多聚半乳糖醛酸内切酶的固定化及其性质研究

棉花枯萎病菌多聚半乳糖醛酸内切酶在pH大于7时不稳定,故对它进行多种化学修饰而又不影响其活性,必须在pHd小于7的体系中进行。本文报道将PGAUase在还原剂存在下,与稀酸处理的Sepharose 4B交联,获得较高活力的固定化酶。固定化酶催化动力学表明,最适pH为4,4,最适温度为55℃,在pH1至8.0范围内稳定。和溶液酶比较,对热稳定性提高,但对碱稳定性下降。以多聚半乳糖醛酸为底物,Km为0.27mmol/L,Vmax为66.67nmol/L·min,均大于溶液酶(Km=0.07mmol/L,Vmax=28.00nmol/L·min)。在pH4.8,30℃,聚半乳糖醛酸在固相酶的柱中循环水解不同的时间降解产物经圆盘电泳和等电聚焦测定,得到不同大小的寡糖片段混合物,证明固相酶和溶液酶的作用方式相同,同时使以酶解法制备一定大小的有生物活性的寡糖分子成为可能。     

硫酸铝钾对小鼠肝损害的实验研究

本文主要观察硫酸铝钾——饮用水净化剂引致小鼠肝酶组化,超微结构和组织结构的变化。动物30只,分为正常组、硫酸铝钾大、小剂量组。实验结果:硫酸铝钾10mg/kg/日(大剂量组)与5mg/kg/日(小剂量组)动物用药10天、80天均可使肝SDH酶活性降低;肝细胞线粒体肿胀、嵴断裂和溶解。在光学显微镜下用药80天后大部分肝细胞肿胀,胞浆疏松淡染、肝小叶内可见呈小灶状分布的炎性细胞浸润,主要为淋巴细胞及浆细胞,门管区偶见少许炎性细胞,但肝小叶和门管区未见结缔组织增生。为此,硫酸铝钾作为净水剂,不宜用量过大。     

21科41种(变种)植物叶片几丁质酶系的研究

对广州地区常见的21科41种（变种）植物叶片几丁质酶系研究的结果表明,所有受试植物都具有几丁质酶活性。几丁质酶不仅存在于被子植物的双子叶植物和单子叶植物中,而且也存在于裸子植物及蕨类植物中。几丁质酶活性及比活性均较高的有蕹菜、葱、蕨类植物、蒜、茄科植物、玉米、菜豆、番木瓜等。植物一般都具有两种几丁质酶:外切酶和内切酶。几丁质外切酶活性及比活性均较高的有蕨类植物、葱、茄科植物等。几丁质内切酶活性及比活性均较高的有蕹菜、裸子植物等。不同植物几丁质外切酶与内切酶的比例相差较大。有些植物的几丁质酶系以外切酶为主,如茄科植物、大部分豆科植物、番木瓜等;有些植物以内切酶为主,如裸子植物、伞形科植物、蕹菜等;有些植物的外切酶与内切酶含量相差不大。     

体外冲击波碎石术对兔肝酶活性的影响

采用超微组织化学方法,观察了体外冲击波碎石术(ESWL)对家免肝脏酶活性的影响。实施 ESWL 后,肝细胞的琥珀酸脱氢酶(SDH)和毛细胆管壁上的碱性磷酸酶(ALP)、焦磷酸硫胺素酶(TPPase)反应活性减弱或消失。TPPase 从损伤的肝细胞高尔基体分泌面扁囊、溶酶体样小泡和毛细胆管内溢出,并伴有肝细胞面的质膜上出现了 TPPase 反应产物和形成膜包内凹小泡。结果提示 ESWL 可对肝细胞及毛细胆管的功能和结构有损伤作用。     

赤子爱胜蚯蚓(Eisenia Foetida)纤溶酶的研究,Ⅳ纤溶酶组成成分的分子量测定

本文报告了用SephadexG—100柱层析法纯化样品和聚丙烯酰胺凝胶电泳测定纤溶酶组成成分的分子量的研究结果。经柱层析分离的纤溶酶电泳测定分子量结果为11条带,分别为68,000、49,000、42,000、41,000、36,000、29,000、27,000、26,000、25,000、21,000和12,000。而纤溶酶的主要组分集中在21.000与42.000之间,为其活性组分。     

酶联板重复使用的初步研究

本实验用10种溶液处理仙人指×病毒(CVX)、齿兰环斑病毒(ORSV)、烟草花叶病毒(TMV)、烟草脆裂病毒(TRV)进行间接ELISA试验后的微板,其中以SDS处理效果较好,微板可重复使用1—3次,并基本保持原板检测病毒的灵敏度,无假阳性反应出现,底色上升也较缓慢。     

核酸去甲基酶AlkB在毕赤酵母中的表达纯化及在tRNA相关研究中的应用

[目的]核酸的甲基化修饰是一种常见的化学修饰形式,具有重要的生物学功能,却也在一定程度上给一些核酸研究过程带来了技术难度。tRNA上具有的大量甲基化修饰会阻碍逆转录进程,从而降低荧光定量PCR (real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和高通量测序对其的检测效率。来自大肠杆菌(Escherichia coli)的AlkB蛋白是一种多功能的脱烷基化酶,可以去除DNA和RNA上多种甲基化为代表的修饰,有望解决以上问题。[方法]针对大肠杆菌来源的AlkB,分别尝试在大肠杆菌和毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统中进行诱导表达和纯化,对纯化获得的AlkB进行酶学性质测定。最后以tRNA_UAU^Ile等两种tRNA为代表,研究AlkB的处理对于荧光定量PCR法检测tRNA表达水平的影响。[结果]AlkB在大肠杆菌中表达时多以包涵体形式存在,但是在毕赤酵母中可以成功分泌表达。使用镍柱分离纯化后获得了纯度高于95%的AlkB蛋白,其酶学性质参数如...     

用胰酶转肽的方法使人胰岛素原转成人胰岛素

猪胰岛素胰酶转肽成人胰岛素的相似条件下,基因工程生产的人胰岛素原可以50％的产率转成人胰岛素,所得人胰岛素的氨基酸组成与理论值相符,并具有天然活力。