周期应变对动脉平滑肌细胞分泌血管紧张素II的影响

应用自行设计的硅胶膜伸张加载装置对培养硅胶膜上的Ｗｉｓｔａｒ大鼠主动脉平滑肌细胞施以周期性二维伸张应变,运用放射免疫沉淀法对其Ａｇ１１的分泌量进行测定,结果表明：加载组血管紧张素Ⅱ分泌量明显高于对照组,对照组分泌曲线较平坦,而加载组曲线较尖锐;加载４ｈ,ＡｇⅡ分泌量达到峰值。     

传出神经系统药物对小鼠离体十二指肠平滑肌运动的影响

目的通过体外小鼠离体十二指肠平滑肌的试验,观察五种传出神经系统药物对其收缩功能的作用。方法将小鼠离体十二指肠平滑肌置于模拟内环境中,采用BL-420生物机能系统观察模拟的内环境因素发生变化时,离体十二指肠平滑肌运动的变化,当分别加入几种传出神经系统药物后,平滑肌的收缩运动是否会受到不同程度的影响。结果肾上腺素、阿托品可使平滑肌收缩活动减小,抑制平滑肌的收缩力;水杨酸毒扁豆碱、毛果芸香碱、乙酰胆碱使平滑肌收缩活动加大,可加强平滑肌的收缩力。结论传出神经系统药物影响小鼠离体十二指肠平滑肌运动。     

胰岛素样生长因子-1对血管平滑肌细胞PI3K/PTEN信号通路的影响

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)促血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的细胞内信号转导机制.方法:体外培养的兔血管平滑肌细胞分3组处理,以细胞计数、噻唑盐比色法测定细胞增殖能力,以磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)特异性抑制剂渥漫青霉素(WT)孵育细胞间接反映PI3K作用.Western Blot定量磷酸酶PTEN表达水平,免疫沉淀、特异底物diC16PIP3绿色试剂法测定PTEN脂质磷酸酶活性.结果:IGF-1(100 μg/L)使细胞计数及MTT 比色A值分别增加至对照组的2.8倍和3.8倍,WT抑制VSMC增殖,并完全逆转IGF-1的作用(均P<0.01).各浓度IGF-1对PTEN蛋白表达水平无明显影响,其对PTEN活性的抑制呈浓度(10～100 μg/L)及时间(3 min～24 h)依赖性(均P<0.01).结论:IGF-1促VSMC增殖作用与活化PI3K蛋白激酶的促生长活性及抑制PTEN脂质磷酸酶的负性调节细胞生长作用有关.     

高血压相关基因hrg-1在血管平滑肌细胞再分化过程中的表达及功能

研究高血压相关基因hrg 1表达与血管平滑肌细胞 (VSMC)再分化的关系及其在细胞生物学行为调节方面的作用 .采用血清饥饿培养和全反式维甲酸诱导使处于增殖状态的去分化型VSMC再分化 ,观察细胞再分化过程中HRG 1表达变化 ,并探讨其功能 .在血清饥饿和维甲酸诱导VSMC再分化过程中 ,hrg 1基因表达显著上调 ,其表达活性在诱导 2 4h达高峰之后 ,一直维持在较高水平上 ,且其表达量和变化规律与细胞收缩蛋白SMα肌动蛋白和SM2 2α相类似 .免疫共沉淀和免疫双荧光染色结果证实 ,HRG 1抗体可与SMα肌动蛋白共沉淀 ,且两者在同一细胞共定位 .用HRG 1表达质粒转染去分化型VSMC可显著抑制其迁移能力 .结果提示 ,HRG 1在胞质中以与SMα肌动蛋白相互缔合的方式存在 ,其表达与VSMC分化有关 ,该蛋白通过参与细胞骨架构成而调节VSMC收缩与迁移     

miRNAs对血管平滑肌细胞功能的调节与心血管疾病

miRNA(miRNAs)是一类长约18～24个核苷酸的高度保守性的小分子非编码RNA,主要通过与特异性靶基因mRNA 3’-UTR区结合来调控基因的表达。miRNAs与细胞增殖、分化、凋亡、胚胎发育、组织器官等形成以及多种疾病的发生发展密切相关。新近研究显示,miRNAs对血管心血管平滑肌细胞功能及心血管疾病的发生发展起着重要的调节作用。本文就miRNAs对血管平滑肌细胞功能的调节及心血管疾病的病理生理学意义作一概述。     

bFGF／FGFR1信号传递与心血管疾病关系的研究进展

碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)作为一种强的血管源性生长因子与心血管疾病的发生,发展有着密切的关系,介绍了bFGF/FGFR1的信号传递及其与心血管疾病的关系和在心肌缺血和增生性疾病中的治疗作用。     

外源性CO对大鼠肺动脉平滑肌细胞迁移的影响

目的 :探讨外源性CO对大鼠肺动脉平滑肌细胞迁移的影响。方法 :体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞 ,用外源性CO处理 2 4h、48h、72h ,检测平滑肌细胞迁移情况。结果 :2 4h、48h、和 72h后未处理的对照组大鼠肺动脉平滑肌细胞迁移距离分别为 ( 332 16± 49 94)nm、( 44 2 83± 5 9 15 )nm和 ( 5 94.92± 6 2 .5 3)nm、后二者与 2 4h组比有显著差异 (P <0 .0 0 1)。 2 0、5 0、80 ppmCO处理细胞 2 4h后 ,细胞迁移距离分别为 ( 2 96 13± 5 5 32 )nm、( 2 47.87±5 8.2 3)nm和 ( 2 2 8 5 7± 72 6 8)nm ,除 2 0ppmCO组与对照组无显著差异 (P <0 .0 5 ) ,其余两组均显著低于对照组(P <0 .0 1)。 2 0、5 0、80 ppmCO处理细胞 48h、72h后 ,其迁移距离也显著低于对照组 (P <0 .0 1)。 结论 :大鼠肺动脉平滑肌细胞自身存在迁移情况 ,培养时间愈长 ,迁移距离愈大 ;外源性CO可以显著抑制平滑肌细胞的迁移 ,随着浓度增加 ,抑制作用增强     

MDM2反义寡核苷酸对血管平滑肌细胞MDM2和p53表达的影响

目的:研究小鼠双微体扩增基因(mouse double minute 2;MDM2)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide;ASON)对血管平滑肌细胞MDM2和p53表达的影响,探讨MDM2反义寡核苷酸包埋支架防治支架内再狭窄的可行性。方法:人工合成一段针对MDM2 mRNA的反义寡核苷酸,脂质体包裹不同浓度ASON转染兔血管平滑肌细胞,RT-PCR和Western-blotting检测MDM2反义寡核苷酸对兔血管平滑肌细胞MDM2和p53表达的影响。结果:不同浓度MDM2反义寡核苷酸作用于兔血管平滑肌细胞后,MDM2和p53 mRNA表达量各浓度组之间有显著性差异(P<0.01),MDM2和p53蛋白表达量各浓度组之间有显著性差异(P<0.01)。结论:MDM2反义寡核苷酸体外能够特异性抑制兔血管平滑肌细胞MDM2表达,提高细胞内p53基因表达量,MDM2反义寡核苷酸有望被进一步应用于药洗脱支架研究。     

旋覆花内酯抑制血管平滑肌细胞炎性应答与阻断NF-κB活化有关

应用免疫细胞化学染色及Western印迹检测血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)环加氧酶-2(cyclo-oxygenase-2,COX-2)表达、NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)水平和NF-κBp65核转位的变化;电泳迁移率改变分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)确定旋覆花内酯(1-o-acetylbritannilactone,ABL)对核内NF-κBp65与DNA调控元件的结合活性的影响。结果表明,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理的VSMC,p65核转位加快,细胞核内的NF-κBp65水平快速升高,同时伴有IκB-α的减少;用ABL预处理VSMC后,LPS诱导的p65核转位增加及IκB-α减少受到明显抑制,抑制作用呈剂量依赖性。EMSA结果显示,LPS处理VSMC,其核蛋白与含有NF-κB结合位点的探针的结合活性升高;而用ABL预处理的VSMC,LPS诱导的核蛋白与探针结合活性的升高受到明显抑制。进而,ABL对NF-κB活化启动的下游炎性基因COX-2表达也具有较强的抑制效果。因此,ABL是一种抗炎物质,通过抑制NF-κB活化和炎性基因COX-2的表达而减弱或消除LPS诱导的VSMC炎症应答反应。     

平滑肌细胞迁移的肌球蛋白轻链非磷酸化途径

为了阐明平滑肌细胞迁移存在肌球蛋白轻链非磷酸化调节途径,研究花生四烯酸(arachidonicacid,AA)对肌球蛋白轻链非磷酸化状态下平滑肌细胞迁移的影响及其相关的信号传导途径.经Boyden小室跨膜迁移实验发现,AA对培养的兔血管平滑肌SM3细胞具有明显的诱导迁移作用.然而,当预先用10μmolL肌球蛋白轻链激酶(myosinlightchainkinase,MLCK)特异性抑制剂ML7作用SM3细胞后,发现AA对SM3细胞仍然具有明显的诱导迁移作用,并呈剂量依赖性,这种诱导作用可被细胞外信号调节激酶12(ERK12)的特异性抑制剂PD98059或磷脂酶C(PLC)的特异性抑制剂U73122所拮抗.此外,Ⅱ型肌球蛋白抑制剂blebbistatin(BLB)可部分抑制“非磷酸化”状态下AA的诱导迁移作用.经Western印迹检测显示,10μmolLML7可完全抑制SM3细胞中20kD肌球蛋白轻链(MLC20)磷酸化,并且加入AA后MLC20仍为非磷酸化状态.应用免疫荧光染色法观察肌动蛋白在SM3细胞中分布的变化,发现在AA作用下肌动蛋白呈细胞边缘聚集现象,有伪足形成,细胞形态表现为迁移状态.预先用ML7作用后再加入AA,肌动蛋白的分布与上述结果相同.研究结果初步表明,在平滑肌细胞迁移的作用途径中,在MLC磷酸化调节途径受到抑制时,AA可诱导MLC非磷酸化的平滑肌细胞发生迁移,其分子机理可能与ERK12和PLC信号传导途径有关,非磷酸化的肌球蛋白直接参与了该迁移过程.