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31.
利用两种不相容质粒在大肠杆菌中共表达DFF45和DFF40 总被引:1,自引:0,他引:1
DNA断裂因子(DNA fragmentation factor,DFF)是细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白质之一,它由分子量为45kD和40kD的两个亚基构成,分别称为DFF45和DFF40。利用RT-PCR技术从人宫颈癌细胞系HeLa的总RNA中扩增了DFF45和DFF40的cDNA,分别克隆到到卡那霉素抗性表达载体pET-28a( )中,构建了pET28a-DFF45和pET28a-DFF40。用它们单独转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导都可获得高效表达。表达的重组蛋白质各自约占菌体总蛋白质的56%和22%。再将DFF45的cDNA克隆到氨苄青霉素抗性表达载体pET-21a( )中,得到了pET21a-DFF45。利用二者的不同抗性,将pET28a-DFF40和pET21a-DFF45共同转化大肠杆菌BL21(DE3),工程菌经IPTG诱导后实现了DFF45和DFF40的共表达,表达产物各约占菌体总蛋白质的30%和17%。为了研究这两种不相容质粒在细菌中共存的稳定性,我们将共转化子在同时含有卡那霉素和氨苄青霉素的液体培养基中连续培养14h,发现此时仍有75%以上的细菌可同时耐受两种抗生素,即同时含有pET28a-DFF45和pET28a-DFF40,说明利用两个具有不同抗性的不相容载体进行蛋白质共表达的方法是可行的。 相似文献
32.
用不同剂量的60Co-γ射线诱变钝顶螺旋藻Spirulinaplatensis出发株(Sp)IS-90010,筛选获得两株抗高光抑制突变株(Sp)AIp-90010和(Sp)AIp-90011,然后比较出发株和突变株的一般形态和生理生化特性。出发株和突变株的一般形态有较大的差异,与出发株相比,两个突变株藻丝体显著变短,螺旋数目大大减小。出发株是对高光敏感的品系,而突变株表现明显的抗高光抑制,13000lx光强下出发株和两个突变株的代时分别为29.4、20.8和22.2h。(Sp)AIp-90011的光合作用和呼吸作用与出发株相似,而(Sp)AIp-90010明显地表现出高光合、低呼吸作用。突变株和出发株都属于中温品系,最适温度为28℃,具有较广的温度适应范围(23~35℃)以及相同的耐盐性,但突变株的生长速率比出发株快、代时短。此外三者的蛋白质含量、氨基酸组成差别不大:(Sp)AIp-90011的可溶性多糖比出发株减少40%。而在(Sp)AIp-90010中其含量提高60%。 相似文献
34.
35.
降解三硝基甲苯的酵母和类酵母菌的研究 总被引:9,自引:0,他引:9
从受三硝基甲苯(TNT)严重污染的土壤和废水中分离筛选到17株可降解TNT的酵母菌和白地霉。其中6株为克鲁斯假丝酵母(Candidakrusei),4株为橡树假丝酵母(C.quercitrusa),一株为无名假丝酵母(C.famata),一株为伯杰汉逊酵母(Hansenulabeijerinckii),一株为亚膜汉逊酵母(H.subpelliculosa),4株为白地霉(Geotrichumcandidum)。对其中6株菌进行了降解TNT的条件实验,发现降解TNT的适宜pH为7,温度为37~40℃。在含75~80mg/LTNT的培养基中,40h内能降解TNT56~74mg/L,去除率达71%~93%。在培养基中加入0.01%~0.05%的葡萄糖作碳源,或加入0.01%~0.1%的酵母膏对6株菌降解TNT的能力略有促进作用。加入铵盐作为氮源则明显抑制这些菌对TNT的降解。 相似文献
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37.
本文描述了云南省突颚反颚茧蜂属HeratemisWalker1新种─—缺刺反颚茧蜂H.enndisWuetChen,并建立了该属中国已知3种的分种检索表。新种模式标本保存于福建农业大学益虫室。 相似文献
38.
目的:探究鱼皮低聚肽(FOPs)对酒精损伤小鼠肝功能及糖脂代谢的影响。方法:将60只KM小鼠作为研究对象分为空白组(蒸馏水)、模型组(蒸馏水)、阳性组(水飞蓟素,200 mg/kg BW)、FOPs组(250、500、1 000 mg/kg BW)。实验第33天灌胃制ALD模型。对小鼠各相关联指标(肝功能、血糖、血脂和氧化)的含量和活性进行检测,并量化分析肝组织的脂滴情况进行。结果:FOPs氨基酸的成分组成甘氨酸(Gly)含量最高,其中90.61%均为低于1 000 U的小肽;FOPs各剂量组小鼠血清的肝功能指标AST、ALT活力和血脂TG、TC含量显著降低(P<0.05),250、500 mg/kg BW FOPs的TC含量略低于阳性组;FOPs 各剂量组与模型组比较,肝脏合成蛋白指标TP、ALB含量随浓度的增加而升高,FOPs(250、1 000 mg/kg BW)组血糖GLU含量则明显增高(P<0.05);250、1 000 mg/kg BW剂量组肝组织过氧化指标MDA含量显著降低(P<0.05),FOPs各剂量组肝组织抗氧化指标GSH活性明显增高,甚至优于空白组,与模型组相比差异显著(P<0.05)。小鼠肝组织油红O染色表明,FOPs缓解小鼠急性酒精肝细胞损伤的脂肪病变程度显著(P<0.05)。结论:FOPs在急性乙醇小鼠的肝功能损伤和糖脂代谢方面方面具有良好的保护功能。 相似文献
39.
40.
炎症细胞诱导的活性氧类生成和肠道氧化应激与慢性炎症性肠疾病以及结直肠肿瘤的发病密切相关。NF-κB信号通路参与氧化应激反应以及在结直肠炎症和肿瘤发生中的作用还并不完全清楚。本研究将化学合成一对编码小干扰RNA 序列、靶向人NF-κB 基因的长60 bp寡核苷酸链定向克隆至pSUPER小干扰RNA表达载体中,通过单酶切、双酶切及测序证实重组RNA干扰载体构建成功. 将构建成功的质粒转染至结肠上皮细胞HCT116中敲减p65,分别采用Western blot方法检测NF-κB p65蛋白表达水平,(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-3,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)方法检测细胞存活情况. 结果显示,pSUPER-NF-κB p65载体可特异性下调NF-κB p65蛋白表达;下调p65表达可导致过氧化氢诱导的HCT116内活性氧类物质生成增高,存活细胞数目显著减少,氧化损伤加重。研究表明,在人结肠上皮细胞内NF-κB p65通路的抑制显著加重了结肠上皮细胞氧化损伤情况. 相似文献