人源性天然抗体库的构建及淀粉样蛋白Aβ1-42寡聚体单链抗体的筛选和鉴定

本研究旨在利用噬菌体展示技术构建人源性天然抗体库,以可溶性Aβ1-42寡聚体对抗体库进行筛选获得针对低分子量Aβ1-42寡聚体的特异性单链抗体.利用RT-PCR法从10个健康人外周血淋巴细胞中得到全套人抗体VH和VL基因,经过重叠延伸PCR将VH和VL连接得到scFv片段,将scFv片段酶切后克隆至pCANTAB5E噬菌体载体,电转化TG1感受态菌,获得库容为2.5×109单链抗体库.经辅助噬菌体M13K07拯救,以可溶性Aβ1-42寡聚体为抗原,对抗体库进行4轮筛选,ELISA法筛选特异性识别Aβ1-42寡聚体的阳性克隆,将筛选到的阳性克隆B19转化至E coliHB2151菌,诱导表达可溶性scFv抗体.SDS-PAGE及Western blotting分析结果显示可溶性scFv抗体获得了正确表达,且能够与Aβ1-42三聚体及纤维特异性结合,亲和力(Kd)为9×10-6 mol/L.Aβ1-42寡聚体特异性单链抗体的获得为老年性痴呆(AD)的治疗研究奠定了基础.     

基于氨基酸组成分布的蛋白质同源寡聚体分类研究

基于一种新的特征提取方法——氨基酸组成分布,使用支持向量机作为成员分类器,采用“一对一”的多类分类策略,从蛋白质一级序列对四类同源寡聚体进行分类研究。结果表明,在10-CV检验下,基于氨基酸组成分布,其总分类精度和精度指数分别达到了86.22%和67.12%,比基于氨基酸组成成分的传统特征提取方法分别提高了5.74和10.03个百分点,比二肽组成成分特征提取方法分别提高了3.12和5.63个百分点,说明氨基酸组成分布对于蛋白质同源寡聚体分类是一种非常有效的特征提取方法;将氨基酸组成分布和蛋白质序列长度特征组合,其总分类精度和精度指数分别达到了86.35%和67.23%,说明蛋白质序列长度特征含有一定的空间结构信息。     

基于PNA的最大独立集问题的DNA计算模型

肤核酸(Peptide Nucleic Acid)是人工合成的拔酸(DNA)的类似物.PNA能够特异地、稳定地与DNA杂交以及其独特的性质,使得PNA广泛应用在分子生物学中.本文提出了一种基于PNA的最大独立集问题的DNA计算模型,利用单链PNA被逐步褪火到单链DNA分子上,解决了一个最大独立集问题的实例.该模型的解空间只有一种类型的DNA分子,计算经m步生物操作产生问题的解(其中m=|E(G)|),最后利用鞭子PCR(whiplash PCR)原理以及凝胶电泳读解.     

肽核酸的研究现状

肽核酸 (ｐｅｐｔｉｄｅｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄ ,ＰＮＡ)是一种新型的ＤＮＡ结构类似物 ,是继寡聚脱氧核苷酸 (ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ,ＯＤＮ)以来更为有效和稳定的反义和反基因制剂。ＰＮＡ与核酸的结合具有高度的特异性和高度的亲和力 ,且不易被核酸酶和蛋白酶降解。ＰＮＡ对转录和翻译的调节 ,可有效抑制癌基因的表达、病毒基因的复制和转录。ＰＮＡ的广泛生物学效应显示其在基因治疗方面有很好的应用前景。1 .ＰＮＡ的分子结构及其理化特性1 .1　ＰＮＡ的分子结构　　ＰＮＡ是一种新的ＤＮＡ结构类似物 ,其结构式…     

肽核酸在基因诊断和治疗中的研究进展

肽核酸是一种以多肽为骨架,类似核苷酸的物质。它不带电荷,能抵抗核酸酶和蛋白酶的降解;它与DNA或RNA杂交特异性很强,可与靶基因形成稳定的三螺旋结构。肽核酸能够抑制基因的复制、转录、逆转录和翻译过程,在基因诊断及治疗方面有着广泛的用途。     

老年痴呆症的突触和神经环路机制

老年痴呆症的主要临床表现为认知功能严重受损,其原因可能是皮层与海马内的突触结构或功能障碍及神经环路活动异常所致。可溶性Aβ尤其是Aβ寡聚体(而不是沉积在脑组织中的淀粉样斑块)可能首先选择性地攻击GABA能抑制性神经元,使海马或皮层内兴奋性神经元由于所受抑制减弱而过度兴奋,进而导致神经环路或网络活动异常。神经网络异常又通过一系列的代偿反应引起突触传递和突触可塑性受损。正常生理水平的tau通过不同的机制在介导Aβ的突触及神经环路毒性中扮演重要角色。     

肽核酸寡聚体研究进展

肽核酸寡聚体是一类９０年代发现的新型ＤＮＡ同类物,在生物化学和分子生物学领域已得到广泛应用。本文对ＰＮＡ寡聚体的结构、特性、合成、应用及设计等研究进展情况作了扼要介绍     

肽核酸

肽核酸（ＰｅｐｔｉｄｅＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓ,ＰＮＡｓ）,是一类用蛋白质骨架代替核酸中的磷酸核糖骨架而形成的新型分子,它不仅保留了与互补的ＤＮＡ或ＲＮＡ配对结合的特性,而且其特异性和亲和性都比相应的寡核苷酸高。同时又能抵抗所有核酸酶和蛋白酶的降解,在分子生物学和医药领域有广泛的应用前景。本文就ＰＮＡ的结构、特性以及应用等方面予以综述     

促进β-淀粉样肽聚集为目标的阿尔茨海默病治疗新策略探讨

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)是一种具有复杂病理学特征的老年失智症.淀粉样蛋白级联假说与寡聚体毒性假说在解释AD病理机制方面占据主导地位. AD患者数量庞大,但目前尚未发现治疗AD的有效疗法,多数药物在Ⅲ期临床试验的结果不够理想.本文对影响β-淀粉样肽(β-amyloid, Aβ)聚集的国内外相关研究进展进行总结,并阐述小分子化合物加速Aβ纤维形成过程的可能机理.这一过程与传统疗法相悖却在动物模型中取得了相当好的疗效,意味着促进Aβ聚集可能成为AD治疗的新策略,为新药开发指明了新方向.