沉默PRR14基因抑制结肠癌HCT116细胞增殖

已有报道显示,富脯氨酸蛋白 14（proline-rich protein 14,PRR14）促进肿瘤的发生发展,但具体作用机制仍不清楚。本文以结肠癌细胞为模型,探索其对细胞增殖和细胞周期进程的影响。qPCR和Western 印迹检测发现,PRR14在4个结肠癌细胞系中呈现高水平表达。合成特异靶向PRR14基因的siRNA,转染结肠癌HCT116细胞。检测发现,PRR14基因表达下调约70%。CCK8结果显示,沉默PRR14后各时间点细胞增殖能力均显著降低,克隆形成实验细胞克隆数减少约40%;流式细胞仪结果显示,沉默PRR14后,G1期细胞比例升高约10%,S期细胞比例降低约14%;BrdU标记免疫荧光检测结果显示,BrdU阳性细胞比例减少约50%,表明细胞DNA合成速率显著降低。机制分析表明：促G1/S期转换基因周期蛋白依赖性激酶2（cyclin dependent kinase 2, CDK2）mRNA水平降低约85%,对应的蛋白质水平也明显降低,G1/S期转换抑制因子周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A（cyclin dependent kinase inhibitor 1A,CDKN1A/P21）和周期蛋白依赖性激酶抑制因子1B（cyclin dependent kinase inhibitor 1B,CDKN1B/P27）mRNA水平分别升高约1.8倍和5倍,对应的蛋白质水平也明显升高。沉默PRR14表达,G1/S期相关基因表达紊乱,导致细胞G1期阻滞并抑制细胞增殖。结肠癌细胞中PRR14高表达可促进癌细胞恶性增殖。     

高粱苗(Sorghum vulgare)水分亏缺时所累积的游离脯氨酸的来源

在完全营养液中,用Glu或Ala替代Ca(NO_3)_2为氮源时,在水分胁迫条件下可得到同样程度的Pro累积量。但是用Ser为氮源时,在正常水分条件下Glu和Ala的相对含量较少,Ser和Gln相对含量较高,在水分胁迫条件下,Pro的累积受到抑制。在缺钾营养液中培养时,植株游离氨基酸中Glu和Ala相对量较少,Ser和Gln相对量较高,在水分胁迫条件下,Pro累积也受到抑制。在缺钾营养液中,用Glu或Ala替代Ca(NO_3)_2为氮源时,在水分胁迫条件下Pro的累积可达到甚至超过完全营养液中Pro的相对量。     

红豆草抗羟脯氨酸变异系原生质体培养后愈伤组织的抗性特征

通过NaN3诱变得到的红豆草抗羟脯氨酸（Hyp）变异系,在酶液中游离原生质体进行培养,获得再生植株。在含不同浓度NaCl、羟脯氨酸或PEG的MS培养基上,原生质体来源抗性意伤组织中的游离脯氨酸含量在1周之内均急剧增加,随后开始下降,3周后接近正常水平。随着胁迫程度的提高,抗性愈伤组织中游离脯氨酸含量呈递增趋势,生长速度呈递减趋势。     

自发性高血压大鼠中枢去甲肾上腺素与血管紧张素Ⅱ的含量及相互关系

用荧光分光与放射免疫法,分别测定自发性高血压大鼠(SHR)与正常血压 WKY:大鼠脑内不同部位的去甲肾上腺素(NE)与血管紧张素Ⅱ(AⅠ)的含量。用尾筒法测量清醒大鼠尾动脉压。结果发现第8周龄 SHR 的血压及延脑、脑桥、下丘脑与尾核 NE 与 A Ⅱ含量和同龄WKY 相比,无明显差异。第12周龄以后,SHR 的血压逐渐升高,至20周龄时不再升高,维持在接近16周龄时的水平。可是 WKY 的血压无明显变化。在血压升高的早期与后期SHR 延脑、脑桥、下丘脑及尾核内 AⅡ含量显著高于 WKY,但 NE 的含量变化却不同,在早期与 WKY 有明显差异,而在高血压的后期无明显差异。提示在 SHR 高血压的早期 NE与 A Ⅱ均起作用,而在后期只 A Ⅱ起作用。向 SHR 侧脑室分别注射 Captopril 与6-OHDA,均引起血压下降,延脑与下丘脑内 AⅡ与 NE 含量均下降,两者表现同向关系。SHR 脑内AⅡ与 NE 这种同向变化在高血压的发生中可能起重要作用。     

环己亚胺对盐诱导游离脯氨酸累积的影响

环己亚胺(CHX)单独作用会增加高梁苗中游离脯氨酸的含量,原因可能有:一是CHX抑制了根的正常吸收功能,导致植株失水,游离脯氨酸增加;二是CHX抑制了蛋白质合成,使总的游离氨基酸累积,从而也表现出游离脯氨酸含量的增加,后者可能更为主要。为此,用CHX研究与脯氨酸合成有关的基因活性化或表达时,一定要考虑CHX单独的作用。NaCl诱导的游离脯氨酸的累积可被CHX处理所抑制。在NaCl处理2～4h内加CHX后,抑制效果几乎可达到100％,以后随CHX处理的时间越长,其抑制作用越小。     

优质牧草旋扭山绿豆对低温胁迫的生理响应及其耐寒性快速鉴定

为了解旋扭山绿豆(Desmodium intortum)对低温的耐受性,以在南方各省广泛种植的优质牧草紫花大翼豆(Macroptilium atropurureum)为对照,研究了旋扭山绿豆对低温胁迫的生理响应。结果表明,低温胁迫(4℃)下,旋扭山绿豆的实际光能转化效率(Yield)和光合电子传递效率(ETR)在第2～8天时下降幅度显著低于紫花大翼豆(P0.05)。低温处理使旋扭山绿豆和紫花大翼豆超氧化物歧化酶(SOD)活性显著增加(P0.05);过氧化氢酶(CAT)活性则显著降低;旋扭山绿豆的过氧化物酶(POD)没有显著变化(P0.05),但紫花大翼豆下降了47.11%。低温处理下旋扭山绿豆游离脯氨酸和可溶性糖含量显著高于紫花大翼豆(P0.05)。回归分析、抵抗力指数和营养成分分析表明,旋扭山绿豆是一种抗寒性与营养价值均优于紫花大翼豆的优良牧草,其中Yield、ETR、CAT与渗透调节物质(游离脯氨酸和可溶性糖)可以作为旋扭山绿豆耐寒性鉴定的重要生理指标。     

盐胁迫对4个水稻种质抗逆性生理的影响

为筛选水稻(Oryza sativa)耐盐种质资源,研究了水稻耐盐相关生理指标。结果表明,盐胁迫下,耐盐种质Pokkali、Fl478、JX99的电导率较低,细胞膜透性较小,叶片叶绿素含量较高,受盐害程度较弱。盐胁迫促进了丙二醛的大量积累,加剧了细胞膜脂过氧化程度,而耐盐种质的丙二醛积累较少,但高盐胁迫下3个耐盐种质的丙二醛含量升高,破坏了细胞膜的完整性。感盐种质R29的临界饱和亏的增幅较大,耐盐种质相对含水量降幅小。应用模糊隶属函数法综合评价,4个水稻种质的耐盐性依次为JX99PokkaliFL478IR29。     

沉默PRR14基因抑制结肠癌HCT116细胞增殖

已有报道显示,富脯氨酸蛋白 14（proline-rich protein 14,PRR14）促进肿瘤的发生发展,但具体作用机制仍不清楚。本文以结肠癌细胞为模型,探索其对细胞增殖和细胞周期进程的影响。qPCR和Western 印迹检测发现,PRR14在4个结肠癌细胞系中呈现高水平表达。合成特异靶向PRR14基因的siRNA,转染结肠癌HCT116细胞。检测发现,PRR14基因表达下调约70%。CCK8结果显示,沉默PRR14后各时间点细胞增殖能力均显著降低,克隆形成实验细胞克隆数减少约40%;流式细胞仪结果显示,沉默PRR14后,G1期细胞比例升高约10%,S期细胞比例降低约14%;BrdU标记免疫荧光检测结果显示,BrdU阳性细胞比例减少约50%,表明细胞DNA合成速率显著降低。机制分析表明：促G1/S期转换基因周期蛋白依赖性激酶2（cyclin dependent kinase 2, CDK2）mRNA水平降低约85%,对应的蛋白质水平也明显降低,G1/S期转换抑制因子周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A（cyclin dependent kinase inhibitor 1A,CDKN1A/P21）和周期蛋白依赖性激酶抑制因子1B（cyclin dependent kinase inhibitor 1B,CDKN1B/P27）mRNA水平分别升高约1.8倍和5倍,对应的蛋白质水平也明显升高。沉默PRR14表达,G1/S期相关基因表达紊乱,导致细胞G1期阻滞并抑制细胞增殖。结肠癌细胞中PRR14高表达可促进癌细胞恶性增殖。