狂犬病毒核蛋白（NP）的纯化及其免疫原性的研究

对重组痘苗毒和重杆状病毒表达的狂犬病毒NP及原代地鼠肾细胞培养的狂犬病毒核衣壳蛋白（RNP）、先经Sepharose CL 4B分子筛柱初步提纯,再经抗狂犬病毒NP McAB 2C12-S-epharose 4B亲和层析柱纯化分离,经ELISA、SDS－PAGE电泳和Western-Blot分析证实,获得了高纯度和免疫反应性的NP和RNP。以相同剂量的纯化蛋白免疫小鼠,RNP和两种重组NP均可诱生特异的抗NP抗体,三种蛋白间无明显差异;狂犬病毒CVS株攻击保护实验结果显示,三种蛋白免疫的小鼠存活率约为50％;两种重组NP的免疫反应性和免疫原性与天然狂犬病毒RNP相似。     

人干细胞生长因子Ca2+依赖糖识别结构域缺失突变体的重组表达及生物学活性的初步探讨

本作已有的研究结果证明,完整的人干细胞生长因子(hSCGF)没有种属特异性,即可以作用于小鼠骨髓造血细胞。这一点与在Ca^2 依赖糖识别结构域(CRD)缺失了78个氨基酸残基的截短分子(hSCGFβ)有所不同。本研究从hSCGF全长cDNA中完全删除了CRD结构域编码序列,进一步探讨CRD结构域的生物学功能。由于该突变体序列GC含量较高．因此将该缺失突变体序列克隆在GST融合表达载体中进行融合表达。通过低温(28℃)诱导,表达产物主要以可溶蛋白的形式存在。利用亲和层析纯化CRD结构域完全缺失的hSCGF突变体融合蛋白,通过检测重组突变分子的协同刺激造血活性有无改变来初步探讨CRD结构域在hSCGF分子中的生物学功能。研究结果表明,去掉完整CRD结构域的突变分子仍然具有造血刺激活性。据此推断CRD结构域在hSCGF分子中可能对于受体配体结合起辅助作用。     

光学相干层析成像技术用于裸鼠皮肤霉菌感染研究

利用中心波长为850 nm的宽带光源SLD实现了纵向分辨率为8μm的光学相干层析成像系统。系统采用傅里叶域光学延迟线实现了深度扫描速度为160 mm/s,成像深度为3 mm。获得了裸鼠皮肤霉菌感染部位和健康皮肤的光学相干层析(optical coherence tom ography,OCT)图像,皮肤病变前后的内部结构信息清晰可见。     

肝癌中CMP-乙酰神经氨酸:GM_3(α2→8)唾液酸转移酶(GD_3合成酶)的研究及纯化的初步报告

本实验室曾报道在所检测的不同种族来源与不同致癌剂所诱发的肝细胞肝癌中均有神经节苷脂GD_3组份的明显增高,本文就这一现象的机制进行了探讨。实验结果表明在人肝癌手术标本、人肝癌细胞株SMMC,3′-甲基奶油黄(3′Me-DAB)和二乙基亚硝胺(DENA)所诱发的大鼠肝癌以及大鼠肝癌株BERH-2中GD_3合成酶的活性均有不程度的增高,同对GD_3前体的合成酶(GM_3合成酶)的活性也有所增高。这就提示肝癌中GD_3增高的原因之一在于GD_3合成酶的活性增高与前体供应充足的结果。另外,本文还对GD_3合成酶的提纯做了初步尝试。主要采用Tritonx-100抽提和CDP-hydrazide Sepharose 4B亲合层析的方法从二乙基亚硝胺诱发的大鼠肝癌中提纯了GD_3合成酶。提纯倍数为12500倍,产率0.4％。提纯的GD_3合成酶在醋酸纤维膜上经等电聚焦电泳鉴定示单一条带,其pI值为5.25左右。关于糖脂唾液酸转移酶的纯化工作目前还未见报道。     

内皮细胞生长因子的提取纯化和鉴定

通过CM-纤维素C50,肝素交联琼脂糖6B凝胶及高效液相色谱将内皮细胞生长因子高度纯化.结果表明,该因子分子量15 500道尔顿,等电点pH 6.0,能同时促进人脐静脉内皮细胞及L 929成纤维细胞生长.     

用聚焦层析法纯化人巯基蛋白酶抑制肽C-hCRI_c

以肾衰病人尿为材料,通过碱变性、酸变性和热变性除去部分杂质和尿蛋白。然后用羧甲基-木瓜蛋白酶-琼脂糖4B亲和层析,最后用多缓冲剂聚焦层析,把人的巯基蛋白酶抑制肽C(human cysteine proteinase inhibitor C,简称 hCPI_C)和其他的hCPI_C分开,制备得高纯度、高活性的hCPI_C。在SDS-PAGE中为均一条带,每mg蛋白可抑制50单位木瓜蛋白酶活性的50-63％。     

免疫亲和层析法纯化T_4RNA连接酶

本文描述了一种新的、简化了的纯化T_4RNA连接酶的方法——免疫亲和层析法.利用这种纯化方法得到的酶,经SDS-凝胶电泳,得到一条主带。将此酶与~(32)pCp及CpGpGpA(或tRNA)一起进行连接反应,未见到RNase杂酶的降解作用。用此方法制备的酶,可用于确定顺序的核酸的合成。     

微囊藻毒素-LR的定量荧光纳米微球免疫层析检测北大核心CSCD

研制了一种快速、定量荧光免疫层析试纸条,用于检测水体中MC-LR含量。基于竞争法原理,采用荧光免疫层析技术,建立MC-LR免疫层析法,并对该试剂考察其灵敏度、准确度、特异性、稳定性等指标。经过对免疫层析试纸条制备参数的优化,即检测线抗原浓度、微球标记量和结合垫微球浓度的选择,加样15 min后,获得了MC-LR荧光免疫层析法的工作直线,方法灵敏度0.195μg/L,回收率99.4%,变异系数小于10%,与MC-LF交叉反应率低,与市售试剂盒检测结果一致,试剂在37℃稳定保存6 d。本研究研制的荧光免疫层析试剂灵敏、稳定、准确,可快速、定量检测水样中MC-LR含量,操作便捷。