免疫层析法检测2019新型冠状病毒抗体假阳性的原因分析和对策

2019年12月,新型冠状病毒(SARS-CoV-2)首次被发现并很快引起全球大流行,SARS-CoV-2感染的早期诊断对疫情防控至关重要.胶体金免疫层析法检测SARS-CoV-2抗体是诊断新型冠状病毒肺炎的重要标准之一.该方法具有操作简便,报告快速,不需要仪器设备等优点.然而,该方法也存在假阳性较多的问题,给临床诊断带来了很大的困惑.本文分析和总结了在临床中采用胶体金免疫层析法检测SARS-CoV-2抗体产生假阳性的原因.结果表明最为常见的内源性干扰包括类风湿因子、嗜异性抗体、人抗动物抗体、溶菌酶、补体和交叉抗原.外源性干扰主要为标本凝固不全,标本污染和试剂盒反应体系优化不足.内源性干扰可以通过稀释、封闭和酶切等方法降低非特异性结合来减轻;消除外源性干扰需操作者严格按照实验室操作规程规范操作.此外,将兔抗μ链和/或γ链抗体F(ab')2作为固相载体的包被抗体,采用含非特异性兔IgG的Buffer,也能有效降低内源性干扰物造成的假阳性.     

噬菌 展示法筛选与EphB2结合的短肽

酷氨酸蛋白激酶受体ＥｐｈＢ２的Ｉｇ类似区,克隆到融合表达闰载体ｐＥＴ２８ａ中,阳性克隆经ＩＰＴＧ诱导,表达出氨基端带６个连续组氨酸残基的融合蛋白。利用Ｎｉ－ＮＴＡ金属螯合亲和层析法有变性条件下对表达的蛋白进行纯化,纯度大于９４％。以此纯化蛋白为靶,将其包被于ＥＬＩＳＡ板上,经过三轮亲和筛选,从噬菌体随机７肽库中筛选到１９个具有ＥｐｈＢ２活性的重组噬菌体克隆,对阳性噬菌体克隆的短肽序列进行了分析。     

一种新型的琼脂糖疏水层析介质开发及其在重组乙肝表面抗原(CHO-HBsAg)分离纯化中的应用

以粒径均一的国产高交联度快速流琼脂糖为基质,采用活化、交联等步骤合成了针对分离纯化CHO-HBsAg的3C间臂的丁基琼脂糖疏水介质,通过控制丁基配基密度提高分离HBsAg的纯化倍数和回收率,获得了纯化倍数约20、HBsAg回收率约80%的介质。评估了合成介质的理化性质,流速为500cm/h时柱压力小于0.06MPa,表明介质具有较高的机械强度和良好的流动性能,介质经过酸、碱、变性剂等处理后化学性质稳定。将介质合成工艺进一步放大到2L介质/批,应用到HBsAg分离纯化的三步层析整和工艺中,结果表明,批量合成的疏水介质,HBsAg回收率与进口介质相当,HBsAg终产品纯度在95%以上,符合国家药典要求。最后考察了介质合成批次间的配基密度的可控性和单批次合成介质的重复使用性,结果表明,合成工艺和介质的重复性能满足产业化要求,这种成本低的介质有望替代目前工业生产广泛使用的进口疏水介质。     

转基因烟草中的海藻糖测定

The \%E.coli\% trehase synthalose gene(\%otsA\%) was transferred into \%Nicotiana tabacum\% mediated by \%Agrobacterium\%, but the method for detecting low concentration of trehalose in transgenic plant was not available.The high performance liquid chromatograph(HPLC) with evaporative light\|scatting detector (ELSD) using water:methyl cyanide(1∶2\^6 v/v) as mobile phase was established in this work. An ODS column Zorbax RX\|SIL was employed. The trehalose detection limits of ELSD was 5mg/L. From the linear…     

神经元特异性烯醇酶和癌胚抗原胶体金免疫层析联合检测

目的：应用双抗夹心胶体金免疫层析方法,实现对神经元特异性烯醇化酶（NSE）和癌胚抗原（CEA）两种肺癌肿瘤标志物的快速联合检测。方法：采用柠檬酸三钠还原法制备20nm胶体金颗粒,并分别对鼠抗NSE、CEA单克隆抗体进行标记,分别与之相配对的另一种单克隆抗体被喷在硝酸纤维素膜（NC膜）上,制成免疫层析检测试条。溶液中的抗原NSE、CEA与金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上固定的抗体结合形成肉眼可见的红色线条。结果：该试纸条只与NSE、CEA有特异性反应,与CA125、CYFRA21-1、TPA等肺癌标志物无交叉反应。标准样品中两种抗原的检测灵敏度分别可达到5ng/mL和3ng/mL。结论：胶体金免疫层析技术检测NSE、CEA特异性强、灵敏度高、简便快速,不需特殊仪器设备,有广泛应用价值。     

人睾丸前列腺素D合成酶在毕赤氏酵母中的表达、纯化及鉴定

L PGDS是一种双功能蛋白 ,即催化PGD2产生和运输亲脂 疏水分子 .L PGDS主要分布于脑和男性生殖器官 ,并分泌到脑脊液、血清、精液、尿液等体液中 .测定体液中L PGDS的含量可辅助诊断一些神经系统疾病、生殖系统疾病、心血管疾病和肾脏疾病等 .在毕赤氏酵母中表达人睾丸前列腺素D合成酶 ,以利于进一步的生物学功能及临床应用研究 .用PCR的方法从质粒pGEX 2T htL PGDS上扩增出人睾丸L PGDS成熟肽基因编码序列 ,经测序证实后 ,将其插入到质粒pPIC9中 ,构建该基因的酵母表达质粒 .电转化毕赤氏酵母GS1 1 5 ,经甲醇诱导后 ,可实现L PGDS的高效、分泌性表达 .镍离子亲合层析法对表达上清进行纯化 ,SDS PAGE分析证实 ,在 2 7kD处有重组蛋白的表达 ,表达量为 2 7mg L .纯化蛋白可与视黄酸结合 ,使其紫外吸收波谱发生红移     

生物组织X光照片圆层析合成法的研究——Ⅰ、优化断层片的数学方法

在圆层析合成法(Circular Tomosynthesis)中;根据零阶贝塞尔函数(Bessel Function),离开所研究的层析平面一定距离的物体细节就变得模糊.其模糊程度取决于该系统的传递函数,利用贝塞尔函数的正交性;可以特定一个具有不同开角的采样圆锥集合.使用Fourier-Bessel级数可以合成一个具有最佳边瓣抑制的窗函数.对于具有固定数目的采样圆锥,并且在有限区间上集中最多能量的窗函数是圆长球函数(Circular Prolate Spheroidal Function).     

鼠肝中金属硫蛋白的纯化

旨在探索鼠肝中金属硫蛋白(MT)提取工艺并加以改进。按照经典方法工艺提取MT,用中空纤维柱超滤方法加以改进,依据MT自身特点进行分离和鉴定。结果显示,粗品符合MT特点:分子量在6.5kD左右;无280nm特征吸收峰,加酸后紫外吸收(200-300nm)肩峰消失;通过离子交换可以实现MT1、MT2的分离;通过原子吸收测定,含有锌、铜、镉3种金属,锌含量最高,具有重要的病理生理意义。因此,与其它方法比较,改进后方法更适宜实验室制备。     

链霉菌M-1菌株所产抑菌活性物质特性的初步研究

用链霉菌M-1菌株所产的抑菌物质进行稳定性试验和极性试验,稳定性试验表明该菌株连续传代10次后遗传性稳定,且发酵液在100℃处理60 min,紫外线照射3 min和在碱性条件下处理后其对病原指示菌的抑菌活性基本不减。极性试验表明该物质属于弱碱性水溶性抗生素。本研究为进一步对该抑菌活性物质分离提取工艺和其在实践上的应用,提供了有益的试验数据。     

生物学知识及相关实验方法理解之“微”视角CSCD

教材中生物学知识及相关实验方法往往从宏观角度进行介绍和解释,其中一些让学生难以理解。应用微分思想可以帮助解决这些问题。本文介绍了几个例子,希望能给大家提供参考。