中国北方人群谷胱甘肽转硫酶P1基因多态性及其与胃癌遗传易感性的关系

为了分析中国北方人群谷胱甘肽转硫酶P1基因(glutathione-S-transferase P1, GSTP1)多态性分布, 同时探讨GSTP1基因多态性及其与幽门螺杆菌(H. pylori)既往感染联合作用对胃癌发病风险的影响, 采用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测1,612例外周血DNA GSTP1的多态性; 采用ELISA方法检测血清H. pylori IgG。结果显示, (1) 中国北方人群GSTP1基因Val等位基因分布频率为22%, 胃癌高、低发区GSTP1 Val等位基因分布频率有显著性差异(0.23/0.20); (2) 以Ile/Ile基因型为参照组与其他两种基因型比较进行胃癌的风险分析, 结果显示携带Val/Val基因型的个体患胃癌的危险性最大, 其OR为5.588 (3.256 ~ 9.591); 携带Val等位基因的个体患胃癌危险性是非携带Val等位基因个体的1.587倍; (3) 以H. pylori IgG(-)并携带GSTP1基因纯合野生型(Ile/ Ile)的个体为参照, H. pylori IgG(+)并携带纯合多态基因型(Val/Val)的个体患胃癌的风险最高, OR为17.571(6.207 ~ 49.742)。说明GSTP1 Val等位基因的分布存在人群及地区差异。携带GSTP1 Val等位基因的个体胃癌发病风险增高。GSTP1 Val等位基因纯合型与H. pylori感染对于胃癌的发生具有交互作用。     

草鱼呼肠孤病毒在CIK细胞中复制及形态发生的研究

以草鱼呼肠孤病毒(GCRV)感染的草鱼肾细胞系(CIK)为模型,进行了草鱼呼肠孤病毒在细胞内的形态发生的研究.当病毒以感染复数为5～10PFU/CELL感染CIK细胞时,在病毒感染细胞4h以内的切片中,可观察到脱去部分外层衣壳的不完整病毒颗粒.感染细胞8h,可观察到浆胞内病毒发生基质,其内含有大量的直径约50nm的亚病毒颗粒,无外层蛋白结构.感染12～16h后,这些亚病毒颗粒装配上外层蛋白结构,形成直径为72nm左右的成熟的病毒粒子.病毒感染细胞8h后,开始出现典型的病毒包含体,16～20h小时病毒包含体裂解,继而释放出有感染性的子代病毒颗粒.该结果有助于对GCRV致病机理的了解.     

MMP2在胃癌侵袭和转移中的作用

目的 探索MMP2在胃癌侵袭和转移中的作用,以期为胃癌转移提供新的预测指标及治疗靶点。方法 选择胃癌细胞系MKN-1转染慢病毒,使MMP2低表达,获得细胞系sh-MMP2,并通过RT-PCR及Western Blot检测转染后MKN-1细胞中MMP2表达情况。进一步通过细胞划痕实验、Transwell、CCK8实验分别检测MMP2低表达后细胞迁移能力、侵袭能力、增殖能力变化。利用裸鼠建立sh-MMP2细胞系异种移植模型及转移模型,观察MMP2低表达后体内肿瘤生长变化及体内转移能力变化。通过RT-PCR及Western Blot检测MMP2对EMT及细胞凋亡的影响。结果 MMP2低表达后胃癌细胞迁移能力(P<0.05)、侵袭能力(P<0.01)、增殖能力(P<0.05)均下降。体内实验结果显示MMP2低表达可显著减缓肿瘤生长及体内转移(P<0.01)。进一步实验表明降低MMP2的表达,可抑制细胞EMT过程并增加细胞凋亡。结论 MMP2低表达可通过抑制EMT过程及增加细胞凋亡,减弱胃肿瘤细胞迁移能力、侵袭能力和增殖能力,抑制胃癌的发展。     

中药治疗胃癌癌前病变的实验研究进展

试从动物模型研究和机理研究两方面探讨中药治疗胃癌癌前病变的实验研究进展,分析了存在的问题。     

小麦耐盐细胞系耐盐性分析

通过一步筛选获得了耐盐（１．０％,ＮａＣｌ）的小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ａｅｓｔｉｖｕｍ）细胞系（Ｓｒ１）,当ＳＲ１在含１．０％,ＮａＣｌ的培养基上继代半年后,钭其中的一部分移入无盐培养基代１０次,得到细胞系ＳＲ２。无论是在正常还是办迫条件下,ＳＲ１的鲜重增量／克鲜重、脯氨酸及可溶性蛋白含量均高于原始型（ＳＮ）,而含水量均高于原始型（ＳＮ）,而含水量、Ｋ＾＋及可溶性糖含量却低于ＳＮ。Ｎａ＾＋和Ｃｌ＾     

茉莉酸甲酯对中国红豆杉胚性细胞紫杉醇生物合成的影响

紫杉醇(taxol)是一种复杂的二萜类生物碱,最初是从红豆杉类(Taxus)植物的树皮中分离出来的。紫杉醇作为具有广谱抗肿瘤活性的药物而得到广泛的临床应用,成为当今世界上有效的抗癌药物之一,但其天然资源十分稀少,解决其药源问题就显得非常重要。目前,普遍认为采用红豆杉细胞悬浮培养生产紫杉醇是很有希望的途径之一。而提高红豆杉细胞生长速率以及细胞中紫杉醇的含量是实现细胞悬浮培养生产紫杉醇的两个关键因素,笔者研究了茉莉酸甲酯(methyl-jasmonate,简称MJ)在红豆杉细胞培养中的代谢调节作用。茉莉酸甲酯是茉莉属(Jasminum)中的素馨花…     

家蚕胚胎细胞系BmE-SWU2的建立及其生物学特性研究

家蚕反转期胚胎组织经过一年多的原代培养,建立了BmE-SWU2细胞系。该细胞系细胞呈短梭形或圆形,细胞较小,属上皮型贴壁生长细胞系;细胞生长速度快,铺平率高于80%,繁殖力强,细胞群体倍增时间为51.8 h。BmE-SWU2细胞系的二倍体细胞（2n=56）比例达到89.76％,属二倍体细胞系,其染色体具有鳞翅目昆虫染色体的典型特征,中期染色体呈短杆状或颗粒状。BmE-SWU2细胞系对BmNPV高度敏感,TCID₅₀为1.581×10^-7。     

犬2型腺病毒E1转化细胞的建立

为建立能表达犬2型腺病毒(CAV2)E1基因的辅助细胞,本研究用含CAV2E1基因的重组质粒pcE1t对DK细胞进行转染,经G418的筛选,得到26个细胞克隆。用CAV2E1A特异引物对各细胞克隆进行PCR和RTPCR检测,PCR结果表明转染后的细胞克隆都能扩增出536bp的特异性片段,但仅有6株为RTPCR强阳性,能扩增出652bp的特异带。再对RTPCR强阳性的细胞克隆进行Westernblot分析,最终挑选到一个既能转录E1A基因,又能表达E1B19kD蛋白的克隆细胞株(DKE1)。     

稳定表达乙型肝炎病毒G145R变异表面抗原细胞系的建立

构建可以在真核细胞表达G145R HBsAg的重组质粒PCI-HBs145.用此质粒转染Hela细胞,经克隆化培养以及G418筛选,建立稳定表达G145R HBsAg的细胞系.ELISA检测表明表达G145R HBsAg与野生型HBsAg在免疫反应性上有较大的差异.生物学性状研究结果表明稳定表达G145R HBsAg的2A8细胞纯度好,遗传性状稳定.     

小鼠胚胎干细胞hprt基因的定位致变

利用DNA的同源重组原理,通过基因打靶技术,在小鼠胚胎干细胞(ES细胞）中将pMC1-neo导人hprt座位,实现了基因组内指定基因的定位致变．通过电穿孔导人质粒pRV4.0线性化D^A,分别用G418与6-TG筛选HPRT^-突变子．经抗性检验及DNA印迹分析,证明得到了一株预期的定位转化细胞,转化效率为1.32 x10^-8载体的非同源序列对定位致变的效率和整合方式没有影响,由于采取了有效的措施,所获HPRT^- ES细胞株仍维持了未分化和二倍体状态,保留了胚胎干细胞的特性．