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171.
双裂解法提取血清HBV DNA技术的建立 总被引:1,自引:1,他引:0
为进行PCR实验建立了一种两步裂解血清HBV提取其DNA的方法。该法首先用SDS及蛋白酶消化裂解病毒,随后再进行碱裂解,操作较酚提取法大为简化,而PCR实验进行的两法的灵敏性比较,说明双裂解法至少不低于酚法。 相似文献
172.
等位酶分析的遗传学基础(续) 总被引:5,自引:1,他引:4
在等位酶分析中,对酶谱的正确解释是获取遗传学资料的基础,酶谱作为酶基因的表现型,是由该种酶蛋白质的四级结构情况(亚基的数目)、在亚细胞分室中的分布(位点的数目)以及所分析样品的倍性和基因型的情况所决定的。术语“酶型”被建议用来记录和描述各种情况下酶谱的不同。在进行分子系统学研究中,如果直接把酶谱上带的数目的多少作为遗传多样性大小的指标,或把带的多少及迁移率的大小作为数量性状进行聚类和分枝分析将会得出非常错误的结论。 相似文献
173.
国产硅藻土经氢氧化铵处理后可用于从发酰液中直接取青霉素G酰化酶,平均吸附量为90U/g。吸附的酶可用22%硫酸铵-0.3mol/LPBS(pH8.0)溶液洗脱。平均比18U/18Umg蛋白(NIPAB法)。硅藻土可反复使用。苯乙酰胺-Sepharose4B树脂可对酶作进一步的纯化。 相似文献
174.
菜心(BrassicacampestrisL.ssp.chinensisvar.utilis)叶子高速捣碎后,滤液经酸碱处理,硫酸铵分步沉淀,凝胶柱层析等步骤分离纯化溶菌酶,酶比活力达3414.6U/mg,纯化倍数为197.4。菜心溶菌酶在较宽的温度或pH值范围均有活性,最适温度为60℃,最适pH值为5.8,底物Km值为87μg/mL。该酶对热和酸碱的稳定性较高,巯基和酪氨酸残基不是该酶活性中心的必需基团。 相似文献
175.
臧宁 《中国生物化学与分子生物学报》1994,10(2):191-195
用大鼠肝脏门静脉或肝静脉周围的肝细胞来研究葡萄糖和酮体生成的区域分布。肝细胞通过毛地黄皂苷-胶原酶灌流技术分离。门静脉周围肝细胞的γ谷氨酰转肽酶的活性比肝静脉周围肝细胞高2.4倍;而谷氨酰胺合成酶的活性则相反,肝静脉周围肝细胞高出56倍。门静脉周围肝细胞的内源性葡萄糖合成比肝静脉周围肝细胞高1.57倍。给予刺激葡萄糖异生的底物,门静脉周围肝细胞的葡萄糖合成则增加1.7-2.1倍。肝静脉周围肝细胞的内源性酮体生成比门静脉周围肝细胞高1.3倍。给予能明显刺激酮体生成的辛酸盐,肝静脉周围肝细胞的酮体生成仅略为增加。我们的结果证实,在基础和刺激的条件下,葡萄糖的异生在门静脉周围肝细胞中优先,而酮体生成仅在肝静脉周围肝细胞占微弱的优势。 相似文献
176.
用RT-PCR方法快速克隆了Wistar大鼠脑神经元特异性烯醇化酶(NSE)的cDNA,将此包括编码全长NSE433个氨基醚的DNA片段重组入pUC质粒,并用PCR方法测定了全部顺序,经重复实验,发现Wistar大鼠与Forss-Petter报导的SD大鼠NSE基因顺序,有两外单碱基的差别,其中一个涉及氨基酸的改变。同时还对RNA的提取及长片段DNA的RT-PCR扩增进行了方法学的探讨。 相似文献
177.
178.
从土壤中分离到一株产碱菌(Alcaligenes sp)119.能将苯丙酮酸一步转化成L-苯内氨酸。酶反应的最适pH为8 5.该酶在pH8 9之间稳定.最适反应温度为37-15℃.金属离子Fe2+、Mn2+等对酶有不同程度的抑制作用,该菌株培养在由葡萄糖、蛋白胨,牛肉膏等组成的培养基中,可获得最高转化率L-天冬氨酸为酶反应的最佳氨基供体。当苯丙酮酸浓度为0.2mol/L时,细胞在37℃下反应16小时.可产L-苯内氨酸30.lg/L.其克分丁转化率为92.7% 采用离子交换树脂分离提纯产物.总收率在69%以上。产物经熔点、比旋光度、元素分析、红外光谱及纸上层析鉴定.证实是L-苯丙氨酸。 相似文献
179.
从海枣曲霉(Aspergillus phoenicis)麦麸培养物抽提液中。通过聚乙二醇6000-磷酸钾缓冲液双水相分离.相继用SephadexG-100凝胶过滤、DEAE—Sephadex A-50离子交换柱层析、羟基磷灰石吸附层析、DEAE-Sephadex A-50离子交换层析、SE—Sephadex C-50离子交换层析以及Sephadex G-50柱层析等提纯步骤,提纯到凝胶电泳均一的β-木糖苷酶。该酶的最适pH为3.5,最适温度为65 C.在pH3.5—6.5之间稳定,酶保温30分钟时的半失活温度(t1-2)为68C。酶的分子量勾95 000,等电点为4.4。Hg2-和Ag+对该酶有强烈的抑制作用。在所测定的底物中.Β-术糖苷酶仅对β-木精苷(pNP-β-Xyl)有强水解作用。其Km值为0.63mmol/L.Vmax为410 umol·min 1.Mg-1。D-木糖为β-木糖苷酶的竞争性抑制剂,其K.值为7.5mmol/L。 相似文献
180.