痘苗病毒诱导HeLa细胞的凋亡

痘苗病毒感染ＨｅＬａ细胞后形态学上出现了较典型的细胞凋亡特征,电泳分析显示出ＤＮＡ阶梯,用ＤＮＡ断裂原位检测技术发现其染色质断裂主要存在于核周,与染色质凝聚位置相似。     

细胞凋亡过程中bcl-2基因的甲基化

为探讨凋亡过程中,ｂｃｌ－２基因下调与该基因甲基化状态的关系,用５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）诱导小鼠成纤维细胞ＮＣ３Ｈ１０,ＴＣ３Ｈ１０及人乳腺癌细胞ＭＣＦ－７的凋亡,分别检测了这三种细胞凋亡过程中ｂｃｌ－２的表达变化,与其调控区及编码区的甲基化状况．我们曾观察到５－Ｆｕ作用２４～４８ｈ出现细胞存活率下降,ＤＮＡ梯状断裂及细胞周期凋亡峰显现等典型凋亡现象．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交显示,在５－Ｆｕ作用１２ｈ时ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ水平已明显降低．由此,我们用小鼠ｂｃｌ－２（ｍｂｃｌ－２）及人ｂｃｌ－２（ｈｂｃｌ－２）基因调控区ＰＣＲ扩增片段及ｂｃｌ－２编码区（ｃＤＮＡ）片段作为探针,与５－Ｆｕ作用１２ｈ的细胞ＤＮＡ的ＭｓｐⅠ／ＨｐａⅡ酶切产物进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,以未作用的细胞ＤＮＡ同样酶切杂交为对照．通过杂交带谱的变化,分析ｂｃｌ－２基因的甲基化状况．结果显示：ｍｂｃｌ－２及ｈｂｃｌ－２在５－Ｆｕ作用１２ｈ后调控区甲基化水平增高,但其编码区甲基化状态皆未出现可检出的变化．上述结果提示：ｂｃｌ－２基因调控区甲基化水平升高可能与该基因下调有关     

小鼠成纤维细胞凋亡过程中P53与bcl-2表达的时序性

为探讨细胞凋亡过程中,ｂｃｌ－２与Ｐ５３,这两种凋亡关键性基因的相互关系,用５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）诱导小鼠正常与恶性转化的成纤维细胞的凋亡,观察了这两种基因在凋亡过程中表达变化的时序．经流式细胞计检测,这两种细胞在５－Ｆｕ作用２４ｈ均出现了凋亡峰,细胞存活率随之下降,ＤＮＡ电泳显现梯状断裂．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果显示,在５－Ｆｕ作用６ｈ后两种细胞Ｐ５３ｍＲＮＡ水平已明显增高,而ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ水平则在作用１２ｈ方明显降低．Ｐ５３上调与ｂｃｌ－２下调的明显时序性,说明Ｐ５３具备作为ｂｃｌ－２基因负调控转录因子的条件．由此,为进一步了解凋亡过程的ｂｃｌ－２基因下调机理提供了线索     

Ca^2＋与细胞凋亡

Ｃａ＾２＋在某些因素诱导的细胞凋亡中起着重要信使作用。细胞内Ｃａ＾２＋浓度上升可来源于胞外Ｃａ＾２＋内汉、内库钙动员或者二者兼之。     

氧胁迫对人肝癌细胞生长分化和凋亡的影响

采用不同浓度的抗坏血酸(50—800μmol/L)和硫酸亚铁(2.5—40μmol/L)系统生成以羟自由基为主的各种程度氧胁迫,使之作用于人肝癌细胞。本文所采用的不同程度的氧胁迫均能抑制癌细胞的生长。低水平氧胁迫可使肝癌细胞失去某些恶性特征,趋向分化,表现为细胞表面对Con-A的凝集力、甲胎蛋白含量、γ-谷氨酰转肽酶和酪氨酸-α-酮戊二酸转氨基酶活性都朝着分化方向变化,差异显著。分化后的细胞克隆形成能力显著降低。在分化过程中,出现一定量的凋亡细胞。随着氧胁迫程度的增高,凋亡细胞增多,表现为非贴壁细胞增多,细胞体积变小,染色质凝缩在核膜边缘,呈新月形,核碎裂,但质膜完整。细胞核中DNA降解成大约21.2kbp大小的大片段DNA。有望通过严格控制氧胁迫程度来减慢肝癌细胞增殖,促进分化和凋亡,使恶性细胞逆转成良性细胞。     

射线诱导在体造血细胞凋亡的量时效关系的研究

以4—10Gy射线在体损伤的小鼠为模型,应用DNA电泳和流式细胞术等方法证实细胞凋亡是射线损伤在体骨髓造血细胞的途径之一,发现射线诱导的造血细胞凋亡有明显的量效和时效关系。4、6、8和10Gy照射后,细胞凋亡发生率均表现为升高-降低过程,各剂量诱导的凋亡发生率峰值分别出现在照后12、8、4和4h,6和8Gy诱导的凋亡发生率已达最高水平,约为30％,10Gy诱导的凋亡反而要低。上述结果表明,诱导细胞凋亡是射线损伤骨髓造血细胞的一个重要途径,而且凋亡的发生率受照射剂量和照后时间的影响。因此,深入研究射线诱导的细胞凋亡,将有助于揭示射线损伤造血功能的机理。     

CPP32研究进展

CPP32是一个由277个氨基酸组成分子量约为32KD的蛋白酶。编码CPP32的基因有α、β两种形式,但两种基因形式编码的蛋白酶在功能上相同。CPP32与细胞凋亡密切相关。在蛋白酶级联切割的凋亡过程中,CPP32处于核心位置,可能起非常重要作用。上游蛋白酶对其进行切割加工,使其活化;活化的CPP32又切割加工下游底物,导致细胞凋亡。     

紫檀芪调节Keap-1/Nrf2/HO-1信号通路对非酒精性脂肪肝大鼠氧化应激和细胞凋亡的影响

摘要 目的：研究紫檀芪调节Kelch样ECH关联蛋白1（Keap-1）/核因子E2相关因子2（Nrf2）/血红素加氧酶-1（HO-1）信号通路对非酒精性脂肪肝（NAFLD）大鼠氧化应激和细胞凋亡的影响。方法：将60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、紫檀芪低剂量组（30 mg/kg）、紫檀芪高剂量组（60 mg/kg）、紫檀芪（60 mg/kg）+N-（4-（2,3-二氢-1-（2''-甲基苯甲酰）-1H-吲哚-5-基）-5-甲基-2-噻唑基）-1,3-苯并二氧唑-5-乙酰胺（ML385）（30 mg/kg）组，每组12只。模型组与药物干预组大鼠以高脂饲料饲养诱导NAFLD模型，对照组大鼠以普通饲料饲养，各组连续喂养12周。以紫檀芪和ML385分组处理14 d后（对照组以等剂量生理盐水处理），检测各组大鼠脂代谢指标[三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）及游离脂肪酸（FFA）水平]、肝指数、肝功能指标[谷丙转氨酶（ALT）及谷草转氨酶（AST）]水平、血清白细胞介素（IL）-17、IL-6、IL-10、氧化应激指标[丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及过氧化氢酶（CAT）]水平；原位末端标记法（TUNEL）染色检测各组大鼠肝细胞凋亡率；蛋白免疫印迹法检测各组大鼠肝组织凋亡相关蛋白及Keap-1/Nrf2/HO-1通路相关蛋白表达。结果：与对照组相比，模型组大鼠血清IL-10、SOD及CAT水平、肝组织Nrf2、HO-1、Bcl-2表达水平显著降低（P＜0.05），TG、TC及FFA水平、肝指数、ALT及AST水平、血清IL-17、IL-6、MDA水平、肝细胞凋亡率、肝组织Keap-1及Bax表达水平显著升高（P＜0.05）。与模型组相比，紫檀芪低、高剂量组大鼠血清IL-10、SOD及CAT水平、肝组织Nrf2、HO-1、Bcl-2表达水平均升高（P＜0.05），TG、TC及FFA水平、肝指数、ALT及AST水平、血清IL-17、IL-6、MDA水平、肝细胞凋亡率、肝组织Keap-1、Bax表达水平均降低（P＜0.05）；与紫檀芪低剂量组相比，紫檀芪高剂量组大鼠血清IL-10、SOD及CAT水平、肝组织Nrf2、HO-1、Bcl-2表达水平升高（P＜0.05），TG、TC及FFA水平、肝指数、ALT及AST水平、血清IL-17、IL-6、MDA水平、肝细胞凋亡率、肝组织Keap-1及Bax表达水平降低（P＜0.05）；与紫檀芪高剂量组相比，紫檀芪+ML385组大鼠血清IL-10、SOD及CAT水平、肝组织Nrf2、HO-1、Bcl-2表达水平降低（P＜0.05），TG、TC及FFA水平、肝指数、ALT及AST水平、血清IL-17、IL-6、MDA水平、肝细胞凋亡率、肝组织Bax表达水平升高（P＜0.05）。结论：紫檀芪可能通过激活Keap-1/Nrf2/HO-1信号通路，改善NAFLD大鼠脂代谢水平，调节炎症反应及氧化应激，减轻肝组织脂肪变性及细胞凋亡。     

蒙古苍耳抑制坏死性凋亡(necroptosis)活性部位化学成分研究(Ⅰ)

苍耳(Xanthium strumarium)为民间传统药用植物，本课题组前期研究发现蒙古苍耳大孔树脂50%乙醇洗脱部位具有显著的抑制细胞坏死性凋亡(necroptosis)活性。为明确蒙古苍耳(X.mongolicum)的活性成分，活性部位采用反复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、制备高效液相色谱、重结晶等多种方法进行分离和纯化，运用NMR、MS等波谱方法并结合文献数据对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果表明：从该活性部位中分离得到14个化合物，分别鉴定为hydroxydihydrobovolide(1)、树莓酮(2)、水杨醇(3)、对羟基苯乙酮(4)、对羟基苯甲醛(5)、咖啡酸乙酯(6)、阿魏醛(7)、异东莨菪素(8)、3,3′-bis(3,4-dihydro-4-hydroxy-6-methoxy-2H-1-benzopyran)(9)、axillarin (10)、槲皮素(11)、(+)松脂素(12)、β-谷甾醇(13)和棕榈酸(14)。化合物1-4、7-10均为首次从苍耳中分离得到。     

sTRAIL蛋白原核表达载体的构建、表达及抗肿瘤活性研究

目的:从HL-60细胞中获得了sTrail基因片段,优化蛋白表达条件,并研究其抗肿瘤活性。方法:培养HL-60细胞,提取总RNA,通过RT-PCR扩增sTRAIL蛋白基因片段,并将目的基因克隆至原核表达载体p ET28a上,并电击转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,优化蛋白表达条件,Ni-IDA柱纯化重组蛋白,SDS-PAGE蛋白电泳,胶内酶解质谱鉴定。纯化后的重组蛋白作用HUVEC,He La,Hep-3B,HCT-116,MDA-MB-231,H460细胞检测蛋白生物学作用。结果:DNA测序结果证实成功构建了重组质粒p ET28a-sTrail,SDS-PAGE蛋白电泳,胶内酶解质谱检测显示成功表达sTRAIL蛋白,MTT法和流式细胞术结果显示,sTRAIL蛋白对肿瘤细胞包括He La,HCT-116,MDA-MB-231,H460,Hep-3B细胞有良好的生物活性,对正常的HUVEC细胞无毒性。结论:成功构建可以高效表达sTRAIL蛋白的原核表达载体,优化蛋白的表达和纯化后所得sTRAIL蛋白具有良好的抗肿瘤生物活性,为研究和发展利用sTRAIL蛋白作为临床治疗抗肿瘤药物提供了重要基础。