究组吸烟者比例（16/81）和有家族精神病史比例（13/81）均显著高于对照组（6/81和3/81）（P<0.05）。研究组服药自杀青少年血清VEGF（699.72±103.42）ng/mL和bFGF（348.31±65.13）ng/mL水平均高于与对照组健康志愿者[（620.31±85.32）ng/mL和（265.37±35.23）ng/mL]（P<0.05）,并且与是否吸烟或有无家族精神疾病史无关（P<0.05）。Pearson相关性分析结果显示：服药自杀青少年血清VEGF和BFGF均与HAMD和SDS评分无相关,与SIOSS评分均呈正相关（r=0.278和r=0.302,均P<0.05）。结论：服药自杀青少年血清VEGF和bFGF水平升高,与自杀意念自评量表得分有正相关。     

应激与自杀、睡眠障碍的关系

自杀是复杂且致死率高的重要公共健康问题,应激和睡眠障碍均为自杀的重要风险因素,且三者之间具有密切的关联。由于应激和睡眠障碍具有可改变性,了解应激、睡眠和自杀的关系及其生理机制,有助于了解自杀的病理基础,探寻识别和干预自杀的关键靶点,促进对自杀的预防和干预。本文介绍有关应激、自杀、睡眠关联的最新研究结果,分别从 HPA轴功能、多胺应激反应系统等神经生理基础,以及基因、表观遗传修饰等遗传学的角度探讨三者关联的生理机制,探索该领域的研究挑战及未来的研究方向。     

HSV-tk/GCV自杀基因系统与重组TNF联合杀伤肿瘤细胞的光学成像检测

目的:应用光学成像方法检测HSV-tk/GCV自杀基因系统与重组改造的人肿瘤坏死因子(recombinanthuman tumor necrosis factor,rmhTNF)的联合使用,对人涎腺腺样囊性癌细胞(adenoid cystic carcinoma,ACC-M)的杀伤效率。方法:实验分为四组,细胞模型对照组、单纯HSV-tk/GCV自杀基因系统治疗组、rmhTNF处理组、自杀基因联合rmhTNF治疗组。将稳定表达胸苷激酶-绿色荧光蛋白(thymidine kinase-green fluorescen protenin,tk-GFP)的ACC-M细胞(ACC-M-tk-GFP)按5 000个/孔接种到96孔板中,24 h后给药治疗;分别于加药前、给药后6 h、给药后24 h进行荧光成像。检测绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的荧光用于准确显示胸苷激酶(tk)基因表达的肿瘤细胞,检测碘化丙啶(propidium iodide,PI)的荧光用于显示死亡的肿瘤细胞。通过细胞的透射图及其PI和GFP荧光图像,分别计算tk 细胞和tk-细胞的死亡率。结果:HSV-tk/GCV自杀基因系统与rmhTNF联合治疗组的细胞在加药后6 h就已经出现细胞死亡迹象,而单纯HSV-tk/GCV自杀基因系统治疗组的细胞在加更昔洛韦(ganciclovir,GCV)后24 h才出现细胞死亡,单纯rmhTNF治疗组在加药后24 h还没有细胞死亡发生。对于给药后24 h的tk 细胞死亡率,联合治疗组(85.88%)明显高于GCV(38.13%)和rmhTNF单独治疗组(2.97%),并且联合治疗组给药24 h后会引发部分tk-细胞死亡(9.83%)。结论:HSV-tk/GCV自杀基因系统与rmhTNF联合治疗具有显著的协同抗肿瘤效应,能够明显提高对肿瘤细胞的杀伤率;结合光学成像方法,能为更直观方便地检测各组药物分别对tk 细胞和tk-细胞的杀伤率,可为深入研究"旁观者效应"提供参考。     

猪霍乱沙门氏菌C500株△crp△asd缺失株平衡致死载体系统的构建及鉴定

猪霍乱沙门氏菌C500株是用化学方法致弱、用于预防仔猪副伤寒的弱毒疫苗株,虽具有较好的免疫原性,但仍有一定的残余毒力。为了研制更加安全并保持C500株良好免疫原性的弱毒株,及将C500开发为适于粘膜免疫的疫苗活载体,本文构建了猪霍乱沙门氏菌C500株△crp△asd双缺失株平衡致死载体系统。首先构建含缺失320bp的crp（cAMP受体蛋白）基因与蔗糖敏感基因（sacB）的重组自杀性质粒,与C500接合转移,两步法筛选无抗性的△crp缺失株,用PCR证实基因组crp基因的缺失突变。用同样方法在crp缺失株基础上构建asd（天冬氨酸β-半乳糖脱氢酶）基因缺失株。该缺失株生长必需外源DAP（二氨基庚二酸）。进一步鉴定△crp缺失株的表型、生长特性、毒力等,结果表明△crp△asd缺失株构建成功。△crp△asd缺失株可以用来作为宿主载体平衡致死系统来高效表达外源基因,为深入研究以C500株为载体的口服多价疫苗奠定了基础。