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941.
942.
目的建立一种动态检测活细胞内泛素-蛋白酶体系统活性的方法。方法将表达绿色荧光蛋白(GFP)或红色荧光蛋白(DsRed2)的质粒分别改建为表达带有内泛素-蛋白酶体系统降解信号CL1的GFP或DsRed2的pGFP^u或pDsRed2质粒,然后转染HEK293细胞,通过G418筛选得到稳定表达GFP^u或DsRed2^u的细胞系。在蛋白酶体抑制N—Acetyl—Leu-Leu—Norleu—al(ALLN)处理GFP^u或DsRed2^u细胞后,应用免疫印记技术检测细胞内GFP或DsRed,含量的变化,应用荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜技术观察GFP或DsRed,荧光强度的变化。结果ALLN处理能使GFP“和DsRed2^u细胞内GFP和DsRed。含量明显增加,荧光强度显著增强,并呈现明显的剂量/时间-效应关系。结论本文成功地建立了检测内泛素-蛋白酶体系统活性的方法,该方法能有效地对活细胞的内泛素-蛋白酶体系统活性进行实时动态检测。 相似文献
943.
钙信号途径参与小斑病菌致病过程的调控 总被引:6,自引:0,他引:6
为确定Ca^2+信号途径与玉米小斑病菌致病过程的相关性,用可从不同位点阻断Ca^2+信号转导途径的抑制剂分别处理小斑病菌的分生孢子,结果表明:Ca“螯合剂EGTA、Ca^2+通道抑制剂Verapamil、影响钙调素与钙调素依赖蛋白激酶作用位点的抑制剂KN-93,随着浓度的增加,对孢子萌发和附着胞形成过程的抑制作用明显增强;同一浓度下,抑制剂对附着胞形成过程的抑制作用大于孢子萌发过程;抑制剂可使附着胞形态明显变小甚至不能形成。以上结果表明钙信号途径参与了玉米小斑病菌主要致病过程的调控。 相似文献
944.
牛成纤维细胞的分离与体外培养 总被引:3,自引:0,他引:3
研究了牛胎儿和成年牛皮肤组织成纤维细胞的分离、培养、纯化方法和生长特征。通过组织块贴壁培养和分离单细胞接种培养均能获得原代牛皮肤细胞。用2.5 g/L胰蛋白酶+1mmol/L EDTA和5 g/L胶原酶I联合消化牛皮肤组织较2.5 g/L胰蛋白酶+1 mmol/L EDTA消化,得到更多的单个细胞,两者之间差异极显著(P<0.01),但其死细胞比率却有较大升高;2.5 g/L胰蛋白酶+1 mmol/L EDTA消化牛胎儿组织得到的单细胞数显著高于皮肤组织消化后得到的细胞数(P<0.01),死细胞比率也高于同种酶消化的皮肤组织。分离纯化的胎儿和皮肤成纤维细胞的生长曲线都正常且相似。2.5 g/L胰蛋白酶+1 mmol/L EDTA消化贴壁细胞后死细胞率明显高于用0.5g/L胰蛋白酶+0.53 mmol/L EDTA消化的细胞(P<0.05);培养24 h后细胞贴壁率前者要明显低于后者(P<0.05)。用0.5 g/L胰蛋白酶轻度消化混杂生长的成纤维细胞和上皮样细胞,经过反复贴壁传代2~3代,可得到较纯的成纤维细胞。 相似文献
945.
946.
探讨蛋白酶体抑制剂MG132 在诱导人白血病K562细胞凋亡过程中作用.分别以不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG132 处理人白血病细胞K562,通过MTT法检测K562细胞活力,应用Annexin Ⅴ和PI 双染的细胞流式法检测K562细胞凋亡率和细胞内活性氧(ROS) 水平,应用酶标仪法检测K562细胞内Caspase- 3活性变化的情况.结果表明,随着MG132浓度的增加,各个指标与对照组比较差异均有显著性(P<0.05):K562细胞增殖明显受到抑制;细胞凋亡率明显增加,且当MG132浓度为900 nmol/L时,细胞凋亡率达36.5 %;同时,ROS 水平和caspase- 3活性明显升高.因次,蛋白酶体抑制剂MG132可显著抑制人白血病细胞K562增殖并促进其凋亡. 相似文献
947.
摘要 目的:探究地舒单抗联合免疫检查点抑制剂治疗实体瘤骨转移临床疗效及安全性。方法:选择2020年7月~2022年11月南通市肿瘤医院收治的60例实体瘤骨转移患者为本次研究对象,分为两组:观察组,n=18,对照组,n=42。对照组开展伊班膦酸+替雷利珠单抗治疗,观察组开展替雷利珠单抗+地舒单抗治疗。比较治疗效果、骨密度水平、骨相关事件、相关指标及安全性。结果:观察组治疗控制率为82.86 %,对照组治疗控制率为54.76 %,观察组更高(P<0.05);治疗前,观察组及对照组的右足SOS变化比较无差异(P>0.05),治疗后,与治疗前相比,观察组及对照组均升高,且观察组更高(P<0.05);观察组骨相关事件发生率为22.22 %,对照组为50.00 %,观察组发生率更低(P<0.05);治疗前,匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)、焦虑及抑郁自评表(SAS)、(SDS)、日常生活能力评价表(ADL)评分,观察组及对照组比较无差异(P>0.05),治疗后,与治疗前比较,观察组及对照组各指标水平均降低,且观察组更低(P<0.05);观察组不良反应率为44.44 %,对照组不良反应率为52.38 %,观察组及对照组比较(P>0.05)。结论:地舒单抗联合免疫检查点抑制剂治疗可有效提升实体瘤骨转移的治疗效果,提升骨密度,降低骨不良事件风险,改善患者心理及生理指标,促进日常生活能力的有效提升,且安全性较高。 相似文献
948.
NLRP3炎症小体广泛存在于肝实质和非实质细胞中,它可以感知和识别各种外源性和内源性危险信号,进而促进炎症介质的释放,触发免疫反应与细胞焦亡。近年来,随着对NLRP3炎症小体认识的逐步深入,其异常激活被认为与慢性肝病及肝损伤的发生、发展密切相关。因此,NLRP3炎症小体被认为是相关肝脏疾病治疗的一个重要分子靶点。本文主要讨论了NLRP3炎症小体的调控机制及其在酒精性肝病、非酒精性肝病、肝纤维化、药物性肝损伤中的相关研究进展,并总结了NLRP3炎症小体相关靶点抑制剂在慢性肝病及肝损伤中的应用,从而为NLRP3炎症小体在慢性肝病及肝损伤中的相关研究和新药开发提供理论依据和参考。 相似文献
949.
950.
纯化了工程细菌表达的可溶态和包含体形式的rhPAI-1,纯度均达98%,其rhPAI-1蛋白质得率分别为15%和19%,比活性分别为33500IU/mg和277000IU/mg。N端氨基酸序列分析显示,rhPAI-1N端15个氨基酸与天然PAI-1完全一致;包含体复性研究表明,包含体的复性与复性蛋白的浓度及复性液中助溶剂的浓度密切相关。纯化的rhPAI-1为分析PAI-1结构与功能及探讨其临床应用提供了材料。 相似文献