连续流层析技术在亲和层析中的应用及生产放大评估

生物制药行业迅速发展,尤其是上游表达量的增加和规模的扩大,促使上游培养采用连续灌流方式,同时也推动了下游纯化生产工艺相应的采取连续纯化策略.以灌流培养的Fc融合蛋白为例,采用BioSMB PD设备,对比了下游工艺亲和层析捕获步骤中单柱批次纯化和连续流层析纯化的样品纯度和收率,并在此基础上进行小试工艺放大和生产实际用量成...     

大肠杆菌表达的TaqDNA聚合酶的纯化

Taq DNA聚合酶是分子生物学研究中最常用的热稳定DNA聚合酶之一,与其他热稳定DNA聚合酶具有相似的特征,其纯化策略不但有潜在的应用前景,也对同类聚合酶的分离具有指导意义。已报道的适宜大量制备Taq酶的方案所需成本较高,而文章介绍了一种利用国产阳离子交换树脂廉价制备Taq酶的方案。在本方案中,采用热变性、(NH4)SO4沉淀与724离子交换层析分离大肠杆菌表达的Taq酶,约18 g Na型树脂干粉一次可回收比活约8 131.98 U/mg、总酶活2.2×105U、近27.07 mg Taq酶。纯化的产率可达48.92%,纯化倍数约59.35。所制酶SDS-PAGE电泳只检测到94 kDa单一蛋白条带,未检测到DNA核酸酶污染,与商品酶的PCR扩增能力无区别。此纯化方法成本低,适合实验室一般性的制备和生产应用。     

云参化学成分研究——Ⅳ.云参、党参脂溶性成分和水溶性成分的薄层层析图谱比较

本文比较了云参和党参脂溶性成分和水溶性成分的薄层层析图谱。结果表明,云参、党参的脂溶性成分(乙醚、乙酸乙酯提取物)和水溶性成分(95％乙醇、水提取物、糖类成分)均基本相同,为云参代替党参使用提供了可靠的科学依据。     

土拉弗朗西斯菌胶体金免疫层析快速检测方法的建立

目的建立胶体金免疫层析技术快速定量检测土拉弗朗西斯菌。方法利用胶体金标记和双抗体夹心免疫层析技术,建立土拉弗朗西斯菌的快速检测方法,评价其特异性和敏感性,并拟合检测曲线进行定量检测。在面粉、饼干、果冻、梨汁等食品样品中添加土拉弗朗西斯菌的FopA蛋白模拟污染样品,评价该方法对固体、半固体、液体等食品样品的检测能力。结果该法可在10min内完成定性和定量检测,灵敏度为750ng／ml,线性范围750～24000ng/ml、回收率为56．7％-89．2％。结论所建立的检测土拉弗朗西斯菌的胶体金免疫层析方法,能快速、灵敏、特异、准确地检测样品中的土拉弗朗西斯菌,适用于现场快速检测。     

包涵体纯化技术

20世纪90年代以来,基因重组技术得到很大的发展,基因工程产品的分离成本约占其全部成本的60%～80%,因此纯化技术越来越重要。着重介绍包涵体纯化技术,包括金属亲和层析,凝胶过滤层析,离子交换层析,疏水层析,双水相萃取技术和反胶团相转移技术近年来的进展情况。     

疏水作用层析纯化脂肪酶

报道了以对β-硫酸酯己砜基苯胺（SESA）为活化剂制备疏水作用层析剂方法及其柱层析纯化脂肪酶的工艺条件。实验结果表明：活化剂对-β-硫酸酯己砜基苯胺（SESA）最适用量为1．0g／g湿纸纤维素。笨胺：丙酮比为1：4．以0．2mol／L磷酸缓冲液（pH8.0）=1mol／LNaCl为淋洗剂,以0．2mol／L磷酸缓冲液（pH8．0）＋8％吐温80为洗脱刘纯化脂肪酶具有较好的分辨率,酶活回收率64．0％,比活提高6．70倍。     

重组α-半乳糖苷酶的制备工艺研究

α-半乳糖苷酶是B→O血型改造研究中的关键工具酶。在获得了可分泌表达α-半乳糖苷酶的基因工程毕赤酵母菌株的基础上,进行了工程菌株在5L发酵罐中的发酵。发酵液上清中α-半乳糖苷酶活性为80～150U／mL,蛋白浓度为3～4.5mg／mL,比活性约为20-30U／mg。发酵液采用超滤、阳离子交换层析、疏水层析和阴离子交换层析等纯化方法,建立起了规模化生产重组α-半乳糖苷酶的工艺。制备的重组酶纯度经鉴定达98％以上,符合新生物制品的纯度要求。制备的重组α-半乳糖苷酶可有效地将B型红细胞改造成O型红细胞,从而解决了应用此酶开展B→O血型改造研究的关键问题。     

长白山白眉蝮蛇蛇毒PLA2分离纯化及性质鉴定

目的 从长白山自眉蝮蛇粗毒中分离提取了一种新的PLA2,并对其进行了性质鉴定.方法 采用DEAE Sephadex A-25、Sephadex G-75、HPLC等层析方法 ;聚丙烯酰胺凝胶电泳;磷脂酶A2活性测定.结果 得到了一种新的PLA2,分子量在14 kD左右,PLA2比活力为41μmol·mg-1·min-1,最适温度50℃,最适pH8.5左右.结论 长白山白眉蝮蛇毒存在一种新的PLA2同源物,具有PLA2活性,有较好的耐热、耐酸性.     

硅藻土和壳聚糖纯化藻蓝蛋白及产品性质研究

本文使用价格低廉、研究极少的硅藻土和壳聚糖分别对藻蓝色蛋白粗提液进行了初步纯化,得到了良好的结果。SDS-PAGE电泳测得产品α亚基和β亚基的分子量分别约为16000、19000 u,符合文献报道。藻胆蛋白差示扫描热分析(DSC)结果显示变性温度峰值为56.96,70.32℃,热效应△Hd分别为-1.16和-0.5621 J/g,表明藻胆蛋白亚基间的键能较低,稳定性差。此外,还研究了Cu(Ⅱ),Cr(Ⅵ)对藻蓝蛋白的荧光淬灭作用,对找到一种快捷准确测量某些重金离子浓度的方法具有启发意义。